木質(zhì)素降解真菌的篩選及其對(duì)森林地表可燃物的降解效果

（東北林業(yè)大學(xué) a.林學(xué)院；b.森林生態(tài)系統(tǒng)可持續(xù)經(jīng)營(yíng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150040）

森林可燃物是森林火災(zāi)發(fā)生的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是發(fā)生森林火災(zāi)的必要條件[1]。我國(guó)是森林火災(zāi)嚴(yán)重的國(guó)家之一[2]，在全球氣候變化背景下，我國(guó)森林火災(zāi)形勢(shì)異常嚴(yán)峻：早春火和夏季森林火災(zāi)多發(fā)；林火發(fā)生地理分布區(qū)擴(kuò)大；森林可燃物干燥，極易燃燒，森林火災(zāi)燃燒性加大，林火發(fā)生頻率高等[3-4]。在森林燃燒三要素（森林可燃物、火源與火環(huán)境）中，森林可燃物更易于人為控制，并且便于對(duì)森林防火有效性進(jìn)行合理定量評(píng)價(jià)[5]。森林可燃物是林火傳播的主要載體[6]，同時(shí)也是林火管理的基本依據(jù)。而森林火災(zāi)，特別是高強(qiáng)度的森林火災(zāi)，其危害程度主要取決于森林可燃物載量[7]。因此，如何有效地降低森林可燃物載量，從而減少和控制森林火災(zāi)，是現(xiàn)代林火管理中的重要工作。

我國(guó)林火管理者通常通過(guò)機(jī)械清除、計(jì)劃燒除、生物防火等手段減少森林可燃物載量，從而達(dá)到控制林火行為的目的。機(jī)械清除對(duì)于減少可燃物載量具有直接作用，并且可以降低林火造成的經(jīng)濟(jì)損失，但該方法需要考慮處理后對(duì)植被、土壤、野生動(dòng)物長(zhǎng)期的潛在影響，對(duì)林內(nèi)物質(zhì)分解過(guò)程的影響以及引發(fā)陰燃的可能性[8]。計(jì)劃燒除可以減少火災(zāi)隱患，采用低強(qiáng)度的火能有效減少森林可燃物的積累[9]，但由于進(jìn)行計(jì)劃燒除存在跑火風(fēng)險(xiǎn)，可能造成意想不到的火災(zāi)損失，為達(dá)到計(jì)劃燒除預(yù)期效果，需謹(jǐn)慎選擇點(diǎn)燒時(shí)間段[10]。生物防火利用植物、動(dòng)物以及微生物的理化性質(zhì)以及生物學(xué)和生態(tài)學(xué)特性上的差異，并結(jié)合林業(yè)生產(chǎn)措施，能夠增強(qiáng)林分抗火性和阻火能力。綜上所述，生物防火手段不存在處理后的負(fù)面影響及風(fēng)險(xiǎn)，并且可在環(huán)境不受污染的情況下減少可燃物載量，從而達(dá)到降低森林火災(zāi)危害程度的目的。

木質(zhì)素是森林可燃物的主要組成成分，同時(shí)也是最頑固的天然化合物之一[11]，其自然降解通常是一個(gè)緩慢的過(guò)程，因此，加快木質(zhì)素的降解是減少森林可燃物載量的關(guān)鍵。自然界中木質(zhì)素的降解過(guò)程依賴于真菌通過(guò)自身分泌的胞外氧化還原酶（如漆酶和過(guò)氧化物酶）組成的復(fù)合木質(zhì)素降解酶系的催化[12]。目前國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者進(jìn)行了關(guān)于木質(zhì)素生物降解的研究，主要集中在造紙工業(yè)、生物堆肥、環(huán)境保護(hù)以及飼料、食品工業(yè)等領(lǐng)域，龐志強(qiáng)等[13]用白腐菌Trametesspp.Lg-9粗酶液預(yù)處理?xiàng)钅?，大幅改善了SCMP 的打漿性能，而且降低能耗，提高SCMP 的白度，并可改善強(qiáng)度；陳芙蓉等[14]將混合菌劑接種于堆肥發(fā)酵，發(fā)現(xiàn)木質(zhì)素、纖維素、半纖維素降解率分別達(dá)到22.13%，48.97%和55.93%；王紅[15]認(rèn)為白腐真菌對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量較低的化合物的降解主要是依靠胞內(nèi)酶氧化分解，而相對(duì)分子質(zhì)量高的化合物則先由胞外酶將其降解為小分子物質(zhì)后再被胞內(nèi)酶進(jìn)一步降解；王娜等[16]利用木質(zhì)素降解菌粗酶處理煙草，煙草中的木質(zhì)素含量減8%以上，可降低煙葉嗆咳和刺激性，提高抽吸品質(zhì)。在森林防火領(lǐng)域，彭徐劍[17]利用篩選出的H05、L02 和Z04 三株木質(zhì)纖維素高效降解菌處理興安落葉松、白樺及樟子松等可燃物基質(zhì)，試驗(yàn)結(jié)果表明3 株菌對(duì)木質(zhì)素、纖維素及半纖維素都具有很好的降解優(yōu)勢(shì)，并可作為森林地被可燃物高效降解菌。

