殼寡糖對酒精誘導(dǎo)的大鼠腸道損傷的干預(yù)作用

徐 穎，王 斌,*，姜啟興，夏文水，許艷順

（1.江南大學(xué)食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122；2.江蘇省食品安全與質(zhì)量控制協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 無錫 214122）

隨著經(jīng)濟(jì)高速發(fā)展，酒精類飲料已經(jīng)成為人們?nèi)粘Ｉ钣绕涫窃诨槎Y和聚會等場合必不可少的一部分。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道[1]，2016年，全球（31億 人）有23億 人飲酒者。全球年齡≥15 歲人群中，人均總飲酒量從2005年的5.5 L純酒精升至2016年的6.4 L。除歐洲外各地人均飲酒量均有所增加，飲用較多的酒精飲料為烈酒、啤酒和葡萄酒。中國人均酒精（包括啤酒、葡萄酒、烈性酒和其他酒精飲料）消費(fèi)量在1961—2016年期間呈小幅上升趨勢。2005、2010年和2016年分別為4.1、7.1 L和7.2 L，增幅76%。2016年約有300萬 人因飲酒而死亡，占全球所有死亡人數(shù)的5.3%。如今，酒精濫用已經(jīng)成為全球疾病負(fù)擔(dān)的原因之一，酒精被列為最大的可規(guī)避風(fēng)險因素之一。

胃腸道作為與攝入體內(nèi)物質(zhì)接觸的第一道防線，非常容易受到毒素的侵害，胃腸道健康狀況不佳會對身體的整體健康水平造成嚴(yán)重影響。長期飲酒或者一次性大量攝入酒精，可引發(fā)全身炎癥，進(jìn)而損傷機(jī)體器官，造成機(jī)體組織或器官功能障礙[2-4]，引發(fā)慢性疾病，如慢性肝病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、胃腸道癌癥和炎癥性腸綜合征等[3]。慢性酒精攝入會增加胃腸道疾病的風(fēng)險。管狀胃腸道疾病發(fā)病的重要原因就是酒精影響食道、胃部和小腸的運(yùn)動，并對腸上段黏膜有直接影響。酒精及其代謝產(chǎn)物對腸道的影響主要體現(xiàn)在對腸道屏障如腸道黏膜完整性的破壞[3-4]、對腸道微生物豐度的改變[3-4]、誘導(dǎo)腸道炎癥[3-4]和誘導(dǎo)腸道組織的氧化損傷[5-7]。

殼寡糖（chitooligosaccharide，COS），也稱幾丁寡糖，是N-乙酰氨基葡萄糖通過2～10 個β-1,4-糖苷鍵連接起來的寡糖類物質(zhì)，是天然糖中唯一大量存在的堿性氨基寡糖。COS水溶性好、生物活性高、無細(xì)胞毒性，且具有抗炎[8-9]、免疫刺激[10-12]、抗氧化[12-13]和增強(qiáng)鈣吸收[14]等多種生理活性。COS可通過載體蛋白或自由擴(kuò)散等兩種或多種方式在小腸內(nèi)吸收，且可快速進(jìn)入腸道細(xì)胞內(nèi)[15]。張鑫海等[11]可通過改善斷奶仔豬的小腸絨毛和隱窩等腸道形態(tài)，改善小腸對干物質(zhì)等養(yǎng)分的吸收能力，并降低腹瀉率，從而提高仔豬的生長性能。周春燕等[10]表明COS對腸黏膜屏障有保護(hù)作用，這個保護(hù)作用可能與其能夠清除氧自由基和提高大鼠腸黏膜免疫屏障功能有關(guān)。毛興允[16]探討通過建立新生大鼠壞死性結(jié)腸炎模型，也證明了COS對腸黏膜屏障的保護(hù)作用。張行等[17]的研究則表明，COS可通過抑制Toll樣受體4（Toll-like receptors 4, TLR4）的表達(dá)以緩解大鼠腸缺血再灌注損傷。眾多的研究表明，COS可以保護(hù)腸黏膜屏障，促進(jìn)受損腸黏膜的修復(fù)，促進(jìn)潰瘍愈合。本研究從腸道形態(tài)、腸黏膜屏障、促炎因子引發(fā)的炎癥反應(yīng)和氧化損傷4 個方面，探究COS對酒精誘導(dǎo)的腸道損傷的干預(yù)作用，以期找到對頻繁飲酒人群腸道保護(hù)的有效成分，并為COS作為腸道保護(hù)功效因子的保健食品開發(fā)提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

