頭孢曲松鈉藥物抗體影響臨床抗感染治療效果的臨床研究

吳昌松，岑榮飛，李俊艷，羅普榮，羅慶艷，朱廷倫，周美春

(黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校附屬醫(yī)院，貴州 都勻 558000)

頭孢曲松鈉(C18H16N8Na2O7S3·3.5H2O，分子量661.59)為孢菌素類第三代藥物，對(duì)G+、G-菌厭氧菌等具有廣光譜抗菌活性，是臨床抗菌一線藥物。長(zhǎng)期用藥后臨床效果治療不佳，取患者分泌物在體外作細(xì)菌培養(yǎng)加細(xì)菌藥敏試驗(yàn)呈敏感或中度敏感結(jié)果。但臨床用藥療效治療不佳的病例，常規(guī)考慮細(xì)菌菌株變異產(chǎn)生臨床耐藥[1]，沒有從免疫學(xué)角度考慮患者長(zhǎng)期使用該類藥物后刺激機(jī)體是否產(chǎn)生該類藥物的免疫性藥物抗體。當(dāng)該類藥物再次進(jìn)入機(jī)體后被相應(yīng)的免疫性藥物抗體結(jié)合，形成抗原-抗體免疫復(fù)合物IC，改變藥物的理化結(jié)構(gòu)，影響藥物的生物學(xué)活性，導(dǎo)致臨床抗感染效果不佳。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2017年8月至2019年7月在本院住院期間使用頭孢曲松鈉靜脈滴注抗感染治療，48～72 h治療無效的患者100例為實(shí)驗(yàn)組[2]，男58例，女42例；年齡35～70歲，平均(47.38±9.05)歲。同期在住院期間無頭孢曲松鈉用藥史，臨床使用頭孢曲松鈉靜脈滴注抗感染治療療效顯著的患者100例為對(duì)照組，男63例，女37例；年齡28～72歲，平均(45.72±12.26)歲。

1.2 儀器與試劑 儀器 ence湘儀L-500-A離心機(jī)，TD-2Y醫(yī)用離心機(jī)，源博生科LB-3000醫(yī)用離心機(jī)，F(xiàn)YQ型免疫微柱凝膠附育器，二氧化碳培養(yǎng)箱SANYO型號(hào)(MCO-20AIC)。

試劑 微柱凝膠抗人球蛋白卡(江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)股份有限公司，批號(hào)：201706020)，標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞(上海血液生物，201709015-201806017)，頭孢曲松鈉藥敏紙片(Oxoid Limited/奧克歐德有限公司：批號(hào)235550)；MH瓊脂平板(鄭州圖安生物：批號(hào)20170608B)。

1.3 方法 采集患者全血或抗凝血(EDTA-Na2)5 ml，分離血清或血漿，用患者住院期間的同批號(hào)藥物和正常人O型紅細(xì)胞，備致敏指示細(xì)胞。用間接抗人球蛋白方法，采用微柱凝膠免疫抗人球蛋白試劑卡，檢測(cè)患者血液中藥物抗體。致敏指示紅細(xì)胞制備。用正常3人份O型紅細(xì)胞，洗滌后配制成2～2.5%懸液，同批號(hào)頭孢曲松鈉，用生理鹽水配制成10～30 mg/ml，各取1 000 μl置37℃孵育1 h后，配制成0.5%紅細(xì)胞懸液。指示紅細(xì)胞II(抗人球蛋白包被的紅細(xì)胞)。

1.4 檢測(cè)方法 按微柱凝膠間接抗人球蛋白試驗(yàn)SOP文件操作(微柱凝膠免疫抗人球蛋白試劑卡(IgG+C3d)：(1)頭孢曲松鈉免疫性抗體檢測(cè)。取被檢測(cè)血清、指示紅細(xì)胞I、指示紅細(xì)胞II各50 μl加入微柱凝膠抗人球蛋白試劑卡孔內(nèi)，混勻37℃孵育1 h，置LB-3000醫(yī)用離心機(jī)離心5 min(900 r/min×2 min,1 500 r/min×3 min)30 min內(nèi)觀察結(jié)果。指示紅細(xì)胞懸浮于凝膠表面或凝膠中呈陽性反應(yīng)，指示細(xì)胞沉于反應(yīng)孔底部為陰性反應(yīng)結(jié)果。(2)免疫性藥物抗體效價(jià)測(cè)定。按倍比稀釋，按SOP文件步驟程序操作。通過血型血清學(xué)專用離心機(jī)重力離心，指示紅細(xì)胞懸浮在反應(yīng)孔凝膠表面或凝膠中，判讀為陽性結(jié)果，指示細(xì)胞沉于反應(yīng)孔底部則為陰性反應(yīng)結(jié)果。免疫性藥物抗體效價(jià)測(cè)定結(jié)果判讀，最后一管凝集強(qiáng)度1+，判為最高抗體效價(jià)。(3)細(xì)菌藥敏試驗(yàn)：①在MH瓊脂平板培養(yǎng)基上接種細(xì)菌菌株；②將頭孢曲松鈉藥敏紙片覆蓋于種菌株瓊脂平板表面，置37℃二氧化碳培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。③藥物抗體(IgG)抑菌藥敏試驗(yàn)。將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組浸泡處理的藥敏紙片覆蓋于接種菌株表面[3]，置37℃二氧化碳培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，抑菌環(huán)大于15 mm以上為藥物抑菌敏感(S)，抑菌環(huán)在10～14 mm之間為藥物抑菌中度敏感(I)，抑菌環(huán)小于10 mm以下為細(xì)菌耐藥(R)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件包統(tǒng)計(jì)處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為顯著性水平。

