基于有效成分含量測(cè)定探討中藥青黛的合理服用方法Δ

郭丹丹，徐 靜，郝永彪，李 雋，陳愛(ài)芳

(北京王府中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科，北京 102209)

青黛是爵床科植物馬藍(lán)、蓼科植物蓼藍(lán)或十字花科植物菘藍(lán)的葉或莖葉加工品，具有清熱解毒、涼血消斑和瀉火定驚之功效，是臨床較常用的中藥[1]。研究結(jié)果表明，靛藍(lán)、靛玉紅等吲哚類(lèi)成分被認(rèn)為是青黛的主要活性成分，具有保肝、消炎和抗腫瘤等多種藥理作用[2-6]。青黛的炮制加工主要在原產(chǎn)地進(jìn)行。在炮制加工的過(guò)程中，原植物莖葉中的物質(zhì)會(huì)進(jìn)行轉(zhuǎn)化，變?yōu)榈逅{(lán)與靛玉紅。現(xiàn)行青黛的炮制加工多采用水飛法，該方法成本較低、便于操作，而且可以除去青黛中含有的石灰、重金屬等雜質(zhì)，能夠提高青黛的質(zhì)量[7]。

隨著科學(xué)的進(jìn)步和近年來(lái)中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展，目前中藥材不局限于傳統(tǒng)的中藥飲片，還出現(xiàn)了小包裝、單味藥配方顆粒等多種形式的中藥。不同形式的中藥因其特有的優(yōu)勢(shì)在中藥市場(chǎng)上占據(jù)著不同的地位。其中，配方顆粒近年來(lái)發(fā)展較快，其是單味中藥飲片經(jīng)過(guò)水提、分離、濃縮、干燥和制粒而成，因服用方便、便攜和保存期長(zhǎng)，在臨床上受到了更多患者的接受。2021年2月10日，中藥配方顆粒結(jié)束試點(diǎn)工作，質(zhì)量監(jiān)管正式納入中藥飲片范疇[5，8-11]。

青黛宜入丸劑、散劑，外用適量，但臨床上常采用布包后入煎劑的方法。《中華人民共和國(guó)藥典：一部》(2020年版)規(guī)定，中藥青黛按干燥品計(jì)算，含靛玉紅(C16H10N2O2)不得少于0.13%，含靛藍(lán)(C16H10N2O2)不得少于2.0%[1]。但對(duì)于包煎后的青黛煎液和青黛顆粒中有效成分的含量并未作出更加明確的說(shuō)明。因此，為明確中藥青黛的臨床合理服用方法，本研究收集了3種不同形式的中藥青黛，分別為青黛飲片、布包后的煎煮液(包煎液)和配方顆粒劑，采用液相法，在相同色譜條件下對(duì)不同形式的中藥青黛同時(shí)測(cè)定其有效成分靛藍(lán)、靛玉紅的含量。通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)比，可進(jìn)一步明確不同形式中藥對(duì)有效成分含量的影響，可為提高中藥青黛臨床服用方法的合理性提供參考。

1 材料

1.1 儀器

JA1003B型電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)；YJD20D-L型煎藥機(jī)(北京東華原醫(yī)療設(shè)備有限責(zé)任公司)；LC-20AT型液相色譜儀(日本島津公司)。

1.2 藥品與試劑

青黛飲片(北京本草方源藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20161125)；青黛顆粒1(廣東一方制藥有限公司，批號(hào)為10050513)；青黛顆粒2(北京康仁堂藥業(yè)有限公司，批號(hào)為19044811)；青黛包煎液(青黛飲片由北京王府中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院(以下簡(jiǎn)稱(chēng)“我院”)代煎，批號(hào)為20191125)；靛藍(lán)(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110716-201612)；靛玉紅(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110717-201805)；三氯甲烷(北京化學(xué)試劑公司，分析純)；無(wú)水硫酸鈉(北京化學(xué)試劑公司，分析純)；水合氯醛(北京化學(xué)試劑公司，分析純)；N，N-二甲基甲酰胺(北京化學(xué)試劑公司，分析純)；甲醇(美國(guó)Fisher公司，色譜純)。

