谷氨酰胺對(duì)冬毛期水貂生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及抗氧化性能的影響

李柯汝，紀(jì)君波，孫建華，徐燕紅,，司志文，李文立*

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東青島 266109；2.山東省萊陽(yáng)市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，山東萊陽(yáng) 265200；3.山東菁華農(nóng)牧發(fā)展有限公司，山東諸城 262201）

谷氨酰胺（Glutamine，Gln）在動(dòng)物體內(nèi)含量豐富，健康狀態(tài)下Gln 為非必需氨基酸，但在應(yīng)激或病理狀態(tài)下，動(dòng)物內(nèi)源合成的Gln 不能滿足其自身需要，必須由外源補(bǔ)充，又被稱為條件性必需氨基酸[1]。許多研究表明，Gln 是腸黏膜上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的主要燃料，在促進(jìn)受損傷腸道的修復(fù)以及維持正常的局部免疫功能中發(fā)揮著不可替代的作用[2-4]。Gln 還參與體內(nèi)谷胱甘肽（GSH）的合成，具有清除體內(nèi)各種氧自由基和過(guò)氧化物對(duì)細(xì)胞的損害、維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的作用[5]。

在人和動(dòng)物機(jī)體中，Gln 是一種活性小肽，具有抗氧化、免疫以及參與某些物質(zhì)吸收等多種功能[6]。Krebs[7]于 1935 年第一次發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物腎臟具備合成和分解Gln 的能力，并強(qiáng)調(diào)指出雖然多數(shù)氨基酸都具備多種功能，但Gln 的功能最顯著。肖英平等[8]研究表明，Gln 能夠提高斷奶仔豬的腸道消化吸收能力，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率。李文立等[9]研究表明，Gln 能夠提高肉雞小腸的吸收能力。此外，Gln 也是細(xì)胞內(nèi)氮的清除劑及生物合成許多重要物質(zhì)（如核酸、核苷酸、氨基糖和蛋白質(zhì)）的重要前體[10]。本試驗(yàn)旨在研究Gln 對(duì)冬毛期水貂生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及抗氧化性能的影響，為在冬毛期水貂基礎(chǔ)日糧中Gln 的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選取140 日齡同性別體重相近的冬毛期短毛黑水貂（美國(guó)短毛黑與標(biāo)準(zhǔn)貂雜交后裔）120只，共分為5 組，每組24 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1 只。其中對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中分別添加0.2%、0.4%、0.6%和0.8% Gln（由金維氨生物科技有限公司提供，有效含量為99%），基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。試驗(yàn)在山東省青島市即墨區(qū)的某水貂養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行，試驗(yàn)時(shí)間為2018 年9 月24 日—2018 年12 月9 日，預(yù)試驗(yàn)1 周，試驗(yàn)期10 周。試驗(yàn)前對(duì)棚舍、籠舍、地面等進(jìn)行全面消毒，全期自由飲水和采食。

1.2 采血及血清制備 試驗(yàn)結(jié)束后，各組隨機(jī)抽取接近于平均體重的公、母貂各6 只。采用剪趾尖法采集血樣3 mL，3 000 r/min 低溫離心10 min，離心后取上層血清，分裝于1.5 mL 離心管中，-80℃冷凍待測(cè)。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3 測(cè)試指標(biāo)及方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo) 試驗(yàn)期間每天記錄給料量和剩料量，分別統(tǒng)計(jì)公、母貂的平均日采食量；每周清晨進(jìn)行空腹稱重1 次，分別統(tǒng)計(jì)公、母貂的平均日增重；并計(jì)算耗料增重比，統(tǒng)計(jì)死亡率。試驗(yàn)結(jié)束后，各組隨機(jī)抽取接近于平均體重的公、母貂各6 只處死后，測(cè)得鼻尖到尾根的長(zhǎng)度為體長(zhǎng)，取皮后測(cè)得鼻尖到尾根的長(zhǎng)度為皮長(zhǎng)。

1.3.2 血清生化指標(biāo) 葡萄糖（GLU）含量采用葡萄糖氧化酶法測(cè)定；肌酸激酶（CK）活性采用比色法測(cè)定；總蛋白（TP）含量采用考馬斯亮蘭法測(cè)定；尿素氮（UN）含量采用二乙酰一肟法。測(cè)定試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所，下同。

