基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討連花清瘟膠囊防治新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)的作用機制

馬 穎，張 鳳，王 亮，王博龍

基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討連花清瘟膠囊防治新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)的作用機制

馬 穎1，張 鳳2，王 亮3，*王博龍1

（1.宜春學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，江西，宜春 336000；2.海軍軍醫(yī)大學(xué)附屬長征醫(yī)院藥材科，上海 200003；3.上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所，上海 201203）

基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法研究連花清瘟膠囊活性成分防治新型冠狀病毒肺炎的作用機制。通過文獻(xiàn)挖掘確定連花清瘟膠囊活性成分，依托TCMSP、Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫檢索活性成分靶點，利用Cytoscape3.6.1軟件繪制連花清瘟膠囊活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)；運用GeneCards數(shù)據(jù)庫查詢新型冠狀病毒肺炎靶點，將其與連花清瘟膠囊活性成分靶點相互映射，篩選出共同靶點。應(yīng)用STRING平臺構(gòu)建靶蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)并提取關(guān)鍵靶點，對關(guān)鍵靶點進(jìn)行GO（Gene Ontology）基因功能和通路分析。連花清瘟膠囊24個活性成分作用于33個新型冠狀病毒肺炎靶點，其中NOS2與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶II（ACE2）共表達(dá)；TNF、TP53、IL6、CASP3、IL2、MAPK14、RELA共7個關(guān)鍵靶基因參與免疫系統(tǒng)過程、多細(xì)胞生物過程、解毒過程、刺激反應(yīng)、抗氧化活性等生物過程及功能，調(diào)控百日咳、南美錐蟲病、乙型肝炎、肺結(jié)核、甲型流感、EB病毒感染、單純皰疹病毒感染、PI3K-Akt、TNF、MAPK、T細(xì)胞受體等信號通路。連花清瘟膠囊對SARS-CoV-2入侵人體受體ACE2具有一定的阻斷作用，同時發(fā)揮抑制機體炎癥風(fēng)暴、調(diào)節(jié)機體免疫的作用。

連花清瘟膠囊；活性成分；新型冠狀病毒肺炎；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；基因共表達(dá)

新型冠狀病毒肺炎又稱COVID-19（Corona Virus Disease 2019，COVID-19）[1-2]，是由SARS-CoV-2病毒經(jīng)呼吸道飛沫和接觸傳播的呼吸系統(tǒng)烈性傳染病。截至2020年4月22日15時20分，SARS-CoV-2病毒已擴(kuò)散到200多個國家和地區(qū)，已導(dǎo)致全球256萬人感染，17萬余人死亡，成為全球范圍內(nèi)的突發(fā)公共衛(wèi)生事件。COVID-19以發(fā)熱、干咳、乏力為主要表現(xiàn)，少數(shù)伴有鼻塞、流涕、咽痛、肌痛和腹瀉等，重癥患者多在發(fā)病1周后出現(xiàn)呼吸困難和（或）低氧血癥，嚴(yán)重者可快速進(jìn)展為急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克、難以糾正的代謝性酸中毒和出凝血功能障礙及多器官功能衰竭等[3]。對于COVID-19的治療目前尚無特效藥物，國內(nèi)外的科研人員都在夜以繼日開展抗COVID-19藥物及疫苗研究，但短時間內(nèi)不可能獲得安全有效的藥物或疫苗。

