血清中HIV-1/HIV-2抗體、梅毒抗體和丙肝抗體行ELISA法和化學發(fā)光法檢測的對比研究

曾茜茜，宋勝偉

隨著社會不斷發(fā)展以及人們生活方式的改變，艾滋病、梅毒、丙型肝炎等傳染性疾病發(fā)生率越來越高，主要通過母嬰傳播、血液傳播和性傳播3種途徑進行傳播，嚴重影響患者的身心健康[1-3]。早期診斷并給予治療是控制疾病發(fā)展的有效手段，臨床常見檢測以上病毒的方法包括酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、化學發(fā)光法及膠體金免疫檢測法。本文主要比較血清中HIV-1/HIV-2抗體、梅毒抗體和丙肝抗體行ELISA和化學發(fā)光法檢測的結(jié)果，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年3月-2019年4月萬載縣人民醫(yī)院住院患者986例的血液標本，其中男565例，女421例，年齡22～55(37.65±8.21)歲。

1.2 儀器和試劑 儀器：MK3酶標儀，鄭州安圖A2000化學發(fā)光儀；試劑：ELISA法HIV-1/HIV-2抗體試劑、梅毒抗體試劑、丙肝抗體試劑購自北京萬泰生物藥業(yè)有限公司、上?？迫A生物工程股份有限公司，化學發(fā)光法HIV-1/HIV-2抗體試劑、梅毒抗體試劑、丙肝抗體試劑均購自鄭州安圖股份有限公司。

1.3 方法 患者均于清晨采集靜脈血3 ml，采集完成進行離心后取上清液直接檢測，分別利用ELISA法和化學發(fā)光法進行檢測，所有檢測遵循試劑盒說明書進行。

2 結(jié) 果

2.1 ELISA法陽性檢出結(jié)果 ELISA法HIV-1/HIV-2抗體陽性檢出率為0.51%(5/986)，梅毒抗體陽性檢出率為0.81%(8/986)，丙肝抗體陽性檢出率為1.01%(10/986)。

2.2 化學發(fā)光法陽性檢出結(jié)果 化學發(fā)光法HIV-1/HIV-2抗體陽性檢出率為0.81%(8/986)，梅毒抗體陽性檢出率為0.91%(9/986)，丙肝抗體陽性檢出率為1.32%(13/986)。

2.3 ELISA法檢測不都為陽性標本，化學發(fā)光法檢測均為陽性 ELISA法檢測結(jié)果為陽性標本在化學發(fā)光法檢測中也為陽性，標準抗體品梯度稀釋后化學發(fā)光法檢測HIV-1/HIV-2抗體、梅毒抗體和丙肝抗體均為陽性，ELISA法中僅梅毒抗體近陽性。見表1。

表1 ELISA法檢測部分為陽性標本，化學發(fā)光法檢測均為陽性

方法丙肝抗體12345678910111213化學發(fā)光法測定值6.894.597.8315.4220.9214.063.354.7612.282.8613.2116.395.73ELISA法結(jié)果--++++-++++++