1.3.3 血清抗氧化指標(biāo) 抑制羥自由基（·OH）能力采用比色法測(cè)定；總抗氧化能力（T-AOC）采用比色法測(cè)定；抗超氧陰離子自由基（O2-）能力采用化學(xué)比色法測(cè)定；超氧化物歧化酶（SOD）活性采用羥胺法測(cè)定；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性采用比色法測(cè)定；丙二醛（MDA）含量采用硫代巴比妥酸（TBA）法測(cè)定；過(guò)氧化氫酶（CAT）活性采用鉬酸銨法測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 17.0 軟件中單因素方差分析（One-Way ANOVA），LSD 法進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P＜0.05 和P＜0.01 分別為差異顯著和極顯著水平。

2 結(jié)果

2.1 Gln 對(duì)水貂生長(zhǎng)性能的影響 由表2 可知，公貂的平均日采食量、平均日增重、皮長(zhǎng)和體長(zhǎng)各組間差異均不顯著，但4 個(gè)試驗(yàn)組的耗料增重比低于對(duì)照組（P＜0.05）。母貂的平均日采食量、平均日增重、耗料增重比、皮長(zhǎng)和體長(zhǎng)在各組間差異均不顯著。

2.2 Gln 對(duì)水貂血清生化指標(biāo)的影響 由表3 可知，公貂血清中GLU、TP 含量以及CK 活性各組間差異均不顯著；但對(duì)照組UN 含量高于各試驗(yàn)組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著。母貂血清中GLU、TP 和UN 含量以及CK 活性各組間差異均不顯著。因此，水貂基礎(chǔ)日糧中添加不同水平的Gln 并不影響母貂血清生化指標(biāo)。

表2 Gln 對(duì)公、母貂生長(zhǎng)性能的影響

2.3 Gln 對(duì)水貂血清抗氧化指標(biāo)的影響 由表4 可知，公貂血清抑制·OH 能力以及MDA 含量各組間差異不顯著。試驗(yàn)組公貂血清抗O2-能力、CAT 活性以及T-AOC 能力各均高于對(duì)照組（P＜0.05），其余各組間無(wú)顯著差異。0.4%Gln 組和0.6%Gln 組公貂血清SOD 活性均高于其余各組（P＜0.05），0.2%Gln 和0.8%Gln 組高于對(duì)照組（P＜0.05）。0.4%、0.6%和0.8%Gln 組公貂血清GSHPx 活性高于0.2%Gln 組和對(duì)照組（P＜0.05），0.2%Gln組高于對(duì)照組（P＜0.05），其余各組間無(wú)顯著差異。

由5 表可知，0.6%Gln 組母貂血清抑制·OH 能力高于0.2%Gln 組和對(duì)照組（P＜0.01），0.6%Gln 組高于0.8%Gln 組（P＜0.05），其余各組間無(wú)顯著差異。母貂血清抗O2-能力以及GSH-Px 活性各組間差異不顯著。對(duì)照組母貂血清中MDA 含量高于各試驗(yàn)組（P＜0.05），各試驗(yàn)組間無(wú)顯著差異。各試驗(yàn)組母貂血清T-AOC 能力均高于對(duì)照組（P＜0.01），其中0.6%Gln 組又高于0.2%Gln 組和0.8%Gln 組（P＜0.05）。各試驗(yàn)組母貂血清SOD 活性高于對(duì)照組（P＜0.05），各試驗(yàn)組間差異不顯著。各試驗(yàn)組母貂血清CAT 活性均高于對(duì)照組（P＜0.01），0.2%Gln 組高于0.8%Gln 組（P＜0.01）、0.6%Gln 組（P＜0.05），其余各組間無(wú)顯著差異。