中藥具有多成分、多靶點、整體作用的特點，在COVID-19的預(yù)防和治療中具有很大的潛力。此次新冠疫情發(fā)生以來，國家衛(wèi)健委和國家中醫(yī)藥管理局聯(lián)合發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第4版、第5版、第6版）》，以及北京、山東、河北、廣東、上海等省市發(fā)布的診療方案都將連花清瘟膠囊作為推薦用藥[4]。雖然王林[5]、王法財[6]等應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法分析了連花清瘟膠囊治療COVID-19的分子機制，但他們都是基于口服生物利用度、類藥性等參數(shù)來選擇藥效成分開展研究?；诳诜兴幩幮С煞直仨毴胙难逅幬锘瘜W(xué)思維[7]，以及于華等[8]研究了連花清瘟膠囊的入血成分，再結(jié)合具有鎮(zhèn)咳平喘之功效的麻黃活性成分麻黃堿和偽麻黃堿[9-10]，本研究最終以大黃素、芒柄花黃素、蘆丁、沒食子酸、甘草素、金絲桃苷等24種活性成分為藥效物質(zhì)，借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法與技術(shù)，全面分析連花清瘟膠囊的作用靶點、生物過程及信號通路，旨在詳細(xì)闡明其防治COVID-19的復(fù)雜機理。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)庫和軟件

（1）活性成分-靶點數(shù)據(jù)庫：中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺TCMSP（http://ibts.hkbu.edu.hk/ LSP/tcmsp.php），SwissTarget Prediction(http://www. swisstargetprediction.ch/)。（2）蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫：UniProt (https://www.uniprot.org/)，PubChem（https:// pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）。（3）疾病-靶點數(shù)據(jù)庫：GeneCards（https://www.genecards.org/）。（4）蛋白質(zhì)相互作用分析平臺：STRING（https://string- db.org/）。（5）生信在線分析平臺：ensembl網(wǎng)站（www.ensembl. org/biomart），OmicShare云平臺（http://omicshare. com/），DAVID 6.8（https://david. ncifcrf. gov/）。（6）網(wǎng)絡(luò)分析及作圖軟件：Cytoscape 3.6.1，Venny 2.1.0（https://bioinfogpcnb.csic.es/tools/ venny/index.html）。

1.2 連花清瘟膠囊活性成分靶點及成分-靶點網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

本研究以連花清瘟膠囊24種活性成分為對象，運用PubChem數(shù)據(jù)庫搜索活性成分標(biāo)準(zhǔn)的Canonical SMILES格式，將SMILES格式文件導(dǎo)入SwissTargetPrediction平臺，進(jìn)行靶點預(yù)測，并將TCMSP中相應(yīng)化合物的靶點作為補充；運用UniProt數(shù)據(jù)庫將靶點統(tǒng)一轉(zhuǎn)換為基因名稱保存，將以上兩個來源的基因合并，構(gòu)建連花清瘟膠囊靶基因匯總；利用Cytoscape3.6.1軟件構(gòu)建連花清瘟膠囊“活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)”。

1.3 連花清瘟膠囊治療COVID-19作用靶標(biāo)的獲取與分析

基于Gene Cards數(shù)據(jù)庫，以“Novel coronavirus pneumonia”為關(guān)鍵詞檢索與COVID-19相關(guān)的作用靶點，將連花清瘟膠囊的預(yù)測靶點與COVID-19相關(guān)作用靶點相互映射，篩選出共同靶點，得到連花清瘟膠囊治療COVID-19的作用靶點；并將得到的作用靶點進(jìn)行基因共表達(dá)分析。

1.4 PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建和核心靶點的篩選

為研究靶點之間的相互作用，將篩選出的共同靶點導(dǎo)入STRING網(wǎng)絡(luò)平臺，設(shè)置蛋白種類為“Homo sapiens”，最低相互作用閾值為“medium confidence”，其余參數(shù)均保持默認(rèn)值，結(jié)果保存為TSV格式并導(dǎo)入Cytoscape3.6.1軟件；運用其插件“Network Analyze”分析網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，以節(jié)點度值(Degree)、介數(shù)（Betweenness）、最短路徑（Clossness）均超過平均值為標(biāo)準(zhǔn)篩選出關(guān)鍵靶點。

1.5 關(guān)鍵靶點基因本體GO分析

將關(guān)鍵靶點的名稱在ensembl網(wǎng)站轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的基因ID后，運用OmicShare云平臺進(jìn)行動態(tài)GO富集分析，利用平臺候選背景基因，選擇“Homo sapiens(智人）”，其中GO功能分析包括生物過程（Biological Process）、分子功能（Molecular Function）和細(xì)胞組成（Cellular Component）。