帽兒山地區(qū)由于地處中溫帶，地表可燃物的分解受到很大程度的制約，其堆積使可燃物載量增加，氣候干燥時(shí)造成森林火災(zāi)隱患。篩選該地區(qū)高效木質(zhì)素降解真菌，進(jìn)行可燃物樣品降解試驗(yàn)，對(duì)降解效果進(jìn)行分析與評(píng)價(jià)，在理論研究上，能夠揭示生物防火的重要性與科學(xué)性，補(bǔ)充生物防火的研究?jī)?nèi)容，為制定科學(xué)合理的森林可燃物管理策略提供參考依據(jù)；在實(shí)踐應(yīng)用上，可以為清理地表可燃物提供新的途徑，為應(yīng)用生物降解方法降低帽兒山林區(qū)森林可燃物載量提供理論依據(jù)和基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)概況

試驗(yàn)地位于黑龍江省尚志市境內(nèi)的東北林業(yè)大學(xué)帽兒山林場(chǎng)尖砬溝森林培育試驗(yàn)站（127°30′～127°34′E，45°21′～45°25′N）。地貌為低山丘陵，溫帶大陸性季風(fēng)氣候，1月平均氣溫-23℃，7月平均氣溫20.9℃，全年平均氣溫2.8℃。全年平均降水量724 mm，蒸發(fā)量1 094 mm。無(wú)霜期120～140 d。地帶性土壤為暗棕壤，平均土層厚度為40 cm 左右，剖面酸堿性（pH 值4.3～6.0）。原始地帶性植被為紅松闊葉混交林，現(xiàn)存植被類型主要為以白樺Betula platyphylla、紅皮云杉Picea koraiensis、水曲柳Fraxinus mandshurica、長(zhǎng)白落葉松Larix olgensis及胡桃楸Juglans mandshurica等為主要樹(shù)種的次生林。

本試驗(yàn)所用可燃物樣品均為于2017年8月采自長(zhǎng)白落葉松、胡桃楸、水曲柳純林與胡桃楸-長(zhǎng)白落葉松、水曲柳-長(zhǎng)白落葉松混交林中的凋落葉。

1.2 培養(yǎng)基及溶液

PDA 培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，KH2PO43 g，MgSO4·7H2O 1.5 g，VB10.01 g，蒸餾水1 000 mL。

MEA 培養(yǎng)基：麥芽浸粉20 g，蛋白胨5 g，瓊脂20 g，鏈霉素硫酸鹽0.55 g，鄰苯基苯酚0.06 g，蒸餾水1 000 mL。

PDA-愈創(chuàng)木酚培養(yǎng)基：于PDA 培養(yǎng)基中加入0.02%（0.2 mL/L）的愈創(chuàng)木酚。

PDA-苯胺藍(lán)培養(yǎng)基：于PDA 培養(yǎng)基中加入0.1 g/L 的苯胺藍(lán)。

無(wú)機(jī)鹽溶液[18]：葡萄糖20 g，NH4NO30.5 g，KH2PO41.0 g，Na2HPO4·12H2O 0.4 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，VB10.l mg，CaC120.1 mg，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.l mg，用H2SO4調(diào)pH 值為5.0。

PDA 液體培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，KH2PO43 g，MgSO4·7H2O 1.5 g，VB10.01 g，蒸餾水1 000 mL。

1.3 菌株分離純化

將采集的葉片樣品投入蒸餾水中振蕩漂洗2～3 次，用無(wú)菌的濾紙擦干。將葉片接種到PDA 平板培養(yǎng)基中，每個(gè)平板接種適量葉片，于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4～5 d 后，用接種針挑取菌絲接種到MEA 培養(yǎng)基上，反復(fù)接種進(jìn)行分離純化直至獲得純菌株。將純菌株轉(zhuǎn)接到PDA 斜面培養(yǎng)基上，于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 d 后，無(wú)雜菌試管于冰箱中4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 菌株初篩