2 結(jié)果

2.1 藥物抗體(IgG)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組患者血清中頭孢曲松鈉藥物抗體(IgG)檢測(cè)結(jié)果見表1。實(shí)驗(yàn)組的陽性率高于對(duì)照組(χ2=56.638，P<0.01)。

表1 兩組藥物抗體(IgG)檢測(cè)結(jié)果比較

2.2 藥物抗體效價(jià)測(cè)定 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組頭孢曲松免疫性藥物抗體滴度檢測(cè)結(jié)果見表2。

表2 兩組免疫性藥物抗體效價(jià)檢測(cè)

2.3 細(xì)菌藥敏試驗(yàn) 將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別用患者藥物抗體陽性血清(IgG)和患者藥物抗體(IgG)陰性血清浸泡處理的藥敏紙片進(jìn)行孢曲松鈉藥敏試驗(yàn)，結(jié)果見表3。實(shí)驗(yàn)組的中度敏感率和耐藥率分別為38.0%和62.0%，對(duì)照組的敏感率為100.0%，兩組孢曲松鈉藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異具有顯著性(χ2=89.86，P<0.01)，實(shí)驗(yàn)組具有一定耐藥性。

表3 兩組用血清浸泡處理孢曲松鈉藥敏紙片試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

頭孢曲松鈉為半合成的第三代頭孢菌素類藥物，分子量小，進(jìn)入機(jī)體不能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)的免疫性藥物抗體(IgG)。但通過靜脈滴注進(jìn)入患者體內(nèi)，與血液中載體蛋白結(jié)合，形成藥物-載體蛋白復(fù)合物后，形成大分子物質(zhì)，而具有免疫原性，刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)中的漿細(xì)胞，則分泌相應(yīng)的藥物抗體[4]。產(chǎn)生的免疫性藥物抗體與血液中的藥物-載脂蛋白復(fù)合物結(jié)合，形成藥物抗體(IgG)-藥物-載脂蛋白(抗原)復(fù)合物[5]。使藥物的物理結(jié)構(gòu)、化學(xué)性質(zhì)、生物學(xué)活性、半衰期等發(fā)生變化，影響頭孢曲松鈉的臨床治療效果。

頭孢曲松鈉對(duì)革蘭陽性菌、陰性菌、厭氧菌顯示廣譜抗菌活性，常用于呼吸道、尿路、皮膚軟組織感染等治療。臨床使用頭孢曲松鈉藥物抗感染治療過程中，部分患者感染癥狀得不到有效控制或48～72 治療無效。當(dāng)臨床使用同一藥物治療患者感染得不到有效控制，而細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果呈中度以上敏感，與臨床治療效果不一致時(shí)，常規(guī)考慮為細(xì)菌菌株的變異而產(chǎn)生耐藥[6]。臨床常規(guī)采集患者相應(yīng)的標(biāo)本作細(xì)菌培養(yǎng)加藥敏試驗(yàn)查明原因，為臨床正確選擇藥物治療提供科學(xué)的理論依據(jù)。

表1結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組患者有長(zhǎng)期使藥史，其藥物抗體陽性率為(72.00%)明顯高于對(duì)照組(19.00%)，說明藥物抗體產(chǎn)生與用藥史具有一定關(guān)聯(lián)性。表2藥物抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組藥物抗體效價(jià)最高凝集強(qiáng)度1+，效價(jià)滴度為64，對(duì)照組最高凝集強(qiáng)度1+，效價(jià)滴度為2。從測(cè)定結(jié)果分析，實(shí)驗(yàn)組患者有使用頭孢曲松鈉用藥史，機(jī)體的免疫系統(tǒng)曾經(jīng)受頭孢曲松鈉免疫刺激，患者曾經(jīng)產(chǎn)生免疫性抗體藥物抗體?；颊咄Ｖ故褂迷撍幬锖螅贵w效價(jià)會(huì)降低。當(dāng)患者再次使用該藥物治療，藥物與載體蛋白結(jié)合獲得免疫原性，刺激機(jī)體的漿細(xì)胞產(chǎn)生抗-頭孢曲松鈉(IgG),1周內(nèi)抗體迅速上升，2周后上升到最高峰。從實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)結(jié)果分析，符合“記憶免疫應(yīng)答抗體產(chǎn)生的規(guī)律”。

在MH瓊脂平板培養(yǎng)基上模擬體內(nèi)條件的藥敏試驗(yàn)(表3)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組用藥物抗體陽性血清浸泡處理的藥敏紙片不能有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，耐藥率高達(dá)62.00%，對(duì)照組能夠有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，從而證實(shí)實(shí)驗(yàn)組藥敏試驗(yàn)結(jié)果受血清中藥物抗體的影響，呈現(xiàn)抑菌耐藥現(xiàn)象[7]。

綜上所述，影響頭孢曲松鈉等小分子藥物抗感染治療的原因與其用藥史、藥物抗體、藥物抗體效價(jià)等因素有關(guān)?；颊唛L(zhǎng)期使用某種小分子藥物，可能會(huì)導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生免疫性藥物抗體，影響其臨床抗感染療效。當(dāng)臨床藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果不支持臨床治療診斷時(shí)，應(yīng)結(jié)合患者是否有該類藥物的用藥史等綜合分析，檢測(cè)藥物抗體水平，為臨床合理用藥提供實(shí)證依據(jù)。