6 周齡SPF級Wistar雄性大鼠60 只，其體質(zhì)量為140～160 g，由上海必凱實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2018-0006，于江南大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心飼養(yǎng)，每籠放養(yǎng)4 只，每天接受12 h黑暗/12 h光照，光照時間段為8:00至20:00，實(shí)驗(yàn)室室溫為（22±2）℃，相對濕度為40%～70%，實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格遵守國際倫理學(xué)規(guī)范，實(shí)驗(yàn)動物處理方法通過江蘇省無錫市倫理審核，編號為JN.No20180930W1081230[211]。

殼聚糖、殼聚糖酶 浙江金殼生物化學(xué)有限公司；乙醇（藥用級，體積分?jǐn)?shù)95%） 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；蒸餾水 屈臣氏集團(tuán)（香港）有限公司。殼寡糖為實(shí)驗(yàn)室自制，其平均分子質(zhì)量為1 299 Da，脫乙酰度為85%，制備方法如下：殼聚糖在pH 4.5 NaAc-HAc緩沖液中溶解5 h，殼聚糖酶（6 U/mL）45 ℃酶解2 h，100 ℃加熱終止反應(yīng)，恢復(fù)室溫后中和酶解液，依次通過離心、濾紙過濾、0.45 μm和0.22 μm微濾膜除雜，濾過液分別經(jīng)10 000 Da和3 000 Da超濾膜過濾，濾過液經(jīng)500 Da納濾膜納濾，截留液真空濃縮后，真空干燥得殼寡糖樣品。

二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）、D-乳酸（D-lactic acid，D-LA）、總抗氧化能力（total antioxidation capacity，T-AOC）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、蛋白質(zhì)羰基檢測試劑盒及大鼠白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-6、IL-1β、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒 南京建成生物工程研究所；逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR）引物 蘇州金唯智生物科技有限公司；TRIzol試劑盒、AMV第一鏈cDNA合成試劑盒、2×SG Fast qPCR Master Mix (High Rox)試劑盒 生工生物工程（上海）股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

4K15冷凍型大型離心機(jī) 德國Sigma公司；UV-1800紫外-可見分光光度計(jì) 日本津島公司；M5酶標(biāo)儀美國Molecular Devices公司；7900高通量快速qPCR儀 美國ABI公司；DK-8D恒溫水浴鍋 金壇市新航儀器廠；超低溫冷凍冰箱 日本三洋電機(jī)公司；ECLIPSE生物顯微鏡 日本尼康公司。

1.3 方法

1.3.1 動物分組及模型建立

預(yù)飼養(yǎng)7 d后，將大鼠隨機(jī)分為5 組：空白對照組（CK）、模型組（ETOH）、COS低劑量組（COSL）、COS中劑量組（COSM）和COS高劑量組（COSH）。根據(jù)國家關(guān)于COS作為“食品新原料”的規(guī)定，COS每日推薦量為≤0.5 g[18]，以成人體質(zhì)量70 kg換算為200 g的大鼠，每天的攝入劑量為45 mg/kgmb，選取此劑量為COS灌胃中劑量，同時，選取22.5 mg/kgmb為低劑量，90 mg/kgmb為高劑量，模型組酒精灌胃劑量為4.5 g/kgmb。每天稱量大鼠體質(zhì)量，并根據(jù)體質(zhì)量給藥，各劑量組COS給藥體積均約為0.5 mL/100 gmb，根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整COS劑量，空白對照組和模型組均灌胃等體積的蒸餾水。2 h后，模型組和各劑量COS組大鼠灌胃45%的酒精，酒精灌胃體積為1 mL/100 gmb，空白對照組灌胃等體積的蒸餾水。連續(xù)灌胃42 d后，各組大鼠禁食不禁水處理15 h以上。

1.3.2 檢測樣本的采集

采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%的戊巴比妥鈉溶液對大鼠進(jìn)行腹腔注射，使其麻醉，心臟取血。血液樣本保存于肝素鈉管中，靜置分層后，于4 ℃下3 500 r/min離心20 min，取上清液，即為抗凝血漿。取大鼠小腸全段，并將十二指腸上段8 cm左右長度組織，用預(yù)冷的生理鹽水漂洗干凈后切成小段，取近胃端1 cm左右小段置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛溶液中，其余組織分裝后立刻置于液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80 ℃深凍冰箱中保存?zhèn)溆?，以便后續(xù)指標(biāo)測定。

