擴(kuò)展青霉侵染對(duì)蘋(píng)果果實(shí)膜磷脂代謝的影響

彭 慧，龔 迪，魏亞楠，楊 乾，宗元元，Dov PRUSKY,，Edward SIONOV，畢 陽(yáng),*

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；2.以色列農(nóng)業(yè)研究組織農(nóng)產(chǎn)品采后科學(xué)部，以色列 里雄萊錫安 7505101）

由擴(kuò)展青霉（Penicillium expansum）引起的青霉病是蘋(píng)果的重要采后病害，青霉病不僅導(dǎo)致蘋(píng)果腐爛及品質(zhì)劣變，而且會(huì)在果實(shí)體內(nèi)積累棒曲霉毒素[1]。P.expansum主要經(jīng)由果實(shí)表面的傷口侵染，通過(guò)分泌胞外酶致使傷口處組織潰爛[2]。但該病原菌侵染如何影響果實(shí)細(xì)胞膜完整性和與其相關(guān)的磷脂代謝尚不清楚。前人研究表明，多種真菌侵染均會(huì)增加果實(shí)的細(xì)胞膜透性[3]，P.expansum侵染會(huì)導(dǎo)致蘋(píng)果果實(shí)細(xì)胞膜透率升高[4]；輪紋病菌（Botryosphaeria berengriana）和褐腐病菌（Monilinia fructigena）侵染也會(huì)增加梨果實(shí)的膜透性[5]；在膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）侵染的柑橘果實(shí)中也可觀察到類(lèi)似的現(xiàn)象[6]。進(jìn)一步的研究表明，病原菌侵染所導(dǎo)致的植物細(xì)胞膜透性增加與磷脂酶活性的提高、膜磷脂的降解[7]、磷脂酸（phosphatidic acid，PA）和脂肪酸的釋放[8]有關(guān)。焦腐病菌（Lasiodiplodia theobromae）侵染會(huì)增加龍眼果實(shí)的磷脂酶D（phospholipase D，PLD）活性、降低磷脂酰膽堿（phosphatidylcholine，PC）和磷脂酰肌醇（phosphatidylinositol，PI）的含量、提高PA和飽和脂肪酸含量[9]；同樣，霜疫霉菌（Peronophythora litchii）侵染也顯著提高了荔枝果實(shí)的PLD活性[10]，增加了棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞油酸含量[11]；此外，擬莖點(diǎn)霉（Phomopsis longanae）侵染龍眼后果實(shí)飽和脂肪酸含量增加、不飽和脂肪酸含量和脂肪酸不飽和度降低[12]。由此表明，真菌侵染能夠激活果實(shí)的膜磷脂代謝，導(dǎo)致果實(shí)PA和脂肪酸的釋放[13-14]。盡管已有真菌侵染對(duì)果實(shí)細(xì)胞膜完整性及磷脂代謝影響的報(bào)道，但在不同侵染階段果實(shí)細(xì)胞膜完整性以及膜磷脂代謝如何變化鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究以‘元帥’蘋(píng)果為試材，觀察P.expansum接種后病斑直徑的變化，測(cè)定侵染對(duì)果實(shí)細(xì)胞膜透性的影響，分析膜磷脂代謝關(guān)鍵酶活性和底物產(chǎn)物含量的變化，以期為揭示真菌侵染對(duì)果實(shí)細(xì)胞膜磷脂代謝的原理提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試‘元帥’（Malus domesticaL.cv.Delicious）商業(yè)成熟果實(shí)于2018年10月采自甘肅省條山集團(tuán)景泰縣果園。選取外觀整齊、大小一致、無(wú)病蟲(chóng)傷和機(jī)械傷的果實(shí)，單果套網(wǎng)套后裝入瓦楞紙包裝箱，于當(dāng)天運(yùn)抵甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院采后生物與技術(shù)實(shí)驗(yàn)室，在常溫（22±2）℃、相對(duì)濕度50%～60%下貯藏待用。

P.expansum（T01）菌株由中國(guó)科學(xué)院植物學(xué)研究所果實(shí)逆境應(yīng)答及生物控制技術(shù)研究組提供，PDA上保存待用。