將已經(jīng)分離純化并保存于冰箱中的菌株從斜面上挑出，轉(zhuǎn)接到PDA 平板培養(yǎng)基上活化，28℃下恒溫培養(yǎng)7 d 后，用直徑10 mm 的無(wú)菌打孔器在菌落邊緣制取菌餅，以每個(gè)平板1 塊菌餅的接種量接于PDA-愈創(chuàng)木酚平板中央，并作3 個(gè)平行，于28℃恒溫培養(yǎng)5 d，每天觀察菌絲生長(zhǎng)情況并記錄平板上有無(wú)紅棕色顯色圈產(chǎn)生，有紅棕色顯色圈者記為+，反之記為-，依據(jù)顯色圈直徑的增大情況，分別用++、+++、++++依次表示。在第5天用游標(biāo)卡尺分別測(cè)量有明顯顯色圈產(chǎn)生的菌株的菌落圈及顯色圈直徑。通過(guò)計(jì)算菌落圈與顯色圈直徑比值，可確定菌株是否能優(yōu)先降解木質(zhì)素：比值＜1，能優(yōu)先降解木質(zhì)素；比值＞1，不能優(yōu)先降解木質(zhì)素，即纖維素先被降解[19]。

1.5 菌株復(fù)篩

愈創(chuàng)木酚可以定性測(cè)定是否為能降解木質(zhì)素的具有漆酶（Laccase，Lac）活性的菌株[20]，但不能反映過(guò)氧化物酶類的產(chǎn)生。將上述產(chǎn)生顯色圈的菌種接種到PDA-苯胺藍(lán)平板上，28℃避光培養(yǎng)10 d，每天觀察脫色圈的有無(wú)及大小，定性檢測(cè)木質(zhì)素過(guò)氧化物酶（Lignin peroxidases，LiP）及錳過(guò)氧化物酶（Manganese peroxidases，MnP）的產(chǎn)生與否[21]。

1.6 菌株鑒定

形態(tài)學(xué)鑒定：觀察菌株培養(yǎng)特征、菌落形態(tài)，在光學(xué)顯微鏡下觀察菌絲及孢子形態(tài)特征，并參照《真菌鑒定手冊(cè)》[22]進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。

分子生物學(xué)鑒定：采用生工生物工程（上海）股份有限公司的Ezup 柱式真菌基因組DNA 抽提試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)：SK8259）提取DNA，采用引物ITS1（TCCGTAGGTGAACCTGCGG）和ITS4（TCCTCCGCTTATTGATATGC）進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后將未純化產(chǎn)物委托上海生工生物工程有限公司進(jìn)行測(cè)序。根據(jù)ITS 的測(cè)序結(jié)果，在NCBI 上應(yīng)用Blast 進(jìn)行序列比對(duì)，結(jié)合GenBank 中已有的相關(guān)ITS 序列，利用MEGA 5.1軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.7 地表可燃物樣品降解試驗(yàn)

將采集于落葉松、胡桃楸、水曲柳純林的凋落葉樣品于80℃烘干至恒質(zhì)量后（稱量誤差為±0.000 4 g）粉碎至40 目。粉碎后的樣品用石油醚在冷浸提裝置中進(jìn)行脫脂，準(zhǔn)確稱取1 g（記為m）放入100 mL 三角瓶中，加入無(wú)機(jī)鹽溶液5 mL，作為分解基質(zhì)，120℃滅菌20 min 后備用。將篩選出的木質(zhì)素降解菌株轉(zhuǎn)接到PDA 培養(yǎng)基平板上，28℃下培養(yǎng)7 d 后用直徑10 mm 的無(wú)菌打孔器制取菌餅3 塊，接入裝有50 mL PDA 液體培養(yǎng)基的150 mL 三角瓶中，于30℃、150 r/min 搖床培養(yǎng)7 d。將搖勻的發(fā)酵液于4 000 r/min 下離心10 min 后用無(wú)菌注射器吸取10 mL 上清液，混合菌液為不同菌種發(fā)酵液各吸取5 mL，經(jīng)濾膜過(guò)濾，分別接入裝有3 種可燃物樣品的三角瓶中，25℃恒溫靜置培養(yǎng)7 d，每個(gè)菌株設(shè)3 個(gè)重復(fù)。