1.3.3 指標(biāo)測定

1.3.3.1 生長指標(biāo)及小腸質(zhì)量/長度比測定

每周記錄大鼠的飲食量及體質(zhì)量變化，42 d后，取其小腸全段，并測定其長度和質(zhì)量，以腸質(zhì)量與腸長度的比值表示小腸平滑肌張力。

1.3.3.2 小腸組織病理學(xué)組織切片制作

各組大鼠小腸組織于質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛溶液中固定24 h后，通過石蠟包埋、石蠟切片、蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色來進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。

1.3.3.3 生化指標(biāo)的測定

按照試劑盒說明書的要求制備血漿樣品和十二指腸組織勻漿樣品，測定血漿中D-LA、DAO、IL-6、IL-1β和TNF-α水平及組織中T-AOC、MDA和蛋白質(zhì)羰基水平。

1.3.3.4 mRNA表達(dá)量測定

測定緊密連接蛋白Occludin、Claudin-4和ZO-1及炎癥相關(guān)基因IL-6、IL-1β和TNF-α的mRNA表達(dá)量。按照TRIzol試劑盒說明書對十二指腸RNA進(jìn)行提取，使用紫外-可見分光光度計(jì)測其濃度及純度。使用AMV第一鏈cDNA合成試劑盒將總RNA（4 μg）逆轉(zhuǎn)錄成為cDNA。qPCR根據(jù)2×SG Fast qPCR Master Mix (High Rox)試劑盒進(jìn)行。以β-actin為內(nèi)參基因，通過2-ΔΔCt法計(jì)算所檢測基因的相對表達(dá)量，各組均以正常組為基礎(chǔ)做比值。所用引物序列如表1。

表1 引物序列Table 1 Primer sequences used in this study

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差的形式表示，由Microsoft Excel 2010軟件處理完成；采用StepOne v2.3軟件獲取qPCR循環(huán)次數(shù)，采用SPSS 19.0軟件的方差分析法進(jìn)行數(shù)據(jù)顯著性分析；采用Origin 8.5軟件繪制柱狀圖和折線圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 COS對飼養(yǎng)過程中大鼠飲食量及體質(zhì)量增長率的影響

圖1 飼養(yǎng)過程中大鼠每周飲食量及體質(zhì)量增長率變化Fig.1 Changes in weekly feed intake and body mass gain of rats during feeding

每隔7 d記錄大鼠體質(zhì)量，每2～3 d記錄大鼠飲食量，計(jì)算得各處理組每只大鼠每周體質(zhì)量增長率及每周飲食量。由圖1可知，較空白對照組，其余各組大鼠每周飲食量有所降低，但其數(shù)值上不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。42 d灌胃酒精后，模型組大鼠體質(zhì)量增長率較空白對照組顯著降低（P＜0.05），COS中、高劑量組大鼠體質(zhì)量較模型組大鼠顯著增加（P＜0.05）。說明酒精灌胃不利于大鼠身體健康，灌胃COS可以改善大鼠生長情況，但不是通過影響其飲食量發(fā)揮作用的。其可能是通過改善胃腸道狀態(tài)改善生長狀況。

2.2 COS對大鼠小腸健康狀態(tài)的影響

圖2 各組大鼠的小腸病理學(xué)切片（×100）Fig.2 Histomorphological images of small intestinal tissues from each group (× 100)

絨毛長度和隱窩深度是反映小腸消化吸收功能和健康狀況的重要指標(biāo)。對各組大鼠十二指腸病理學(xué)切片進(jìn)行分析，可以看到，相比空白對照組（圖2A），模型組（圖2B）大鼠小腸絨毛較短且伴有腫脹現(xiàn)象，形態(tài)不完整或出現(xiàn)絨毛尖端脫落的現(xiàn)象，其隱窩形態(tài)也有明顯差異。COS干預(yù)組（圖2C、D、E）組織中隱窩深度增加，絨毛結(jié)構(gòu)較完整且腫脹現(xiàn)象得到改善。

表2 各組大鼠小腸長度、質(zhì)量和質(zhì)量/長度比Table 2 Length and mass of small intestine and ratio between them