PC、PI、PA、磷脂酶A2（phospholipase A2，PLA2）、磷脂酶C（phospholipase C，PLC）、PLD試劑盒 上海酶聯(lián)生物科技有限公司；棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸（標(biāo)準(zhǔn)品） 美國(guó)Sigma-Aldrich公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LDZX-30KBS型立式壓力蒸汽滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠；SW-CJ-2FD型超凈工作臺(tái) 蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；DHP-9082型恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒科學(xué)儀器有限公司；A11 basic S025型研磨機(jī) 廣州艾卡儀器設(shè)備有限公司；DW-HL218型超低溫冰箱 中科美菱低溫科技有限公司；DDS-307A型電導(dǎo)率儀 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；H2050R型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)有限公司；UV-2450紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì) 日本島津公司；450-GC氣相色譜儀美國(guó)VARIAN公司。

1.3 方法

1.3.1 果實(shí)損傷接種

孢子懸浮液配制參照Wang Kaituo等[15]的方法。取25 ℃下培養(yǎng)7 d的P.expansum一皿，加入10 mL無(wú)菌水，用無(wú)菌涂布器輕輕刮下培養(yǎng)基表面的真菌孢子，經(jīng)4 層紗布過(guò)濾后，將濾液轉(zhuǎn)入50 mL三角瓶中，加入25 μL體積分?jǐn)?shù)0.05% Tween-80后搖勻，再漩渦振蕩數(shù)秒，使孢子分布均勻，采用血球計(jì)數(shù)板法計(jì)算出孢子濃度，最終將孢子懸浮液稀釋至1.0×106個(gè)孢子/mL。

損傷接種參照Ge Yonghong等[16]的方法。果實(shí)先用自來(lái)水沖洗干凈，然后用體積分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈉消毒2 min，再用清水沖洗晾干。用體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇棉球?qū)麑?shí)表面消毒，稍作晾干后，用滅菌鐵釘于赤道部位對(duì)稱(chēng)打孔2 個(gè)，孔內(nèi)分別接入20 μL上述孢子懸浮液（接種組）和20 μL無(wú)菌水（對(duì)照組）。稍作晾干裝入聚乙烯薄膜袋中，于室溫（（22±2）℃、相對(duì)濕度85%～90%）條件下貯藏待用，于貯藏的第0、1、2、4、6天測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。每處理用果實(shí)30 個(gè)，重復(fù)3 次。

1.3.2 病斑直徑測(cè)定

采用十字交叉法測(cè)定病斑直徑，每處理用果實(shí)3 個(gè)，重復(fù)3 次。

1.3.3 細(xì)胞膜透過(guò)率測(cè)定

細(xì)胞膜透過(guò)率測(cè)定參照Ren Yalin等[17]的方法。用直徑10 mm打孔器打取果實(shí)病斑邊緣外以外12 mm以內(nèi)健康組織，切取皮下2～5 mm處果肉組織圓片3.0 g，用去離子水將其沖洗至少3 次，用濾紙吸干多余水分，放入盛有30 mL去離子水的燒杯中，用電導(dǎo)率儀分別測(cè)初始和室溫條件下放置3 h后的電導(dǎo)率。然后將燒杯及組織置于95 ℃水浴鍋中水浴30 min，待冷卻至室溫后測(cè)定最終電導(dǎo)率。細(xì)胞膜透過(guò)率用公式（1）計(jì)算。

1.3.4 生化指標(biāo)測(cè)定取樣

樣品前處理參照Gong Di等[4]的方法并作修改。用無(wú)菌手術(shù)刀切取果實(shí)病斑以外12 mm以內(nèi)健康部位果皮及其皮下2～4 mm組織，液氮速凍后用研樣機(jī)研為粉末，裝入50 mL離心管，于-80 ℃超低溫冰箱中保存待用。

1.3.5 磷脂酶活力的測(cè)定

粗酶液的提取參照Alferez等[18]的方法并略修改。取0.5 g冷凍粉末，加入4.5 mL 0.1 mol/L pH 7.4的磷酸緩沖液，振蕩混勻，4 ℃、3 000×g離心15 min，上清液即為粗酶液。PLA2、PLC、PLD活力均采用相關(guān)試劑盒說(shuō)明書(shū)的方法進(jìn)行測(cè)定，單位均為U/g。