1.6 關(guān)鍵靶點KEGG信號通路富集

利用DAVID 6.8對關(guān)鍵靶點進(jìn)行KEGG信號通路富集，物種與背景設(shè)置均為“Homo sapiens”，設(shè)定閾值 P-value<0.01，研究關(guān)鍵靶基因富集的信號通路，并對富集通路進(jìn)行可視化分析。

2 結(jié)果

2.1 連花清瘟膠囊活性成分靶點及成分-靶點網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

查閱文獻(xiàn)[8-10]發(fā)現(xiàn)連花清瘟膠囊中主要有大黃素、芒柄花黃素、蘆丁、沒食子酸、甘草素、金絲桃苷、麻黃堿、偽麻黃堿、紅景天苷、馬錢苷酸、苦杏仁苷、大黃酸、斷氧化馬錢苷、新綠原酸、綠原酸、大黃素-8-O-葡萄糖苷、連翹酯苷E、隱綠原酸等24種活性成分，詳見表1。在TCMSP數(shù)據(jù)庫得到連花清瘟膠囊活性成分靶基因92個（篩除重復(fù)），在SwissTarget Prediction服務(wù)器獲取連花清瘟膠囊活性成分靶基因152個（篩除重復(fù)），兩者合并刪除重復(fù)后共得到預(yù)測的活性成分靶基因220個。將連花清瘟膠囊活性成分與對應(yīng)的靶標(biāo)導(dǎo)入Cytoscape3.6.1軟件中，構(gòu)建“活性成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖，如圖1所示，連花清瘟膠囊24種活性成分作用于220個靶基因的網(wǎng)狀圖，圖中244個節(jié)點，510條線充分體現(xiàn)了連花清瘟膠囊多成分、多靶點的藥理作用。

表1 連花清瘟膠囊活性成分基本信息

Table 1 Active ingredients basic information of Lianhua Qingwen capsule

活性成分英文名化學(xué)式PubChem CID中藥 沒食子酸Gallic acidC7H6O5370大黃、紅景天 新綠原酸Neochlorogenic acidC16H18O95280633金銀花、魚腥草 紅景天苷SalidrosideC14H20O7159278連翹 連翹酯苷EForsythoside EC20H30O1269634125連翹 馬錢苷酸Loganic acidC16H24O1089640金銀花 綠原酸Chlorogenic acidC16H18O91794427金銀花、苦杏仁、魚腥草 隱綠原酸Cryptochlorogenic acidC16H18O99798666金銀花 苦杏仁苷AmygdalinC20H27NO11656516苦杏仁 獐牙菜苷SwerosideC16H22O9161036金銀花 斷氧化馬錢苷SecoxyloganinC17H24O11162868金銀花 蘆丁RutinC27H30O165280805連翹、甘草、金銀花、麻黃、魚腥草 金絲桃苷HyperosideC21H20O125281643廣藿香、金銀花、連翹、魚腥草 芹糖甘草苷Liquiritin apiosideC26H30O1310076238甘草 芹糖異甘草苷isoliquiritin apiosideC26H30O136442433甘草 異甘草苷IsoliquiritinC21H22O95318591甘草 甘草素LiquiritigeninC15H12O4114829板藍(lán)根、甘草 大黃素-8-O-葡萄糖苷Emodin-8-glucosideC21H20O1099649板藍(lán)根 大黃酚葡萄糖苷Chrysophanol glucosideC21H20O96324923大黃 芒柄花黃素FormononetinC16H12O45280378甘草 大黃酸RheinC15H8O610168大黃 大黃素EmodinC15H10O53220大黃、板藍(lán)根、薄荷 甘草酸Glycyrrhizic acidC42H62O1614982甘草、苦杏仁 麻黃堿EphedrineC10H15NO9294麻黃 偽麻黃堿PseudoephedrineC10H15NO7028麻黃