1.8 木質(zhì)素含量的測(cè)定

采用纖維測(cè)定儀根據(jù)Van Soest[23]的方法測(cè)定木質(zhì)素含量。經(jīng)培養(yǎng)后的可燃物樣品于65℃烘干至恒質(zhì)量，放入裝有灰化后的硅藻土的坩堝（40～100 μm）中。用中性洗滌劑（3%十二烷基硫酸鈉溶液）在消煮管中加熱消煮60 min。經(jīng)消煮后，殘?jiān)砂肜w維素、纖維素、木質(zhì)素和硅酸鹽組成。樣品再用酸性洗滌劑（2%十六烷基三甲基溴化銨溶液）消煮60 min，剩余物為纖維素、木質(zhì)素和硅酸鹽。樣品在室溫下用12 mol/L 硫酸消解，剩余物干燥后稱質(zhì)量記為A，為木質(zhì)素和硅酸鹽。隨后于550℃馬弗爐中灰化2 h。冷卻至室溫后，剩余物稱質(zhì)量記為B，即硅酸鹽的質(zhì)量。木質(zhì)素含量按（1）式計(jì)算：

1.9 數(shù)據(jù)處理

采用Microsoft Excel 2016 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，利用Origin 2018 軟件進(jìn)行作圖和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株分離純化

MEA 培養(yǎng)基中含有鏈霉素硫酸鹽，對(duì)細(xì)菌具有抗菌作用；而在培養(yǎng)基中加入鄰苯基苯酚可以有效抑制霉菌的生長(zhǎng)。根據(jù)不同菌落形態(tài)從樣品中共分離純化出9 個(gè)真菌菌種，分別編號(hào)為B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8 和Y3。

2.2 菌株初篩

在初篩實(shí)驗(yàn)中，共有5 株菌發(fā)生了顯色反應(yīng)，分別為B2、B3、B6、B7 與Y3。表1列出了5 株菌在PDA-愈創(chuàng)木酚平板上的顯色情況，均為培養(yǎng)1 d 后開(kāi)始顯色，根據(jù)顯色時(shí)間，菌株B2、Y3、B6 分泌木質(zhì)素降解酶能力較強(qiáng)。如圖1所示，發(fā)生顯色反應(yīng)的菌株都是在菌落圈呈較深的紅色，菌落外圈顏色變淺，呈橙色。顯色圈的面積實(shí)際上反映了木質(zhì)素降解酶對(duì)木質(zhì)素的降解能力，如果顯色圈在菌落圈的外圈形成，則該菌株能降解木質(zhì)素，因此以菌落圈與顯色圈直徑的比值（R/r）為判斷依據(jù)可以評(píng)價(jià)單位菌株分泌木質(zhì)素降解酶的能力，比值越小，說(shuō)明單位菌株可能產(chǎn)生的酶作用能力越強(qiáng)[24]。通過(guò)比較菌落圈與顯色圈比值（表1），本實(shí)驗(yàn)中菌株B6 和Y3 的R/r＜1，初步判斷該兩株菌能優(yōu)先降解木質(zhì)素，且菌株B6 的R/r較小，說(shuō)明該菌株所產(chǎn)木質(zhì)素降解酶活力可能高于Y3，即降解木質(zhì)素的能力強(qiáng)于Y3。

表1 PDA-愈創(chuàng)木酚平板顯色反應(yīng)結(jié)果及菌落圈與顯色圈生長(zhǎng)情況?Table 1 PDA-GU plate color reaction and the growth of colony and colored ring

圖1 PDA-愈創(chuàng)木酚平板顯色反應(yīng)Fig.1 PDA-GU color producing reaction

2.3 菌株復(fù)篩

對(duì)菌株B6、Y3 過(guò)氧化物酶系采用苯胺藍(lán)平板脫色法進(jìn)行定性檢測(cè)。結(jié)果顯示，2 株菌均能使培養(yǎng)基藍(lán)色褪去：菌株B6 在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)旺盛，培養(yǎng)5 d 后，培養(yǎng)基藍(lán)色全部褪去；菌株Y3 在培養(yǎng)2 d 后產(chǎn)生脫色圈，隨后脫色圈不斷擴(kuò)大，最后整個(gè)平板藍(lán)色全部褪去。脫色結(jié)果說(shuō)明，在無(wú)木質(zhì)素誘導(dǎo)物存在的情況下，菌株B6、Y3 對(duì)苯胺藍(lán)均有較強(qiáng)的脫色能力，可確定此2 種菌均具有Lip和Mnp 酶活性。但根據(jù)平板脫色反應(yīng)僅能初步判斷菌株的產(chǎn)酶情況，要具體確定菌株木質(zhì)素降解能力需進(jìn)行木質(zhì)素降解試驗(yàn)。