1.3.6 PC、PI和PA含量的測(cè)定

磷脂的提取參照許佳妮等[19]的方法并略修改。取0.1 g冷凍粉末，加入1 mL氯仿/甲醇溶液（2∶1，V/V）超聲提取30 min后，室溫下靜置30 min，在4 ℃、3 000×g下離心20 min，取上清液待測(cè)。

PC、PI、PA含量測(cè)定均參照相應(yīng)試劑盒方法，單位均為μg/g。

1.3.7 脂肪酸含量的測(cè)定

脂肪酸含量測(cè)定參照胡妍蕓等[20]的方法并略修改。取冷凍粉末2.0 g，加入5 mL石油醚-乙醚（4：3，V/V）混合液在0～4 ℃下浸提24 h，再加入5 mL 0.4 mol/L的氫氧化鉀-甲醇溶液，室溫下甲酯化2 h，重蒸餾水分離得到有機(jī)相，氮?dú)獯蹈桑? mL氯仿溶解，無(wú)水硫酸鈉除水過(guò)0.45 μm膜，裝入進(jìn)樣小瓶中用氣相色譜儀分析。色譜柱為極性柱CP-WAX（30 m×0.32 mm，0.5 μm）；升溫程序：120 ℃下保持2 min，以6 ℃/min升至2 3 0 ℃，保持1 0 m i n；載氣（高純N2）流速2 mL/min，進(jìn)樣量1 μL；分流比為20∶1，進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度均為250 ℃。在相同條件下，將一定質(zhì)量濃度的不同脂肪酸標(biāo)品和待測(cè)樣品分別依次進(jìn)樣，通過(guò)比較保留時(shí)間進(jìn)行定性，通過(guò)峰面積歸一化法定量。脂肪酸不飽和度利用公式（2）計(jì)算。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

以上每項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定均重復(fù)3 次。全部數(shù)據(jù)用Microsoft Excel 2010軟件計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差，采用Origin 9.0軟件作圖，利用SPSS 19.0軟件進(jìn)行Duncan’s多重差異顯著性分析和Pearson相關(guān)分析（P＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 P.expansum侵染對(duì)果實(shí)病斑直徑的影響

圖1 P.expansum侵染后蘋(píng)果果實(shí)病斑直徑（A）和外觀（B）Fig.1 Effect of P.expansum infection on lesion diameter (A)and appearance (B) of apple fruits

由圖1可知，P.expansum侵染后果實(shí)病斑直徑逐漸增大，而對(duì)照果實(shí)的病斑直徑基本保持穩(wěn)定。侵染果實(shí)的病斑直徑在前2 d與對(duì)照相比無(wú)顯著差異，2 d后均顯著高于對(duì)照組，第4天時(shí)高出對(duì)照組3.19 倍（圖1）。上述結(jié)果表明，果實(shí)和病原菌互作早期（前2 d）果實(shí)抗性占優(yōu)勢(shì)，而2 d后病原菌的致病性明顯提高，病斑明顯增大。

2.2 P.expansum侵染對(duì)果實(shí)細(xì)胞膜透過(guò)率的影響

圖2 P.expansum侵染對(duì)蘋(píng)果果實(shí)細(xì)胞膜透過(guò)率的影響Fig.2 Effect of P.expansum infection on cell membrane permeability of apple fruits

細(xì)胞膜透過(guò)率是反映果實(shí)細(xì)胞膜完整性的重要指標(biāo)，病原菌侵染會(huì)破壞果實(shí)細(xì)胞膜的完整性[21]。無(wú)論是接種組還是對(duì)照組，果實(shí)細(xì)胞膜透過(guò)率整體均呈上升趨勢(shì)，侵染早期（前2 d）果實(shí)細(xì)胞膜透過(guò)率與對(duì)照組無(wú)明顯差異，而侵染后期（2 d后）顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）（圖2）。由此表明，P.expansum侵染早期對(duì)細(xì)胞膜透過(guò)率影響不大，但在侵染后期明顯破壞了細(xì)胞膜的完整性。

2.3 P.expansum侵染對(duì)果實(shí)膜磷脂代謝的影響

圖3 P.expansum 侵染對(duì)蘋(píng)果果實(shí)PLA2（A）、PLC（B）、PLD（C）活力以及PC（D）、PI（E）和PA（F）含量的影響Fig.3 Effect of P.expansum infection on the activities of PLA2 (A),PLC (B) and PLD (C) and the contents of PC (D), PI (E) and PA (F)in apple fruits