圖1 “活性成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)

2.2 連花清瘟膠囊治療COVID-19的靶標(biāo)預(yù)測

以“new coronavirus pneumonia”為關(guān)鍵詞，在GeneCards數(shù)據(jù)庫中收集COVID-19的相關(guān)作用靶點，將連花清瘟膠囊的預(yù)測靶點與COVID-19的相關(guān)作用靶點相互映射，得到連花清瘟膠囊治療COVID-19的潛在作用靶點33個，詳見圖2。

由于ACE2是SARS-CoV-2侵入人體的重要受體[11]，將連花清瘟膠囊治療COVID-19的33個潛在靶標(biāo)與ACE2進(jìn)行共表達(dá)分析。結(jié)果顯示，ACE2與NOS2存在共表達(dá)（圖3），說明連花清瘟膠囊有可能通過NOS2來影響ACE2表達(dá)，從而發(fā)揮阻斷病毒入侵效應(yīng)。

圖2 連花清瘟膠囊靶標(biāo)與COVID-19靶標(biāo)的韋恩圖

圖3 ACE2與連花清瘟膠囊治療COVID-19潛在靶點的共表達(dá)情況

2.4 關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與關(guān)鍵靶基因篩選

如圖4所示，將篩選出的33個治療COVID-19的潛在靶標(biāo)輸入STRING數(shù)據(jù)庫，獲取蛋白相互作用關(guān)系，共有32個節(jié)點（1個靶基因未參與）、201條相互作用連線構(gòu)成關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)，圖中節(jié)點的大小代表度值（degree）大小，節(jié)點越大代表度值越大；節(jié)點邊的粗細(xì)代表介數(shù)（betweenness）大小，邊線的越粗代表介數(shù)越大，節(jié)點邊的顏色代表平均最短路徑（Closeness）大小，顏色越深代表數(shù)值越大。PPI關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)的平均度值為12.56，平均介數(shù)為2.18×10-2，平均最短路徑（Closeness）為6.24×10-1，其中共有7個基因參數(shù)在平均值之上，為網(wǎng)絡(luò)中連花清瘟膠囊治療COVID-19的關(guān)鍵靶點，見表2。

圖4 連花清瘟膠囊潛在靶基因關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)

表2 連花清瘟膠囊治療COVID-19的關(guān)鍵靶標(biāo)

Table 2 Key targets of Lianhua Qingwen capsule for COVID-19

靶點degreebetweenessclossness TNF241.43×10-18.16×10-1 TP53237.78×10-27.95×10-1 CASP3236.64×10-27.95×10-1 IL6237.65×10-27.95×10-1 MAPK14215.74×10-27.56×10-1 IL2206.33×10-27.38×10-1 RELA182.95×10-27.05×10-1

2.5 連花清瘟膠囊關(guān)鍵靶點GO功能富集分析

利用OmicShare云平臺對7個關(guān)鍵靶標(biāo)進(jìn)行GO功能與富集分析，結(jié)果顯示生物過程（Biology Process，BP）主要涉及免疫系統(tǒng)過程、解毒、多細(xì)胞生物過程、刺激反應(yīng)、細(xì)胞增殖、生物過程的調(diào)節(jié)等；分子功能（Molecular Function，MF）及細(xì)胞組成（Cellular Componet，CC）主要涉及催化活性、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性、細(xì)胞膜、細(xì)胞突觸、細(xì)胞器等，詳見圖5。進(jìn)一步富集發(fā)現(xiàn)連花清瘟膠囊可能是通過肺癌細(xì)胞對尼古丁反應(yīng)的負(fù)調(diào)控、血液微粒形成的正調(diào)控、超氧化物自由基清除的正調(diào)控、慢性炎癥反應(yīng)抗原刺激的負(fù)調(diào)控，調(diào)節(jié)生物合成與代謝過程，調(diào)控白細(xì)胞粘附、細(xì)胞因子分泌參與免疫應(yīng)答，調(diào)控參與肺形態(tài)形成的分支等發(fā)揮作用，詳見圖6。