2 方法

2.1 色譜條件

參考相關(guān)文獻(xiàn)[12-17]，對(duì)靛藍(lán)和靛玉紅進(jìn)行色譜分析。色譜柱為Waters XBridge C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。進(jìn)樣量為10 μl；以甲醇-水(V∶V=70∶30)為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，流速為1.0 ml/min；柱溫為35 ℃；PDA檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)為606 nm(靛藍(lán))、292 nm(靛玉紅)，對(duì)應(yīng)分析時(shí)間為15、30 min，各測(cè)試樣品平行測(cè)定2次，最終結(jié)果取平均值。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備：(1)精密稱(chēng)取靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品2.5 mg，置于250 ml容量瓶中，加2%水合氯醛的三氯甲烷溶液(取干燥24 h后的水合氯醛2.0 g，加三氯甲烷至100 ml，靜置至出現(xiàn)渾濁，以無(wú)水硫酸鈉脫水，濾過(guò)，即得)溶解，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)1.5 h，冷卻至室溫(25 ℃)，定容，搖勻，即得每1 ml中含靛藍(lán)10 μg的靛藍(lán)對(duì)照品溶液。(2)精密稱(chēng)取靛玉紅對(duì)照品2.5 mg，置于50 ml容量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺適量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)使溶解，冷卻至室溫，定容，搖勻。精密量取上述溶液10 ml，置于100 ml容量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，即得每1 ml中含靛玉紅5 μg的靛玉紅對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備：(1)青黛包煎液。采用臨床常用的服用方法和相應(yīng)劑量獲得，即用青黛飲片10 g煎煮30 min，煎煮液過(guò)濾，最后濃縮成100 ml即得，稱(chēng)重109 g。(2)靛藍(lán)供試品溶液。取樣品(A-1為青黛飲片；B-1為青黛顆粒1；C-1為青黛顆粒2)40 mg，精密稱(chēng)定細(xì)粉置于200 ml容量瓶中，加2%水合氯醛的三氯甲烷溶液180 ml超聲(功率11 W，頻率100 kHz)30 min使其溶解溶解，冷卻至室溫，定容，搖勻，用0.45 μm尼龍濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。包煎液粉末標(biāo)記為D-1樣本，稱(chēng)取包煎液粉末185 mg(青黛包煎液冷凍干燥得)于200 ml容量瓶中，加2%水合氯醛的三氯甲烷溶液180 ml超聲(功率11 W，頻率100 kHz)溶解30 min，放至室溫，用2%水合氯醛的三氯甲烷溶液定容至刻度，混勻，過(guò)0.45 μm尼龍濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，上機(jī)備用。(3)靛玉紅供試品溶液。取樣品(A-2為青黛粉末；B-2為青黛顆粒1；C-2為青黛顆粒2)50 mg精密稱(chēng)定，細(xì)粉置于25 ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺20 ml超聲(功率11 W，頻率100 kHz)30 min使其溶解，定容，搖勻，用0.45 μm尼龍濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。包煎液粉末標(biāo)記為D-2樣本，稱(chēng)取包煎液粉末185 mg(青黛包煎液冷凍干燥得)于25 ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺20 ml超聲(功率11 W，頻率100 kHz)溶解30 min，放至室溫，用N,N-二甲基甲酰定容至刻度，混勻，過(guò)0.45 μm尼龍濾膜，上機(jī)備用。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取靛藍(lán)和靛玉紅的對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0和7.0 ml，分別置于10 ml容量瓶中，用50%甲醇定容至刻度。分別精密吸取上述各濃度的對(duì)照品溶液10 μl進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)下所述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，色譜峰峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.4 青黛含量測(cè)定

取青黛飲片、青黛包煎液和青黛顆粒，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法配制所需溶液，并照“2.1”中所述條件進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算各樣品中靛藍(lán)、靛玉紅的含量。