PLA2、PLC和PLD是降解膜磷脂的主要酶，PLA2專(zhuān)一性水解PC的sn-2位酯鍵，釋放脂肪酸；PLC可專(zhuān)一性水解PI產(chǎn)生三磷酸肌醇和二酰甘油；PLD可將PC水解為PA和膽堿[22]。由圖3可知，蘋(píng)果果實(shí)的PLA2活力在侵染后先持續(xù)增高，第4天時(shí)達(dá)到峰值，再小幅下降。對(duì)照果實(shí)的PLA2活力先小幅升降，后明顯增高。侵染果實(shí)的PLA2活力均顯著高于對(duì)照組，第2天時(shí)高于對(duì)照組52.46%（P＜0.05）（圖3A）。侵染果實(shí)和對(duì)照果實(shí)的PLC活力整體上均呈逐漸升高趨勢(shì)，但侵染果實(shí)PLC活力顯著高于對(duì)照組，第4天時(shí)侵染果實(shí)PLC活力高于對(duì)照組16.36%（P＜0.05）（圖3B）。侵染果實(shí)PLD活力持續(xù)升高，對(duì)照果實(shí)PLD活力2 d前基本保持穩(wěn)定，2 d后逐漸升高。侵染果實(shí)PLD活力顯著高于對(duì)照組，其中第2天達(dá)到最大差異且高于對(duì)照組39.28%（P＜0.05）（圖3C）。侵染和對(duì)照果實(shí)的PC和PI含量均逐漸降低，侵染果實(shí)的PC和PI含量在早期（2 d前）與對(duì)照組無(wú)顯著差異，后期（2 d后）顯著低于對(duì)照組，第4天時(shí)分別低于對(duì)照組16.91%和11.8%（P＜0.05）（圖3D、E）。侵染和對(duì)照果實(shí)的PA含量均逐漸升高，侵染果實(shí)的PA含量早期（2 d前）與對(duì)照組無(wú)顯著差異，后期（2 d后）顯著高于對(duì)照組，第4天時(shí)高出對(duì)照組12.74%（P＜0.05）（圖3F）。上述結(jié)果表明，P.expansum侵染伊始，果實(shí)的PLA2、PLC和PLD活力就快速升高，但侵染果實(shí)的PC、PI和PA含量在侵染后期（2 d后）才顯著低于或高于對(duì)照組。

2.4 P.expansum侵染對(duì)果實(shí)脂肪酸含量和脂肪酸不飽和度的影響

較高的不飽和脂肪酸含量對(duì)維持果實(shí)的細(xì)胞膜流動(dòng)性和完整性具有重要作用[23]。此外，細(xì)胞膜不飽和脂肪酸含量越高，果實(shí)的抗病性也越強(qiáng)[24]。侵染果實(shí)和對(duì)照果實(shí)油酸、亞油酸、亞麻酸含量均在貯藏初期迅速升高，在第1天時(shí)達(dá)到峰值，然后逐漸降低。在貯藏的第2天，侵染果實(shí)的油酸、亞油酸和亞麻酸分別比對(duì)照分別高31.58%、55.57%和43.67%（P＜0.05）（圖4A、B、C）。侵染果實(shí)棕櫚酸和硬脂酸含量在貯藏過(guò)程中逐漸升高，且在后期升高的速率加快，對(duì)照果實(shí)的含量在侵染早期（前2 d）保持穩(wěn)定，后期（2 d后）略有升高。侵染果實(shí)的棕櫚酸和硬脂酸含量在第6天時(shí)分別高出對(duì)照組49.46%和43.39%（P＜0.05）（圖4D、E）。侵染和對(duì)照果實(shí)的脂肪酸不飽和度整體呈先升高后降低的趨勢(shì)，侵染早期（前2 d）果實(shí)的脂肪酸不飽和度顯著高于對(duì)照組，第2天時(shí)高于對(duì)照組37.54%。侵染后期（4 d后）顯著低于對(duì)照組，第6天時(shí)低于對(duì)照組16.26%（P＜0.05）（圖4F）。上述結(jié)果表明，P.expansum侵染早期促進(jìn)了果實(shí)不飽和脂肪酸的釋放，而侵染后期促進(jìn)了飽和脂肪酸釋放，早期的不飽和脂肪酸釋放與果實(shí)抗病性相關(guān)，而后期的飽和脂肪酸釋放則與P.expansum的致病相關(guān)。

