藍漿果離體葉片愈傷組織分化研究

摘 要：以南方高叢藍漿果品種“南月”優(yōu)選系離體葉片誘導出的愈傷組織為材料，開展了激素、培養(yǎng)基及光照強度對愈傷組織分化影響的研究。結果表明：不同激素處理對藍漿果葉片愈傷組織分化的效果不同，其中以4mg/L的ZT誘導分化效果最好;經(jīng)MWPM培養(yǎng)基培養(yǎng)的愈傷組織轉(zhuǎn)綠率最高;光照強度對藍漿果葉片愈傷組織分化具有一定的影響，強光下誘導出的愈傷組織分化率較高。

關鍵詞：藍漿果葉片;愈傷組織分化;激素;培養(yǎng)基;光照

中圖分類號 Q813.1;Q949.772.3 文獻標識碼 A文章編號 1007-7731（2021）03-0015-02

愈傷組織在除去生長素或降低生長素濃度的培養(yǎng)基上即能發(fā)生器官的再分化，形成不定芽。筆者以南方高叢藍漿果品種“南月”優(yōu)選系A18愈傷組織為材料，研究激素、培養(yǎng)基、光照強度對藍漿果葉片愈傷組織分化的影響，以期為建立高效的藍漿果再生體系提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料 南方高叢藍漿果品種“南月”優(yōu)選系A18誘導出并培養(yǎng)30d的愈傷組織。

1.1.2 培養(yǎng)基 基本培養(yǎng)基為WPM（不同培養(yǎng)基處理除外），在培養(yǎng)基中加入蔗糖25g/L（不同蔗糖濃度處理除外）、瓊脂5g/L、TDZ 0.5mg/L（不同激素處理除外），pH調(diào)至5.3。配制好的培養(yǎng)基經(jīng)常規(guī)滅菌后備用。

1.2 方法 取培養(yǎng)30d的愈傷組織接種于培養(yǎng)基上， 每個處理接種30塊愈傷組織，于溫度（25±2）℃、光照1800～2000lx（不同光照處理除外）、光照時間16h/d的條件下培養(yǎng)。每天觀察愈傷組織轉(zhuǎn)化情況，60d后統(tǒng)計轉(zhuǎn)綠率及出芽情況。

轉(zhuǎn)綠率（%）=（轉(zhuǎn)綠芽塊數(shù)/接種芽塊數(shù)）×100

1.2.1 細胞分裂素對藍漿果愈傷組織分化的影響 激素處理設置為：ZT 4mg/L、TDZ 0.5mg/L、CPPU 2mg/L，對照（不添加任何細胞分裂素）。

1.2.2 培養(yǎng)基對藍漿果愈傷組織分化的影響 取培養(yǎng)30d的愈傷組織接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基分別設置為WPM、MWPM、1/2WPM（大量元素減半，微量不變）、1/2MS（大量元素減半，微量不變）。

1.2.3 光照強度對愈傷組織分化的影響 光照強度處理設置為：全暗（0）、弱光（0～500lx）、正常光（1000～1500lx）、強光（2000～2500lx）。

1.3 數(shù)據(jù)處理 利用Excel2003軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1 激素對藍漿果愈傷組織分化的影響 將生長較好的愈傷組織接種到分化培養(yǎng)基上，愈傷組織繼續(xù)膨大增殖，雖然增殖較慢，但20d后能夠看到愈傷組織的表面有白色透明突起，標志著分化的開始。繼續(xù)培養(yǎng)，可以得到綠色的小芽苗。由表1可知，不同激素處理對藍漿果葉片愈傷組織分化的效果不同。4mg/L ZT和 0.5mg/L TDZ所處理的愈傷組織分化率一致，但芽點數(shù)量及質(zhì)量以ZT效果較好;經(jīng)2mg/L CPPU處理的愈傷組織轉(zhuǎn)綠率低且大部分枯死;對照組愈傷組織分化效果居中。由此可見，4mg/L ZT誘導分化效果最好。

2.2 培養(yǎng)基對藍漿果愈傷組織分化的影響 由表2可知，培養(yǎng)基對愈傷組織轉(zhuǎn)化具有一定影響。其中，經(jīng)MWPM培養(yǎng)的愈傷組織轉(zhuǎn)綠率最高，其他幾種培養(yǎng)基轉(zhuǎn)綠率相差不大，但經(jīng)不同培養(yǎng)基培養(yǎng)的愈傷組織在轉(zhuǎn)綠后均呈枯萎狀。