表3 Gln 對(duì)公、母貂血清生化指標(biāo)的影響

表4 Gln 對(duì)公貂血清抗氧化指標(biāo)的影響

表5 Gln 對(duì)母貂血清抗氧化指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 Gln 對(duì)冬毛期水貂生長(zhǎng)性能的影響 Gln 添加水平在動(dòng)物日糧中的研究有很多。紀(jì)君波等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在育成期水貂基礎(chǔ)日糧中添加0.4% Gln 有利于提高水貂的平均日采食量、平均日增重，并顯著降低耗料增重比；王錄軍等[12]研究表明，日糧中添加Gln 對(duì)肉兔采食量、日增重和飼料報(bào)酬均無(wú)顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果也表明，在水貂基礎(chǔ)日糧中添加不同水平Gln 對(duì)水貂平均日采食量、平均日增重、皮長(zhǎng)和體長(zhǎng)均無(wú)顯著影響，但能顯著降低公貂耗料增重比。與育成期相比，冬毛期水貂骨骼生長(zhǎng)期已過(guò)，由以骨骼發(fā)育、器官發(fā)育和體增長(zhǎng)為主轉(zhuǎn)變?yōu)橐悦どL(zhǎng)發(fā)育為主，主要是毛皮的生長(zhǎng)和脂肪的沉積，致使體增重緩慢[13-14]。

3.2 Gln 對(duì)冬毛期水貂血清生化指標(biāo)的影響 本試驗(yàn)結(jié)果表明，不同水平Gln 組水貂血清中的血糖含量無(wú)明顯變化，所以在冬毛期水貂基礎(chǔ)日糧中添加不同水平Gln不能對(duì)血清中的血糖含量產(chǎn)生明顯影響。TP 在血清固體成分中占比最大，且在水貂體內(nèi)具有多種功能，一方面作為載體運(yùn)輸物質(zhì)，維持血管中的正常酸堿度和膠體滲透壓；另一方面參與機(jī)體免疫防護(hù)[1,15-16]。UN 可以反映出機(jī)體代謝蛋白質(zhì)系統(tǒng)的健康程度[2,17-18]。很多研究表明日糧中添加Gln 能夠明顯提高機(jī)體血液中TP 含量，降低UN 含量，但對(duì)GLU 含量并沒(méi)有明顯影響[3]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，雖然在水貂基礎(chǔ)日糧中添加不同水平Gln 對(duì)公、母貂血清中GLU 含量和CK 活性沒(méi)有明顯影響，但有助于提高TP 含量，并明顯降低公貂UN 含量，表明Gln 不僅能夠維持機(jī)體內(nèi)代謝環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定，還有助于提高蛋白質(zhì)利用率。

3.3 Gln 對(duì)冬毛期水貂血清抗氧化性能的影響 T-AOC是衡量機(jī)體抗氧化能力的綜合性指標(biāo)，反映機(jī)體自由基代謝狀態(tài)以及對(duì)外來(lái)刺激的代償能力[19]。MDA 又是機(jī)體氧化應(yīng)激程度的主要標(biāo)志物[15]。而機(jī)體內(nèi)抗氧化物酶主要由GSH-Px、CAT 和SOD 組成。研究表明，Gln能夠影響機(jī)體內(nèi)GSH-Px、CAT 和SOD 活性，促進(jìn)GSH 合成，從而提高和維持機(jī)體內(nèi)還原型GSH 水平[18]。而機(jī)體內(nèi)全部自由基都是通過(guò)增加抗氧化酶活性來(lái)減少氧自由基產(chǎn)生的危害。黃冠慶等[17]研究表明，日糧中添加0.5%和0.8% Gln 能夠明顯提高30 日齡左右的黃羽肉雞血液中GSH-Px 活性，并降低MDA 含量，但其對(duì)SOD 活性沒(méi)有明顯影響。路靜等[20]研究表明，在日糧中添加Gln 能夠明顯提高肉雞血清GSH-Px、CAT 和SOD 活性，并且當(dāng)日糧中Gln 添加水平為1.6%時(shí)，其活性最高。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在水貂基礎(chǔ)日糧中添加適量Gln 能夠顯著提高公貂血清SOD、CAT 及GSH-Px活性、T-AOC 能力、抗O2-能力；顯著提高母貂血清SOD、CAT 活性，并顯著降低MDA 含量，極顯著提高母貂抑制·OH 和T-AOC 能力，且在0.4%添加水平效果最佳。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，冬毛期水貂基礎(chǔ)日糧中添加Gln能降低耗料增重比、MDA 含量以及提高機(jī)體的抗氧化性能，且添加水平為0.4%效果最佳。