2.4 菌株鑒定

形態(tài)學(xué)鑒定：在PDA 培養(yǎng)基上于28℃恒溫培養(yǎng)7 d 后，B6 菌落表面白色絲絨狀，菌絲密集較短，放射延伸，菌落背面白色；Y3 菌落表面白色絨毛狀，邊緣整齊圓滑，菌絲致密，呈輻射狀生長(zhǎng)，菌落背面白色。Y3 經(jīng)白樺枝條誘導(dǎo)產(chǎn)生擔(dān)子果，擔(dān)子果無(wú)嗅無(wú)味，子實(shí)層體褶狀，放射狀排列，菌褶邊緣薄，全緣或稍撕裂狀，菌褶灰白色。

圖2 菌株B6 和Y3 的培養(yǎng)性狀Fig.2 Culture characters of strains B6 and Y3

經(jīng)過(guò)測(cè)序，得到B6 和Y3 的ITS 序列長(zhǎng)度分別為650 和615 bp，將2 株菌的ITS 序列與Genbank 中的模式菌株及親緣關(guān)系較近的菌株進(jìn)行序列比對(duì)，用非加權(quán)組平均法（UPGMA 法）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（圖3）。菌株B6 的rDNAITS 序列與Irpex lacteusvoucher KUC20121109-08（KJ668509.1）序列相似性為99%，并且位于系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的同一分枝，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征將其鑒定為白囊耙齒菌Irpex lacteus；菌株Y3 的rDNA-ITS序列與Lenzites betulinusisolate UTHSCSA DI16-473（KY313640.1）序列相似性為99%，并且位于系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的同一分枝，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征將其鑒定為樺褶孔菌Lenzites betulinus。

圖3 菌株B6 和Y3 的rDNA-ITS 序列系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.3 rDNA-ITS phylogenetic tree of strains B6 and Y3

2.5 地表可燃物樣品降解試驗(yàn)

由圖4可知，7 d 降解試驗(yàn)后，3 種可燃物基質(zhì)中木質(zhì)素含量均有所下降。胡桃楸基質(zhì)初始木質(zhì)素含量為56.82%，經(jīng)單一菌液B6、Y3 及混合菌液降解后下降到48.38%～55.08%，與對(duì)照相比分別下降了2.27%、11.02%與14.16%，混合菌液表現(xiàn)出更強(qiáng)的降解能力，相比對(duì)照，降解后的木質(zhì)素含量顯著降低（P＜0.05）。水曲柳基質(zhì)初始木質(zhì)素含量為54.66%，在B6 菌液處理下為50.15%（與對(duì)照相比下降了8.05%），降解能力最弱，其次是Y3菌液，處理后的木質(zhì)素含量為46.05%（與對(duì)照相比下降15.57%，P＜0.05），經(jīng)混合菌液培養(yǎng)后的木質(zhì)素含量最低，下降到41.74%（與對(duì)照相比下降23.47%，P＜0.05）。落葉松基質(zhì)木質(zhì)素含量在不同菌液處理后表現(xiàn)出與以上兩種基質(zhì)木質(zhì)素含量相協(xié)同的高低分布，即加入混合菌液降解效果最好，相比對(duì)照，下降了8.69%（P＜0.05），加入Y3 菌液降解效果次之（與對(duì)照相比下降5.42%），降解效果最差的為B6 菌液（與對(duì)照相比分別下降3.52%）。

圖4 經(jīng)不同菌液培養(yǎng)后3 種基質(zhì)的木質(zhì)素含量Fig.4 The lignin content of three kinds of substrates after culture in different fungal suspensions