2.3 光照強度對藍漿果愈傷組織分化的影響 由表3可知，光照強度對愈傷組織分化影響較大。全暗條件下，愈傷組織轉(zhuǎn)綠率為0，愈傷呈黃褐色;弱光下，愈傷組織轉(zhuǎn)綠率為36.67%，芽點量中等，色澤綠但部分呈枯萎狀;正常光下，轉(zhuǎn)綠率為86.67%，芽點質(zhì)量與弱光下誘導出的不定芽相同;強光下，愈傷組織轉(zhuǎn)綠率為90%，但芽點數(shù)量較少，色澤綠但部分呈枯萎狀。由此可見，光照強度對藍漿果葉片愈傷組織分化具有一定的影響，強光下誘導出的愈傷組織分化率較高。

3 結論與討論

影響愈傷組織分化為不定芽的因素有很多[1-2]，如激素、培養(yǎng)基及光照條件、愈傷組織轉(zhuǎn)接時間、愈傷組織轉(zhuǎn)接方式等。低濃度的生長素和細胞分裂素配比有利于愈傷組織的分化[3-4]，若細胞分裂素在培養(yǎng)基中添加較少，則不能促進分化，但添加過多也會使愈傷組織變硬，失去光澤，顏色由綠變成褐色，因此選擇適當?shù)募毎至阉貪舛扔欣谒{漿果愈傷組織分化出芽。本研究中選取較常用的幾個誘導不定芽再生的激素進行對比，結果顯示適宜濃度的ZT與TDZ較適宜誘導愈傷組織分化為不定芽。任何一種植物的組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基的篩選是必不可少的過程。張愛香等[5]對春石斛蘭愈傷組織組織進行分化時對培養(yǎng)基進行了篩選，發(fā)現(xiàn)愈傷組織分化率最高的培養(yǎng)基為MS+NAA 1.2mg/L+KT1.5mg/L。本試驗中，較利于愈傷組織分化的基本培養(yǎng)基為MW PM。光照條件是葉片愈傷組織誘導和分化的一個重要因素。通常情況下，在離體培養(yǎng)過程中，不同的物種、同一物種的不同外植體甚至同一外植體的不同誘導階段對光照的反應都有可能不同。本研究中，強光照較利于愈傷組織分化，說明在進行愈傷組織分化試驗時有必要進行一定的光照。

愈傷組織的質(zhì)量是影響其分化的主要因素。愈傷組織塊較干燥、色澤內(nèi)部淡黃外表白色、結構緊實、表面有白色顆粒狀凸起的愈傷組織容易分化成苗。一般在白色凸起部位先呈現(xiàn)綠色，最后發(fā)育成芽。表面濕潤、松軟的愈傷組織塊不易分化出芽。顏色暗黃的愈傷組織塊在光照下極易褐化，不具有分化能力。在進行轉(zhuǎn)基因研究時需對愈傷組織狀況進行篩選，把握好最佳愈傷組織分化時間。

參考文獻

[1]SKOKUT T A，MANCHESTER J，SCtfAEFER J.Re Dmeration in Alfalfa Tissue Culture[J].Plant Physiol，1985，79（3）：579-583.

[2]Pelletier G，Pelletier A.White clover（Tri foliamrepens）tissue culture，invitro，variability of regenerated plants from callus tissue，invitro，variability of regenerated plants[J].Plant Cell，1971，21：221-233.

[3]羅源，陳耀鋒，李春蓮，等.馬鈴薯莖段愈傷組織培養(yǎng)體系的優(yōu)化[J].西北農(nóng)林科技大學學報（自然科學版），2007，35（10）：160-162.

[4]張二芹，馬強，王云，等.不同品種紫花苜蓿愈傷組織及分化體系的建立[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2012，40（29）：14172-14173.

[5]張愛香，左利兵，劉會清，等.春石斛蘭愈傷組織的誘導及分化培養(yǎng)基的篩選[J].河北北方學院學報（自然科學版），2011，27（1）：36-37.

（責編：徐世紅）

作者簡介：張祝麗（1985—），女，安徽安慶人，從事園林園藝方面工作。? 收稿日期：2021-01-07