HPV E6/E7 mRNA結合HPV L1衣殼蛋白檢測診斷子宮頸癌前病變的臨床意義

高坤

子宮頸上皮不典型增生（CIN）屬癌前病變，發(fā)病原因與人乳頭瘤病毒（HPV）感染、性伴侶較多等因素相關，盡早診斷治療，對阻斷病情發(fā)展、改善預后具積極意義[1-2]。HPV E6/E7與細胞結合產(chǎn)物，可改變細胞周期循環(huán)，影響基因組穩(wěn)定性，引發(fā)宮頸上皮細胞永生化，屬HPV早期開放讀碼框架，因此在對子宮頸癌前病變診斷中，可通過HPV E6/E7 mRNA 檢查診斷[3]。HPV L1 衣殼蛋白表達與HPV復制過程相關，屬晚期讀碼框，與L2基因編碼的次要衣殼蛋白共同組成HPV衣殼。相關研究表示，在對子宮頸癌前病變診斷中，HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣殼蛋白均具良好診斷價值，且兩者聯(lián)合后可進一步提升診斷質(zhì)量[4]。為此，本次研究選泰安市婦幼保健院2019年1月-2020年12月HPV DNA陽性樣本94例，探究以上兩種診斷辦法單獨、聯(lián)合診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選泰安市婦幼保健院2019年1月-2020年12月宮頸液基薄層細胞學檢查（TCT）HPV DNA陽性患者94例為研究對象，根據(jù)組織細胞學檢查結果將其設為觀察組（宮頸上皮內(nèi)瘤變，n=84）、對照組（正常宮頸，n=10）；其中觀察組包括CIN1（n=31）、CIN2（n=29）、CIN3（n=24）。納入標準：精神狀態(tài)正常，可配合完成檢查；取樣理想，可有效完成檢查。排除標準：輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌等惡性腫瘤患者；近期妊娠史；宮頸手術史；免疫系統(tǒng)疾病、長期糖皮質(zhì)激素治療史。患者知情同意本研究，研究獲得倫理委員會批準。

1.2 方法

HPV E6/E7 mRNA 檢測：應用分支鏈 DNA 技術，將TCT樣本進行定量檢測；樣本常規(guī)包埋切片，脫蠟后使用刀片刮下組織后放入離心管，加入裂解液，在65 ℃環(huán)境下反應1 h。依據(jù)試劑盒說明書進行雜交捕獲mRNA，信號放大，標記熒光物質(zhì)的發(fā)光底物，經(jīng)計算機自動判定結果。

HPV L1衣殼蛋白檢測：宮頸病理組織包埋切片、抗原修復，加3% H2O2消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，血清封閉，加HPV L1衣殼蛋白抗體，抗體濃度為1∶200；過夜，加二抗（山羊抗鼠），清洗，DAB、蘇木素處理，梯度酒精脫水，二甲苯透明處理，最后使用中性樹膠封片，鏡下觀察。鏡下見1個細胞紅染即為陽性。

1.3 觀察指標及診斷標準

以組織細胞學結果為金標準，比較HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣殼蛋白對樣本單獨、聯(lián)合診斷結果；聯(lián)合診斷兩者其中一方為陽性，即判斷為聯(lián)合陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行分析和處理，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，多組間比較采用方差分析，計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較

兩組年齡、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、分娩次數(shù)比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組一般資料比較（±s）

表1 兩組一般資料比較（±s）

分娩次數(shù)（次）組別 年齡（歲）BMI（kg/m2）對照組（n=10） 38.10±6.24 24.70±2.96 0.96±0.24觀察組 CIN1（n=31） 38.97±5.40 24.76±1.75 1.11±0.20 CIN2（n=29） 38.76±6.33 25.00±2.34 1.08±0.19 CIN3（n=24） 38.02±5.41 25.49±2.40 1.16±0.31 F值 0.154 0.554 1.801 P值 0.927 0.647 0.153

2.2 兩組 HPV E6/E7 mRNA 陽性檢出率

觀 察 組 HPV E6/E7 mRNA 總 陽性 檢出 率為67.86%（57/84），較對照組的20.00%（2/10）高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；其中CIN1、CIN2、CIN3陽性檢出率均較對照組高，且三組陽性檢出率呈現(xiàn)逐漸上升趨勢，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組HPV E6/E7 mRNA陽性檢出率比較

2.3 兩組HPV L1衣殼蛋白陽性檢出率

觀察組HPV L1衣殼蛋白陽性檢出率為35.71%（30/84），較對照組的10.00%（1/10）高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），CIN1中 HPV L1衣殼蛋白陽性檢出率較對照組高，且CIN1、CIN2、CIN3陽性檢出率呈現(xiàn)逐漸下降趨勢，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表 3。