由表2 可知，各組大鼠小腸長度無顯著性差異（P＞0.05），與空白對照組相比，模型組、COS低劑量組和COS高劑量組大鼠小腸質(zhì)量顯著增加（P＜0.05），COS中劑量組腸質(zhì)量無顯著性差異（P＞0.05）。類似地，與空白對照組相比，模型組和COS高劑量組大鼠小腸質(zhì)量/長度比顯著降低（P＜0.05），COS低劑量組無顯著性差異（P＞0.05），而COS中劑量組大鼠小腸質(zhì)量/長度比顯著高于空白對照組（P＜0.05）。表明COS可以降低小腸平滑肌張力，小腸健康狀態(tài)得到改善。

2.3 COS對大鼠血漿中D-LA濃度、DAO活力的影響

圖3 COS對大鼠血漿D-LA濃度和DAO活力的影響Fig.3 Effect of COS on plasma D-LA and DAO levels in rats

由圖3A可知，與空白對照組相比，連續(xù)42 d灌胃酒精后，模型組大鼠血漿中D-L A 濃度顯著升高（P＜0.05），而灌酒前灌胃COS的各組大鼠血漿中D-LA濃度較模型組顯著下降（P＜0.05），COS低、中、高劑量組大鼠血漿中D-LA濃度分別降低了30.99%、39.56%和42.54%。圖3B顯示，與空白對照組相比，灌胃酒精后大鼠血漿中DAO水平顯著升高（P＜0.05），而經(jīng)COS干預(yù)后，大鼠血漿中DAO水平均有所下降。COS低、中、高劑量組大鼠血漿DAO水平較模型組分別下降了13.76%、23.8%和24.86%。經(jīng)COS干預(yù)的組別大鼠血漿中D-LA和DAO水平均恢復(fù)正常，與空白對照組無顯著性差異（P＞0.05），大鼠腸黏膜屏障得到顯著改善。

2.4 COS對大鼠小腸緊密連接相關(guān)蛋白基因mRNA表達(dá)的影響

由圖4 可知，與空白對照組相比，灌胃酒精后Occludin和ZO-1mRNA表達(dá)顯著降低（P＜0.05），Claudin-4mRNA表達(dá)顯著升高（P＜0.05）。與模型組相比，高劑量COS灌胃后，Occludin和ZO-1mRNA的表達(dá)均顯著升高（P＜0.05），低、中劑量COS灌胃也可提高二者mRNA表達(dá)，但與模型組相比，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。COS干預(yù)對Claudin-4的mRNA表達(dá)影響顯著，可以顯著降低灌胃酒精帶來的其mRNA表達(dá)升高（P＜0.05），其中，COS低劑量組和中劑量組效果較好。COS可以在mRNA水平恢復(fù)酒精對腸道緊密連接蛋白的影響，其有可能通過影響腸緊密連接結(jié)構(gòu)保護(hù)腸黏膜屏障。

圖4 COS對大鼠小腸緊密連接相關(guān)蛋白基因mRNA表達(dá)的影響Fig.4 Effect of COS on tight junction-associated protein mRNA expression in rat small intestine

2.5 COS對酒精誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的影響

圖5 COS對大鼠小腸炎癥相關(guān)基因mRNA表達(dá)及血漿中炎性因子水平的影響Fig.5 Effect of COS on duodenal inflammatory cytokines mRNA expression and plasma inflammatory cytokines levels in rats

炎癥反應(yīng)的發(fā)生經(jīng)常伴隨著IL-6、IL-1β或TNF-α等促炎因子的產(chǎn)生。由圖5A可知，與空白對照組相比，連續(xù)42 d灌胃酒精顯著提高IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA的表達(dá)（P＜0.05），灌胃不同劑量的COS均可降低大鼠小腸組織中3 種促炎因子相關(guān)基因mRNA的表達(dá)，其中COS中、高劑量組效果更顯著（P＜0.05）。圖5B中，與空白對照組相比，模型組大鼠血漿中IL-6、IL-1β和TNF-α質(zhì)量濃度顯著上升（P＜0.05），與此對照，灌胃COS的大鼠血漿中，3 種促炎因子的質(zhì)量濃度顯著降低（P＜0.05）。由此可見，COS可以減緩酒精導(dǎo)致的全身炎癥反應(yīng)。