3 結(jié)果

3.1 線性關(guān)系考察結(jié)果

通過(guò)線性關(guān)系考察，得到靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程Y=27.739X-2.015(r=0.999 8)，靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程為Y=15.508X-0.058 4(r=0.999 7)。表明靛藍(lán)在18.66～261.24 μg范圍內(nèi)，靛玉紅在1.04～14.57 μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)品的液相圖見(jiàn)圖1—2。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖(靛藍(lán))[606 nm，4 nm(1.00)]

3.2 靛藍(lán)和靛玉紅供試品的色譜結(jié)果分析

按照“2.1”項(xiàng)下色譜方法，將制作好的供試品A、B、C和D 4個(gè)樣品進(jìn)行液相分析，每個(gè)樣品進(jìn)行2次平行實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)果見(jiàn)表1—2，液相色譜圖見(jiàn)圖3—4。由表1可知，青黛飲片、配方顆粒中靛藍(lán)的含量均符合《中華人民共和國(guó)藥典：一部》(2020年版)標(biāo)準(zhǔn)。其中，青黛飲片樣品中靛藍(lán)的含量最高，為15.5%；包煎液中靛藍(lán)的含量低于下限值，未檢出。由表2可知，青黛飲片、配方顆粒中靛玉紅的含量均符合《中華人民共和國(guó)藥典：一部》(2020年版)標(biāo)準(zhǔn)。其中，青黛飲片中靛玉紅的含量較顆粒劑、包煎液高，為0.18%；包煎液中靛玉紅的含量低于下限值，未檢出。

表2 樣品中靛玉紅目標(biāo)物檢測(cè)結(jié)果

A.飲片；B.顆粒劑1；C.包煎液；D.顆粒劑2

表1 樣品中靛藍(lán)目標(biāo)物檢測(cè)結(jié)果

4 討論

4.1 布包存在不影響煎煮效果

包煎液中靛藍(lán)、靛玉紅的含量低于下限值，未檢出，考慮到可能是由于布包存在造成青黛沒(méi)有煎透的原因，為了驗(yàn)證是否有此種因素干擾結(jié)果，采用“2.2.2”中相同的方法，煎煮完成后，撕開(kāi)布包觀察，青黛粉末充分浸潤(rùn)煎透，排除了因存在布包未煎透造成靛藍(lán)、靛玉紅未檢出的因素。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖(靛玉紅)[292 nm，4 nm(1.00)]

4.2 中藥青黛在處方中使用時(shí)，不宜包煎入藥

結(jié)合本研究測(cè)定的靛藍(lán)和靛玉紅含量結(jié)果可知，中藥青黛幾乎不溶于水，與直接沖服飲片和配方顆粒劑相比，包煎入藥時(shí)有效成分煎出量極少，影響臨床療效。另外，臨床工作中發(fā)現(xiàn)，含有青黛的中藥處方在我院代煎時(shí)，如果采用包煎入藥，當(dāng)煎煮不充分時(shí)，發(fā)生過(guò)代煎液酸敗脹袋現(xiàn)象，考慮可能是青黛加工過(guò)程中殘存的石灰在代煎過(guò)程中發(fā)生再熟化反應(yīng)。因此，中藥青黛合理服用方法宜沖服或入丸劑、散劑，不宜包煎入藥。

4.3 青黛的配方顆粒劑在內(nèi)服處方中可直接沖服使用

結(jié)合本研究結(jié)果可知，中藥青黛的配方顆粒劑中靛藍(lán)、靛玉紅含量均符合《中華人民共和國(guó)藥典：一部》(2020年版)規(guī)定，臨床上在內(nèi)服處方中可參考青黛飲片服用方法，直接沖服使用。

A.飲片；B.顆粒劑1；C.包煎液；D.顆粒劑2

本研究對(duì)我院所使用的的中藥青黛進(jìn)行抽查，通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可使藥師更加了解中藥青黛飲片、青黛顆粒和青黛包煎液三者之間有效成分的差異，為今后合理指導(dǎo)患者用藥提供了參考；同時(shí)，進(jìn)一步檢查了我院所用中藥青黛的質(zhì)量情況，以便更好地掌握我院所使用中藥飲片的質(zhì)量問(wèn)題，以期更好地為患者提供服務(wù)。