3 討 論

艾滋病、梅毒、丙型肝炎是臨床常見傳染病，主要通過檢測血清病毒抗體確診以采取針對性治療措施。多數(shù)艾滋病病毒(HIV)感染為終身攜帶，體內(nèi)HIV難以清除，患者感染HIV后機體免疫力下降，易發(fā)生感染，主要癥狀為長期低熱、頭暈頭痛、慢性腹瀉、體重減輕、全身淋巴結(jié)腫大等[4-5]。通過檢測HIV抗體能有效幫助臨床診斷患者是否感染HIV，對確診患者及時給予干預(yù)，控制傳播。梅毒主要是由梅毒螺旋體引起的全身性、慢性性傳播疾病，由于感染時間不同可分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期梅毒[6]。Ⅰ期梅毒臨床特征為硬下疳，表現(xiàn)為不痛不癢潰瘍，形態(tài)為圓形或橢圓形且邊界清晰，一般持續(xù)4～6周后自愈[7]；Ⅱ期梅毒患者表現(xiàn)為梅毒疹，出現(xiàn)時間在硬下疳消退后，主要特點為不痛不癢、廣泛對稱、疹型多樣且反復(fù)發(fā)生，愈后多數(shù)無瘢痕殘留[8]；Ⅲ期梅毒分為良性晚期梅毒和嚴重晚期梅毒，主要為四肢、肩胛、頭皮及背部的皮膚黏膜損害、梅毒性皮下纖維結(jié)節(jié)、梅毒性心臟病、梅毒性腦膜炎等[9]。因其唯一宿主為人體，且該病毒生存溫度為37 ℃不能在人體外進行繁殖，離開人體就會凋亡，如檢測梅毒抗體為陽性則說明患者已感染[10]。丙型肝炎由丙型肝炎病毒引起，其潛伏期為2周～6個月，臨床癥狀為食欲不佳、腹脹、易感疲勞等肝炎常見輕微癥狀，是導(dǎo)致肝硬化、肝功能衰竭、肝癌的主要原因，由于慢性丙肝病毒感染患者臨床癥狀不明顯甚至在感染后幾十年內(nèi)仍然無癥狀表現(xiàn)，易被忽視直至肝臟有嚴重損害表現(xiàn)才確診[11]。如丙肝抗體呈陽性，則患者轉(zhuǎn)陰性極低，但早期診斷并給予治療可有效控制病情進而防止向肝硬化、肝衰竭、肝癌發(fā)展。除上述并發(fā)癥以外，丙型肝炎還可增加糖尿病、腎臟病、免疫系統(tǒng)細胞腫瘤等發(fā)生率，早期確診可緩解疾病癥狀或預(yù)防以上疾病。

ELISA法檢測病毒的工作原理主要是在抗原或抗體和某種特異酶結(jié)合形成酶標抗原或抗體后仍保留抗體免疫活性，同時還體現(xiàn)酶的生物活性[12]?；瘜W發(fā)光法檢測原理是將免疫反應(yīng)與發(fā)光系統(tǒng)結(jié)合檢測抗體或抗原，屬于發(fā)光免疫技術(shù)，臨床應(yīng)用廣泛。本研究結(jié)果顯示，化學發(fā)光法HIV-1/HIV-2抗體、梅毒抗體和丙肝抗體陽性檢出率分別為0.81%、0.91%、1.32%，高于ELISA病毒陽性檢出率，且在標準抗體品梯度稀釋后檢測中ELISA法中只有梅毒近陽性，而以上3種病毒通過化學發(fā)光法檢測仍然為陽性，提示化學發(fā)光法檢測血清中HIV-1/HIV-2抗體、梅毒抗體和丙肝抗體其陽性檢出率更高，靈敏性更高，結(jié)果更準確，有利于臨床快速開展治療。在金晶[13]的研究中也指出化學發(fā)光法檢測HIV-1/HIV-2抗體、梅毒抗體和丙肝抗體其敏感性更高，陽性檢出率明顯高于ELISA法。分析其原因：ELISA法檢測時需分離游離態(tài)或結(jié)合態(tài)的抗體，并需進行重復(fù)加樣和洗板操作，因是人工操作其重復(fù)性較差且誤差性較大、花費時間長易影響假陽性率變化，對操作者要求較高。另外還可能是在加樣過程中微孔板條未放平而影響洗板機進行操作，加樣時未校正微量移液器以規(guī)定的量垂直加入孔底，沒有利用加樣槍尖去除容器壁上已形成的液體滴再加入底孔，吸頭觸碰到酶標板孔已經(jīng)被包被的抗原發(fā)生交叉污染影響測定值。化學發(fā)光法檢測主要判斷依據(jù)為通過某一時間點發(fā)光強度、反應(yīng)總量確定體系相應(yīng)組成量，其發(fā)光信號強度還可在增強劑使用下提高從而使發(fā)光時間延長而提高靈敏度，排除黃疸、溶血及脂血影響，且具有安全無毒、重復(fù)性好、靈活簡便、價格低廉、反應(yīng)快速、線性范圍寬等優(yōu)勢，是臨床優(yōu)先選擇的原因。

綜上所述，化學發(fā)光法檢測血清中HIV-1/HIV-2抗體、梅毒抗體和丙肝抗體其靈敏性高于ELISA法，檢測結(jié)果更準確，值得臨床推廣應(yīng)用。