表3 兩組HPV L1衣殼蛋白陽性檢出率比較

2.4 不同檢測方式的診斷價值比較

HPV E6/E7 mRNA+HPV L1 衣 殼 蛋 白 聯(lián) 合 診斷的準確度、靈敏度分別為82.98%、82.14%，較HPV E6/E7 mRNA（69.15%、67.86%）、HPV L1 衣殼蛋白（41.49%、35.71%）單獨檢驗高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表4。

表4 不同檢測方式的診斷價值比較（%）

3 討論

HPV感染為子宮頸癌主要發(fā)病因素，可誘導宮頸上皮細胞非典型增生，并逐漸誘發(fā)子宮頸癌，威脅女性生命安全。HPV DNA檢查為子宮頸癌前病變主要檢查方式，有效提升診斷敏感性，多與TCT聯(lián)合應用，可顯著提升診斷準確性，但診斷費用較高[5]。HPV E6/E7編碼的E6、E7蛋白為引起宮頸上皮細胞永生化主要基因，使宮頸癌前病變向子宮頸癌進展，因此在對子宮頸癌前病變診斷中，以HPV E6/E7 mRNA為標志物的檢查在臨床應用頻率逐漸增高[6]。相關研究表示，在對早期子宮頸癌及癌前病變診斷中，應用HPV E6/E7診斷靈敏度較好，其水平增高提示腫瘤細胞增殖分裂速度增快，處于疾病進展期[7]；同時此種診斷方式也可用于低危HPV隨訪觀察，對早期發(fā)現(xiàn)、治療宮頸癌前病變具積極意義[8]。本次研究中，對所有患者均進行HPV E6/E7 mRNA檢測，結果發(fā)現(xiàn)，與正常宮頸組織相比，子宮頸癌前病變患者HPV E6/E7 mRNA陽性檢出率顯著升高，且CIN1、CIN2、CIN3陽性檢出率呈現(xiàn)逐漸上升趨勢（P＜0.05），證實HPV E6/E7 mRNA對子宮頸癌變進展評估、診斷價值。

HPV L1衣殼蛋白能夠反映病毒復制狀態(tài)，為免疫反應攻擊病毒感染細胞主要靶位，可與T細胞、主要組織相容性復合物形成免疫復合物，激活機體免疫反應，而加強子宮頸自愈傾向[9]。HPV DNA與宿主染色體整合后，病毒DNA基因在激活狀態(tài)下不斷表達，阻斷上皮細胞成熟過程，病毒無法完成完整生活周期，HPV L1衣殼蛋白表達逐漸消失，機體無法有效刺激免疫反應，發(fā)生免疫逃逸，最終引發(fā)宮頸癌變進展[10]。本次研究結果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，觀察組HPV L1陽性檢出率顯著較高，且CIN1組HPV L1衣殼蛋白陽性檢出率較對照組高（P＜0.05），可說明，HPV L1衣殼蛋白水平升高，提示病毒DNA表達速度加快，HPV L1衣殼蛋白可用于子宮頸癌前病變診斷。

本次研究中，對94例患者進行HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣殼蛋白單獨及聯(lián)合診斷，結果發(fā)現(xiàn)，HPV E6/E7 mRNA+HPV L1 衣殼蛋白診斷準確度、靈敏度分別為82.98%、82.14%，較兩者單獨檢驗高（P＜0.05），考慮原因為，在單純應用HPV E6/E7 mRNA診斷中，因早期疾病進展時，病毒增殖分裂速度相對較慢，可能會影響HPV E6/E7 mRNA陽性檢出率，因此對早期子宮頸癌前病變診斷敏感性較低[11]；部分患者合并HPV感染，但未發(fā)生細胞組織病變時，會出現(xiàn)HPV E6/E7 mRNA陽性情況，可能會出現(xiàn)誤診情況[12-13]；單獨使用HPV L1衣殼蛋白診斷時，在CIN2、CIN3級癌前病變診斷中陽性檢出率偏低，難以滿足臨床診斷效率[14]；而兩者聯(lián)合診斷后，可滿足子宮頸癌前病變各個階段病變檢出情況，實現(xiàn)兩種診斷方式優(yōu)勢互補，因此兩者聯(lián)合后可提升診斷準確度及敏感度。葉建紅等[15]在對127例HPV DNA陽性樣本研究中發(fā)現(xiàn)，HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣殼蛋白聯(lián)合診斷后，特異度顯著提升（87.50% vs 75.00% vs 62.50%），說明聯(lián)合診斷后可提升診斷效果，減少誤診率，但本次研究其單獨診斷、聯(lián)合診斷特異度無顯著差異，與本次研究不一致，考慮原因可能與本次陰性樣本數(shù)量較少、患者疾病特征差異性等因素有關。

綜上，對子宮頸癌前病變診斷中，隨病癥進展，HPV E6/E7 mRNA 陽性檢出率逐漸上升，HPV L1 衣殼蛋白陽性檢出率逐漸下降；兩種診斷辦法聯(lián)合可提升診斷準確度及靈敏度。