2.6 COS對大鼠小腸組織氧化損傷的影響

表3 COS對大鼠小腸氧化損傷指標(biāo)的影響Table 3 Effect of COS on indicators of small intestinal oxidative damage

由表3可知，與空白對照組相比，灌胃酒精顯著提高大鼠小腸中MDA含量（P＜0.05），而COS干預(yù)可顯著改善這種現(xiàn)象，低、中、高劑量COS灌胃組大鼠可分別降低34.9%、26.3%和24.3%。與此類似，灌胃酒精顯著提高大鼠小腸中蛋白質(zhì)羰基的含量（P＜0.05），COS干預(yù)可使蛋白質(zhì)羰基含量分別降低21.39%、22.34%和26.81%，顯著改善由酒精引起的蛋白質(zhì)氧化損傷（P＜0.05）。此外低劑量COS也可顯著提高小腸組織的總抗氧化能力（P＜0.05），對酒精導(dǎo)致的大鼠組織氧化損傷有一定的修復(fù)作用。

3 討 論

腸道是人體最大的消化器官，完整的腸黏膜屏障能夠阻止微生物及內(nèi)毒素進(jìn)入體循環(huán)，維持腸道正常功能，保證機(jī)體健康[3-4]。小腸的質(zhì)量/長度比可以反映小腸平滑肌層張力，影響鈣、鉀離子通道活性，平滑肌張力越大，腸胃越難蠕動，可引起腸胃不適。Shirpoor等[7]的研究表明，慢性飲酒可使大鼠小腸平滑肌張力增大，引起大鼠腸道損傷。小腸絨毛和隱窩的狀態(tài)也可反映腸道及機(jī)體的健康狀態(tài)。本研究中，酒精顯著增加了小腸質(zhì)量/長度比值，與已有研究結(jié)果趨勢相同，COS中、高劑量組大鼠小腸可使平滑肌張力恢復(fù)至正常水平，與空白對照組無顯著性差異。此外，小腸的病理學(xué)切片顯示，COS灌胃的大鼠小腸絨毛形態(tài)和隱窩深度明顯優(yōu)于模型組，表明灌胃COS可以降低酒精引起的大鼠小腸損傷，提高小腸的健康狀態(tài)。

腸黏膜屏障的完整性對腸道正常功能的維持具有重要意義。酒精對腸屏障功能的破壞主要體現(xiàn)在，乙醇使腸黏膜結(jié)構(gòu)完整性遭到破壞，使腸黏膜通透性增加，同時，其代謝產(chǎn)物乙醛可誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞緊密連接結(jié)構(gòu)的破壞[19-23]。當(dāng)腸黏膜通透性增加時，腸道細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)生的大量D-LA便可進(jìn)入血液循環(huán)，故可被作為其可被作為細(xì)菌感染和腸通透性增加的可靠指標(biāo)[24]。DAO存在于小腸上層絨毛中，可較為理想地反映腸黏膜的結(jié)構(gòu)和功能，血液中的DAO主要來自于小腸組織，目前，DAO在實(shí)驗(yàn)研究中經(jīng)常被作為一種很好的腸黏膜受損標(biāo)志物[24]。故血液中D-LA和DAO水平能夠反映腸黏膜的受損狀況。腸道緊密連接結(jié)構(gòu)由復(fù)雜的蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)組成，包括閉合蛋白（occludin）、密封蛋白（claudin）和連接黏附分子，其中Occludin和Claudin是負(fù)責(zé)胃腸道上皮緊密連接和腸上皮通透性調(diào)節(jié)的主要蛋白質(zhì)，它們通過蛋白質(zhì)如ZOs與肌動蛋白細(xì)胞骨架相互作用[14-16]，加強(qiáng)腸黏膜上皮細(xì)胞屏障功能、組成傳遞的信息通道和調(diào)節(jié)屏障功能，在腸道黏膜屏障中起著重要作用[20,25]。長期飲酒會使十二指腸緊密連接處下方細(xì)胞間隙增大，使之呈現(xiàn)持續(xù)的形態(tài)學(xué)改變。也有體外研究表明，酒精通過多種途徑促進(jìn)體外腸道通透性的增加[25]。本研究結(jié)果表明，酒精可以顯著提高血漿中D-LA和DAO水平損傷腸道黏膜屏障，提前灌胃COS能夠使血漿中二者水平含量下降，修復(fù)腸道損傷。同時，酒精下調(diào)小腸組織中Occludin和ZO-1mRNA表達(dá)量、上調(diào)Claudin-4mRNA表達(dá)量，表明酒精至少可以在mRNA水平上破壞腸道緊密連接結(jié)構(gòu)，這種趨勢與已有的研究結(jié)果相同[26]。與模型組相比，灌胃COS可以上調(diào)OccludinmRNA表達(dá)量，下調(diào)緊密連接蛋白Claudin-4mRNA的表達(dá)量，其緩解腸黏膜屏障損傷的作用可能是通過調(diào)節(jié)腸緊密連接結(jié)構(gòu)相關(guān)蛋白實(shí)現(xiàn)的，如若需要確定這種作用，還需經(jīng)過Occludin、Claudin-4和ZO-1蛋白表達(dá)量進(jìn)行闡述。