圖5 關(guān)鍵靶基因的GO功能分析

圖6 靶基因的GO富集分析

2.6 連花清瘟膠囊關(guān)鍵靶點KEGG信號通路分析

依據(jù)-value＜0.01篩選7個關(guān)鍵靶點的KEGG通路，共得到百日咳（Pertussis）、南美錐蟲?。–hagas disease）、乙型肝炎（Hepatitis B）、肺結(jié)核（Tuberculosis）、甲型流感（Influenza A）、EB病毒感染（Epstein-Barr virus infection）、單純皰疹病毒感染（Herpes simplex infection）、PI3K-Akt信號通路（PI3K-Akt signaling pathway）、腫瘤壞死因子信號通路（TNF signaling pathway）、MAPK信號通路（MAPK signaling pathway）、Toll樣受體信號通路（Toll-like receptor signaling pathway）、類節(jié)點受體信號通路（NOD-like receptor signaling pathway）、T細(xì)胞受體通路（T cell receptor signaling pathway）等35條信號通路。圖7為上述前30條信號通路的高級氣泡圖，以富集因子(Rich Factor，RF，即目標(biāo)基因中屬于這個pathway的基因的數(shù)量/背景基因集中這個pathway所有基因的數(shù)量)、值以及調(diào)控通路上的基因個數(shù)來衡量KEGG富集程度，其中氣泡顏色代表值的大小，RF代表富集的程度大小，氣泡大小代表該通路中目標(biāo)基因的多少。由圖可見值偏小的是百日咳、南美錐蟲病、腫瘤壞死因子信號通路、乙型肝炎、肺結(jié)核、單純皰疹病毒感染，RF較高的是移植物抗宿主病、百日咳，類節(jié)點受體、腫瘤壞死因子、T細(xì)胞受體信號通路；而目標(biāo)基因較多的是單純皰疹病毒感染、MAPK信號通路、HTLV-I感染。

圖7 連花清瘟膠囊關(guān)鍵靶標(biāo)的KEGG通路富集分析

3 討論

連花清瘟膠囊是吳以嶺教授以銀翹散合麻杏石甘湯化裁而來，主要由連翹、金銀花、炙麻黃等13 味藥組成，具有清瘟解毒、宣肺泄熱之功效，常用于治療流行性感冒屬熱毒襲肺癥。全方以漢代張仲景《傷寒論》麻杏石甘湯合清代吳鞠通《溫病條辨》銀翹散為基礎(chǔ)方，衛(wèi)氣同治，宣肺泄熱；又汲取明代吳又可《溫疫論》治疫證用大黃經(jīng)驗，先證用藥、通腑泄熱；廣藿香芳香化濕、醒脾和中，配伍紅景天清肺化瘀，調(diào)節(jié)免疫，組方皆在清泄肺中之毒熱，宣暢肺氣，截斷病勢，體現(xiàn)了三朝古方治療外感瘟疫病用藥經(jīng)驗[12]。自2003年上市以來，連花清瘟膠囊先后多次被列入國家衛(wèi)健委、國家中醫(yī)藥管理局發(fā)布的甲流、乙流、禽流感、流感、中東呼吸綜合征等傳染性公共衛(wèi)生事件診療方案或指南共識。且連花清瘟膠囊已在美國順利啟動Ⅱ期臨床研究，成為第一個進(jìn)入美國FDA治療流感的中成藥[13]。有研究證實連花清瘟膠囊能明顯抑制體外培養(yǎng)的SARS-CoV活性[14]，對中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS-CoV）活性也具有一定抑制作用[15]。此外，連花清瘟膠囊可抑制各種流感病毒菌株的增殖，降低小鼠肺中的病毒滴度[16]。