圖4 P.expa nsum侵染對(duì)蘋(píng)果果實(shí)油酸（A）、亞油酸（B）、亞麻酸（C）、棕櫚酸（D）、硬脂酸（E）含量和脂肪酸不飽和度（F）的影響Fig.4 Effect of P.expansum infection on the contents of oleic acid (A),linoleic acid (B), linolenic acid (C), palmitic acid (D), stearic acid (E)and the degree of unsaturation of fatty acids (F) in apple fruits

2.5 P.expansum侵染果實(shí)細(xì)胞膜透率與膜磷脂代謝相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性

由表1可見(jiàn)，P.expansum侵染果實(shí)細(xì)胞膜透過(guò)率與PLA2、PLC和PLD活力呈極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.938、0.989和0.953；與PC和PI含量呈極顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.949和-0.955；與PA含量極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.985。此外，侵染果實(shí)細(xì)胞膜透率還與棕櫚酸和硬脂酸含量顯著極正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.781和0.901。

表1 P.expansum侵染果實(shí)細(xì)胞膜透過(guò)率與膜磷脂代謝各指標(biāo)間的相關(guān)性分析（n＝15）Table 1 Correlation analysis between cell membrane permeability and phospholipid metabolism indices in apple fruits infected by P.expansum (n= 15)

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)，P.expansum侵染果實(shí)的病斑直徑在侵染早期（前2 d）無(wú)明顯變化，侵染后期（2 d后）快速升高（圖1）。由此表明，侵染早期果實(shí)對(duì)P.expansum侵染表現(xiàn)抗性，而侵染后期果實(shí)抗性減弱，病原菌的致病性明顯提高。蘋(píng)果果實(shí)早期對(duì)P.expansum的抗性涉及活性氧、抗菌物質(zhì)和病程相關(guān)蛋白等諸多方面[25]。而P.expansum對(duì)蘋(píng)果的致病性主要源自細(xì)胞壁降解酶[2]。本研究中侵染后期P.expansum顯著提高蘋(píng)果果實(shí)細(xì)胞膜透過(guò)率的結(jié)果（圖2）與P.longanae侵染龍眼和尖孢炭疽菌（Colletotrichum acutatum）侵染番石榴后的現(xiàn)象[26-27]類(lèi)似。果實(shí)細(xì)胞膜透率的增大一方面是因?yàn)榍秩緦?dǎo)致活性氧大量積累，破壞了細(xì)胞膜的完整性[28]；另一方面是因?yàn)榍秩敬龠M(jìn)果實(shí)乙烯釋放[29]，進(jìn)而能誘導(dǎo)磷脂酶活力增加，加速膜磷脂降解[30]。

侵染早期，果實(shí)PLA2活力快速升高（圖3A）。該結(jié)果與晚疫病菌（Phytophthora infestans）侵染馬鈴薯塊莖后PLA2活力增加的結(jié)果[31]類(lèi)似。侵染果實(shí)細(xì)胞膜透率與PLA2活力之間呈極顯著正相關(guān)，表明PLA2在分解膜磷脂中具有重要作用。PLA2是甘油磷脂sn-2位酯?；饷?，能夠水解產(chǎn)生油酸、亞油酸和亞麻酸等不飽和脂肪酸。關(guān)于真菌侵染如何誘導(dǎo)果實(shí)PLA2活力升高的機(jī)制研究不多。由于P.expansum侵染會(huì)促進(jìn)蘋(píng)果的乙烯釋放[4]，推測(cè)乙烯可能參與了PLA2活力的誘導(dǎo)。P.expansum侵染早期油酸、亞油酸和亞麻酸迅速釋放（圖4A～C），該結(jié)果與P.litchii侵染荔枝觀察到的不飽和脂肪酸含量升高結(jié)果[11]基本一致。有研究表明，較高油酸、亞油酸和亞麻酸含量有利于維持獼猴桃和柑橘果實(shí)細(xì)胞膜的完整性[23,32-33]。此外，不飽和脂肪酸組成和含量還與枇杷和荔枝果實(shí)的抗病力密切相關(guān)[24,34]。Feussner等[13]發(fā)現(xiàn)，不飽和脂肪酸可通過(guò)脂氧合酶途徑生成茉莉酸及其衍生物，進(jìn)而誘導(dǎo)植物抗病力。蘋(píng)果果實(shí)的棕櫚酸和硬脂酸含量在侵染后期迅速升高（圖4D、E），該結(jié)果與P.litchii侵染荔枝果實(shí)后觀察到的現(xiàn)象[11]基本類(lèi)似。侵染果實(shí)的細(xì)胞膜透率與飽和脂肪酸含量極顯著正相關(guān)。飽和脂肪酸的釋放是磷脂酶A1（phospholipase A1，PLA1）作用的結(jié)果[35]，但PLA1如何在侵染果實(shí)中發(fā)揮作用尚有待進(jìn)一步研究。