3 結(jié)論與討論

Nishida 等[25]的研究表明，能在含有愈創(chuàng)木酚的PDA 培養(yǎng)基上產(chǎn)生顯色圈的微生物具有降解木質(zhì)素的能力。本研究采用該方法，在菌株初篩過(guò)程選用愈創(chuàng)木酚為檢測(cè)木質(zhì)素降解酶的定性指示劑的選擇培養(yǎng)基，分離篩選出木質(zhì)素降解菌。并且本研究以Ander 和Eriksson 的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為依據(jù)，即菌落圈與顯色圈直徑的比值小于1 則該菌能優(yōu)先降解木質(zhì)素，比值大于1 則該菌優(yōu)先降解纖維素[18]，篩選出能優(yōu)先降解木質(zhì)素的菌種。在菌株復(fù)篩過(guò)程，本研究選用PDA-苯胺藍(lán)培養(yǎng)基作為選擇性培養(yǎng)基，進(jìn)一步完成定性篩選。部分學(xué)者在篩選木質(zhì)素降解菌時(shí)僅進(jìn)行一次定性篩選[17]，由于真菌對(duì)木質(zhì)素的降解是通過(guò)木質(zhì)素降解酶系中多種酶的相互協(xié)同作用的結(jié)果，主要有Lac、LiP和MnP，因此僅進(jìn)行一次篩選并不能完全檢測(cè)出以上3 種酶。本研究在初篩時(shí)篩選出具有Lac 活性的菌株，在復(fù)篩時(shí)篩選出具有LiP 和MnP 活性的菌株，以獲得降解木質(zhì)素綜合能力強(qiáng)的真菌。

經(jīng)菌株初篩與復(fù)篩獲得的菌株B6 和Y3，在可燃物樣品降解試驗(yàn)中有效降解了基質(zhì)中的木質(zhì)素，這表明木質(zhì)素降解菌的降解能力與產(chǎn)酶能力密切相關(guān)。經(jīng)單一菌液與兩者混合菌液培養(yǎng)后，樣品中木質(zhì)素含量均有下降，且混合菌液處理后的3 種可燃物基質(zhì)與單一菌液處理后的基質(zhì)中木質(zhì)素含量相比下降更多，表現(xiàn)出更好的降解效果。推測(cè)本研究中篩選出的菌株B6 和Y3 之間無(wú)拮抗作用并且能相互激發(fā)，促進(jìn)了木質(zhì)素降解酶活力，從而提高了木質(zhì)素降解率。兩種單一菌液相比，菌種Y3 對(duì)木質(zhì)素的降解效果較菌種B6 好，說(shuō)明菌種Y3 降解能力強(qiáng)于B6。此外，可燃物樣品中木質(zhì)素降解效果根據(jù)基質(zhì)的不同而存在差異：水曲柳基質(zhì)中木質(zhì)素降解率最高，其次是胡桃楸基質(zhì)，落葉松基質(zhì)降解率最低，這與前人的研究結(jié)果一致，即闊葉可燃物比針葉可燃物易分解[26]。推測(cè)不同樹(shù)種葉片中木質(zhì)素含量本身存在差異，同時(shí)受其他養(yǎng)分含量的影響。對(duì)于木質(zhì)素的降解，白腐真菌是最有效的降解者，同時(shí)也是已知的唯一能在純系培養(yǎng)中有效地將木質(zhì)素降解為CO2和H2O 的一類微生物[27]。以上說(shuō)明，本研究中經(jīng)篩選獲得的兩種木質(zhì)素降解真菌B6 與Y3 均屬于白腐真菌，能有效降解可燃物中的木質(zhì)素，富集培養(yǎng)后施加菌液能夠在一定程度上減少森林地表可燃物載量。

森林地表可燃物是一種潛在的火險(xiǎn)源[28]，加快森林可燃物分解能夠在一定程度上降低森林火災(zāi)危害程度。雖然本研究中地表可燃物降解試驗(yàn)得到了較好的效果，但由于室內(nèi)試驗(yàn)條件可控，野外環(huán)境影響因素較多，因此室內(nèi)試驗(yàn)所得結(jié)果有一定局限性，經(jīng)室內(nèi)試驗(yàn)篩選出的菌株是否在野外仍具有較強(qiáng)的降解能力還需進(jìn)一步驗(yàn)證。因此，進(jìn)行野外降解試驗(yàn)，在自然條件下檢驗(yàn)?zāi)举|(zhì)素降解菌對(duì)地表可燃物中木質(zhì)素的降解能力；使木質(zhì)素降解菌在野外條件下自然定植，從而形成優(yōu)勢(shì)菌群，達(dá)到高效降解地表可燃物中木質(zhì)素的目的是后續(xù)研究的方向。利用微生物減少森林可燃物載量降低森林火險(xiǎn)等級(jí)和火災(zāi)損失，是森林防火一個(gè)重要途徑，同時(shí)為地表可燃物管理方法研究提供了新的方向。