研究[17-18]顯示COVID-19患者休克、低氧血癥和水電解質(zhì)酸堿失衡、急性呼吸窘迫綜合征等危重癥的發(fā)生，與免疫反應(yīng)過激和炎癥因子風(fēng)暴密切相關(guān)。為明確連花清瘟膠囊治療COVID-19的確切機制，本研究挖掘連花清瘟膠囊活性成分的作用靶點，并重點分析了關(guān)鍵靶點及其富集的生物過程、信號通路。結(jié)果發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵靶點中的多數(shù)為免疫、炎癥因子或相關(guān)凋亡蛋白，如IL2、IL6、TNF、CASP3、TP53、MAPK14、RELA等。其參與催化活性、抗氧化活性、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性等生物功能，以及刺激反應(yīng)、代謝過程、免疫系統(tǒng)進(jìn)程等生物過程。關(guān)鍵靶點富集的通路主要有百日咳、南美錐蟲病、乙型肝炎、肺結(jié)核、T細(xì)胞受體、TNF、NOD-like receptor、PI3K-Akt、MAPK、Toll-like receptor 信號通路等，其中調(diào)控免疫、炎癥的通路為數(shù)最多，如調(diào)控免疫的T細(xì)胞受體通路；調(diào)控炎癥的TNF、MAPK、PI3K-Akt、NOD-like receptor 信號通路等；甲型流感感染、EB病毒感染、單純皰疹病毒感染、HTLV-I 感染通路則涉及病毒感染的調(diào)控。研究表明連花清瘟膠囊可降低慢阻肺患者痰液中炎性反應(yīng)因子IL-8、IL-17、IL-23和TNF-α的水平及血液中IL-8和IL-17的水平[19]，還可以抑制病毒誘導(dǎo)的NF-kB活化及IL-6、IL-8、TNF-a、IP-10基因表達(dá)[20]。另有研究表明連花清瘟膠囊在小兒肺炎的治療中，顯著降低血清中IL-10， IL-17，TNF-α等炎性反應(yīng)因子水平，減緩炎性反應(yīng)滲出物對肺功能的損傷[21]。在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用連花清瘟膠囊可明顯改善肺部感染患者的免疫功能，促進(jìn)其癥狀緩解[22]，這些都與我們的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究結(jié)果相吻合。

雖然有研究顯示連花清瘟膠囊中的金銀花、連翹有可能阻斷ACE2與SARS-CoV-2的結(jié)合位點，從而減輕病毒對宿主細(xì)胞的損傷[23]。但我們的基因共表達(dá)和PPI互相分析表明，ACE2與連花清瘟膠囊治療COVID-19的潛在靶點并無直接關(guān)聯(lián)，僅與其中一個靶點NOS2有共表達(dá)，所以推測ACE2受體在病毒入侵人體的過程中發(fā)揮重要作用，但在連花清瘟膠囊治療病毒感染后的肺炎中作用甚微，臨床治療COVID-19應(yīng)堅持中西醫(yī)并重和多藥聯(lián)合。

綜上所述，連花清瘟膠囊主要是通過抑制炎癥風(fēng)暴、減輕肺損傷來治療COVID-19，其次還可能影響ACE2的表達(dá)，從而阻斷SARS-CoV-2入侵發(fā)揮預(yù)防作用。

[1] 新華網(wǎng).世界衛(wèi)生組織將新冠肺炎命名為“COVID-19” [EB/OL]. [2020-02-12]. http://m.xinhuanet.com/ world/ 2020-02/12/c_1210470951.htm.

[2] 世界衛(wèi)生組織總干事在關(guān)于2019新型冠狀病毒的《國際衛(wèi)生條例》突發(fā)事件委員會新聞通報會上的發(fā)言. [EB/OL].https://www.who.int/zh/dg/speeches/detail/who-director-general-s-statement-onihr-emergency-committee-on-novel-coronavirus-(2019-ncov).