目前，對酒精引起的損傷的研究主要在氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)兩方面。已有研究表明，酒精誘導(dǎo)的大量炎癥因子的產(chǎn)生會損傷上皮細(xì)胞，并影響腸上皮細(xì)胞間相關(guān)蛋白的表達(dá)及分布，破壞緊密連接結(jié)構(gòu)，造成腸屏障受損[3-4]。某些有害細(xì)菌過度生長導(dǎo)致腸道微環(huán)境生態(tài)失調(diào)，腸道中內(nèi)毒素積累，與腸黏膜上的細(xì)胞結(jié)合，可引起局部炎癥，連續(xù)酒精灌胃可導(dǎo)致小腸IL-1β、TNF-α和IL-6等促炎因子表達(dá)升高[21,27]，這些促炎因子轉(zhuǎn)移到腸外部位，則可引起全身性炎癥[3-4,28]。只是目前酒精的腸道促炎具體機(jī)制還未完全明確。Arora等[29]研究表明酒精濫用會引起內(nèi)毒素血癥，轉(zhuǎn)錄因子核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）激活，釋放促炎因子，導(dǎo)致炎癥發(fā)生。酒精導(dǎo)致的氧化應(yīng)激反應(yīng)也已被證明[6-8]。MDA作為脂質(zhì)過氧化物的代表，反映了氧自由基對細(xì)胞損傷的程度，它的產(chǎn)生能加劇黏膜的損傷，破壞細(xì)胞骨架，最終導(dǎo)致腸屏障的損害，細(xì)菌移位。蛋白質(zhì)羰基含量的增加表明蛋白質(zhì)的氧化變化和化學(xué)修飾可能導(dǎo)致許多酶的結(jié)構(gòu)改變和功能失活[30]。COS的抗炎[9-10]和抗氧化能力[11-12]也在前人的研究結(jié)果中得到證實(shí)，在本研究中，模型組大鼠小腸組織中促炎因子IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA表達(dá)量及血漿中3 種指標(biāo)含量顯著提高，表明酒精可引起腸道炎癥反應(yīng)，并且，腸黏膜屏障損傷，致使腸道通透性增大，內(nèi)毒素進(jìn)入血液中，并隨著血液循環(huán)引發(fā)了全身炎癥，這與已有的研究結(jié)果相似。酒精還可降低小腸T-AOC，提高M(jìn)DA和蛋白質(zhì)羰基含量，其進(jìn)入腸道可導(dǎo)致脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的氧化損傷。提前灌胃COS，使組織中促炎因子的mRNA表達(dá)量及血漿中促炎因子的含量顯著降低，提高小腸組織T-AOC，顯著降低MDA和蛋白質(zhì)羰基含量，研究表明，COS可降低酒精引起的炎癥反應(yīng)和氧化損傷。

本研究連續(xù)灌胃42 d酒精建立大鼠腸道損傷模型，通過對小腸健康狀況、黏膜屏障損傷情況、促炎因子以及氧化損傷等指標(biāo)，COS可以減緩酒精對大鼠小腸組織的損傷。但是組織中的緊密連接結(jié)構(gòu)相關(guān)蛋白及促炎因子都只停留在mRNA水平，接下來需要從蛋白水平進(jìn)一步評估。有研究表明，COS可以通過降低腸道TLR4表達(dá)減輕回腸缺血再灌注損傷[19]，后續(xù)COS對酒精腸道炎癥的抑炎機(jī)制可以從TLR4通路出發(fā)，探究其對下游NF-κB的影響進(jìn)行后續(xù)研究工作的開展。