果實(shí)的PLC活力在P.expansum侵染期間持續(xù)升高（圖3B）。該結(jié)果與葉霉病菌（Cladosporium fulvum）侵染番茄葉片后PLC 4和PLC 6基因表達(dá)量升高的結(jié)果[36]類(lèi)似。PLC是一種質(zhì)膜蛋白，非特異性PC-PLC可水解PC生成二酰甘油（diacylglycerol，DAG）和磷酸膽堿，特異性PI-PLC水解4,5-二磷酸肌醇生成1,4,5-三磷酸肌醇和DAG[36]。DAG可通過(guò)DAG激酶磷酸化為PA[37]。P.expansum侵染果實(shí)PLD活力持續(xù)力升高（圖3C）。該結(jié)果與L.theobromae侵染的龍眼果實(shí)PLD活力升高結(jié)果[9]基本類(lèi)似。PLD能夠?qū)Ｒ涣λ饨Y(jié)構(gòu)磷脂PC，生成PA和膽堿陽(yáng)離子自由基團(tuán)，其活力決定了磷脂的水解強(qiáng)度[38]。乙烯能夠誘導(dǎo)番茄果實(shí)的PLC和PLD轉(zhuǎn)錄及活力升高[39-40]，表明P.expansum侵染蘋(píng)果期間PLC和PLD激活可能被乙烯促進(jìn)。此外，病原菌侵染早期激活的PLD還參與了擬南芥、水稻和番茄的防御反應(yīng)[41]。由于侵染果實(shí)的PC和PI含量分別與PLA2、PLC和PLD活力呈極顯著負(fù)相關(guān)，表明PLA2、PLC和PLD在分解膜磷脂中作用突出。PC是一種主要的膜磷脂，與其他脂質(zhì)如PI等共同維持細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)[42]。P.expansum侵染導(dǎo)致果實(shí)貯藏后期PC和PI含量快速降低（圖3D、E），該結(jié)果與L.theobromae侵染龍眼果實(shí)后觀察到的結(jié)果[9]基本一致。細(xì)胞膜磷脂可在果實(shí)抵御病原菌侵染過(guò)程中提供物質(zhì)和能量，增強(qiáng)抗病力[43]。PA作為PC、PI的部分水解產(chǎn)物，在侵染后期含量快速升高（圖3F）。前人研究表明，PA也是植物中重要的脂質(zhì)信號(hào)分子，被稱(chēng)為“脂質(zhì)第二信使”，參與多種脅迫相關(guān)的信號(hào)傳導(dǎo)[44]。據(jù)此推測(cè)，PA可能在果實(shí)抗病性中發(fā)揮重要作用。

4 結(jié) 論

P.expansum侵染蘋(píng)果早期（前2 d），果實(shí)病斑直徑無(wú)明顯變化，細(xì)胞膜透過(guò)率與對(duì)照組無(wú)顯著差異，侵染后期（2 d后）果實(shí)病斑直徑和細(xì)胞膜透過(guò)率明顯增大。P.expansum侵染激活了果實(shí)的PLA2、PLC和PLD活力，加速了膜磷脂降解，破壞了細(xì)胞膜的完整性。侵染早期促進(jìn)了果實(shí)不飽和脂肪酸的釋放，侵染后期促進(jìn)了飽和脂肪酸的釋放，侵染早期不飽和脂肪酸的迅速釋放可能與果實(shí)抗性相關(guān)。