[3] 中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會. 新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）[EB/OL].（2020-03-04）[2020-03-08]. http:// www.nhc.gov.cn/yzygj/s7653p/ 202003/46c9294a7dfe4cef80dc7f5912eb1989.shtml.

[4] 龐穩(wěn)泰,金鑫瑤,龐博,等. 中醫(yī)藥防治新型冠狀病毒肺炎方證規(guī)律分析[J/OL]. 中國中藥雜志:1-8. [2020-02-28]. https://doi.org/10.19540/j.cnki.cjcmm.2020 0218.502.

[5] 王林,楊志華,張浩然,等. 連花清瘟治療新型冠狀病毒（2019-nCoV）肺炎網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究與初證[J/OL]. 中藥材: 1-8[2020-03-20]. http://kns.cnki.net/kcms/detail/ 44.1286.R. 20200228.1820.006.html.

[6] 王法財,沈炳香,何春遠(yuǎn),等. 連花清瘟顆粒對新型冠狀病毒肺炎的臨床療效及其機制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究[J/OL]. 中藥藥理與臨床: 1-22 [2020-03-20]. https:// doi.org/10.13412/j.cnki.zyyl.20200318.001.

[7] 王喜軍. 中藥及中藥復(fù)方的血清藥物化學(xué)研究[J]. 世界科學(xué)技術(shù)—中藥現(xiàn)代化, 2002, 4 (2): 1-5.

[8] 于華,賈偉娜,劉金平,等. UPLC-Q-TOF-MS法分析連花清瘟膠囊的入血成分[J]. 天津中醫(yī)藥, 2016, 33(12): 756-759.

[9] 駱凡,陳杰,袁捷,等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探索麻杏石甘湯治療新型冠狀病毒肺炎機制研究[J].陜西中醫(yī),2020,41(05):555-559.

[10] 黃松,崔明旭,劉愛玲,等.一測多評法同時測定麻杏石甘口服液中3種成分含量[J].中國獸藥雜志,2019,53(10):20-26.

[11] Lu R, Zhao X, Li J, et al. Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus: Implications for virus origins and receptor binding[J]. Lancet, 2020, 395 (10224): 565-574.

[12] 賈振華,李紅蓉,常麗萍,等. 中醫(yī)學(xué)應(yīng)對疫病的歷史回顧與思考[J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志,2020,26(11):1-7.

[13] 沈松. 連花清瘟膠囊的美國之旅[J]. 中華養(yǎng)生保健, 2016, 16 (2): 17.

[14] 朱舜亞,李曉英,魏云玲,等. 三種中藥處方對SARS相關(guān)冠狀病毒體外抑制作用的初步研究[J]. 生物技術(shù)通訊, 2003, 14 (5): 390-392.

[15] 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會. 中東呼吸綜合征病例診療方案 (2015年版) [J]. 中國病毒病雜志, 2015, 5 (5): 352-354.

[16] DING Y, ZENG L, LI R, et al. The Chinese prescription lianhuaqingwen capsule exerts anti-influenza activity through the inhibition of viral propagation and impacts immune function[J]. BMC Complement Altern Med, 2017, 17(1): 130.

[17] Huang C L, Wang Y M, Li X W, et al. Clinical Features of Patients Infected With 2019 Novel Coronavirus in Wuhan, China[J]. Lancet, 2020, 395 (10223): 497-506.

[18] Alimuddin Zumla, David S Hui,Esam I Azhar, et al. Reducing mortality from 2019-nCoV: host-directed therapies should be an option[J]. Lancet, 2020, 395 (10224): e35-e36.

[19] Dong L, Xia JW, Gong Y, et al. Effect of lianhuaqingwen capsules on airway inflammation in patients with acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease[J]. Evid Based Complement Alternat Med, 2014: 637969.

[20] Ding Y W, Zeng L J, Li R F, et al. The Chinese Prescription Lianhuaqingwen Capsule Exerts Anti- Influenza Activity Through the Inhibition of Viral Propagation and Impacts Immune Function[J]. BMC Complement Altern Med, 2017, 17 (1): 130.

[21] 李鐵輝. 連花清瘟膠囊治療急性上呼吸道感染的臨床效果評價[J]. 中國醫(yī)藥指南, 2019, 17 (12): 199-200.

[22] 陳麗云,王銀娣,黃漢. 連花清瘟膠囊抗流感病毒臨床療效觀察[J]. 甘肅醫(yī)藥, 2017, 36(08): 666-667.

[23] 牛明,王睿林,王仲霞,等. 基于臨床經(jīng)驗和分子對接技術(shù)的抗新型冠狀病毒中醫(yī)組方快速篩選模式及應(yīng)用[J/OL]. 中國中藥雜志:1-8[2020-02-28].https://doi.org/10.19540/ j.cnki.cjcmm.20200206.501.

TO EXPLORE THE MECHANISM OF LIANHUA QINGWEN CAPSULE IN THE PREVENTION AND TREATMENT OF COVID-19 BASED ON NETWORK PHARMACOLOGY

MA Ying1，ZHANG Feng2，WANG Liang3，*WANG Bo-long1

（1. School of Chemical and Biological Engineering,Yichun University, Yichun, Jiangxi 336000, China; 2. Department of Medicine, Changzheng Hospital, Naval Medical University, Shanghai 200003, China; 3. Institute of Chinese Materia Medica, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China）

To investigate the mechanism of active constituents of Lianhua Qingwen capsule in the prevention and treatment of Novel Coronavious Pneumonica based on network pharmacology.Active constituents of Lianhua Qingwen capsule were determined by literature mining, and targets of active constituents were retrieved based on TCMSP and Swiss Target Prediction database. Cytoscape3.6.1 software was used to draw the network of active constituents-targets. GeneCards database was used to query targets of Novel Coronavious Pneumonica, and targets of its active components of Lianhua Qingwen capsule were mapped to each other to screen out common targets. Using STRING platform to construct target genes interaction network and extract key targets, so as to analyze the GO（Gene Ontology）gene function and pathway of key targets.24 active constituents of Lianhua Qingwen capsule acted on 33 targets of Novel Coronavious Pneumonica, among which NOS2 was co-expressed with angiotensin-converting enzyme II. TNF, TP53, IL6, CASP3 IL2, MAPK14 and RELA, a total of seven key target genes involved in the immune system process, multicellular organisms, detoxification process, stimulus-response, antioxidant activity and other biological processes and functions; regulating Pertussis, Chagas disease, Hepatitis B, Tuberculosi, Influenza A, Epstein-Barr virus infection, Herpes simplex infection n, PI3K-Akt signaling pathway, TNF signaling pathway, MAPK signaling pathway, T cell receptor signaling pathway and other signaling pathways.Lianhua Qingwen capsule had a certain blocking effect on the invasion of human receptor ACE2 by SARS-CoV-2, at the same time, which played a role in inhibiting inflammatory storm and regulating the body's immunity.

Lianhua Qingwen capsule; active constituents; COVID-19; network pharmacology; gene coexpression

R563.1+4

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2021.01.015

1674-8085(2021)01-0089-05

2020-09-18；

2020-11-12

馬 穎(1996-)，女，江西九江人，碩士生，主要從事臨床藥學(xué)研究(E-mail:1832516974@ qq.com);

張 鳳(1985-)，女，四川成都人，副主任藥師，博士，主要從事臨床藥學(xué)與系統(tǒng)生物學(xué)(E-mail:fengzhangky@aliyun.com);

王 亮(1988-)，男，上海人，博士生，主要從事中藥注射劑代謝和中藥化學(xué)(E-mail:15102164592@163.com);

*王博龍(1977-)，男，陜西扶風(fēng)人，副教授，博士，碩士生導(dǎo)師，主要從事藥物臨床前藥理研究及臨床有效性與安全性評價(E-mail：wblong77@126.com）.