400例免疫相關(guān)性周?chē)窠?jīng)病患者抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體檢測(cè)結(jié)果分析

李云珍，姚少濠，李 玲，蘇坤華，覃莉萍，張 玲，劉 勇△

1.廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心有限公司，廣東廣州 510005；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)金沙洲醫(yī)院檢驗(yàn)中心，廣東廣州 510005

免疫介導(dǎo)的周?chē)窠?jīng)病主要侵犯周?chē)窠?jīng)或神經(jīng)節(jié)，發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，其臨床特點(diǎn)為：亞急性起病，不對(duì)稱(chēng)性的、多灶性的、選擇性的運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)和自主神經(jīng)功能異常。臨床常見(jiàn)的免疫相關(guān)性周?chē)窠?jīng)病主要包括：急性炎癥性脫髓鞘多發(fā)性神經(jīng)病(AIDP)、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(CIDP)、多灶性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病(MMN)、伴有IgM副蛋白脫髓鞘性神經(jīng)病、POEMS綜合征、各種血管炎(包括系統(tǒng)性和非系統(tǒng)性)相關(guān)的周?chē)窠?jīng)病等[1]。本研究旨在從體液免疫角度出發(fā)，分析免疫相關(guān)性周?chē)窠?jīng)病患者血清和腦脊液中神經(jīng)節(jié)苷脂抗體(GM1、GM2、GM3、GM4、GD1a、GD1b、GD2、GD3、GT1a、GT1b、GQ1b及硫脂的IgG和IgM抗體)存在情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月1日至2020年3月26日送檢廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心的400例由臨床診斷為免疫相關(guān)性周?chē)窠?jīng)病患者作為研究對(duì)象，其中男244例，女156例；年齡1～84歲，中位年齡45歲；格林-巴利綜合征213例，慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病102例，Miller-Fisher綜合征36例，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病31例，多灶性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病18例。選取血清和腦脊液進(jìn)行抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體檢測(cè)。

1.2儀器與試劑 SK-R1807-S實(shí)驗(yàn)室翹板搖床(北京龍大科技發(fā)展有限公司)，抗神經(jīng)節(jié)苷脂譜抗體(GM1、GM2、GM3、GM4、GD1a、GD1b、GD2、GD3、GT1a、GT1b、GQ1b、硫脂的IgG和IgM抗體)共24項(xiàng)檢測(cè)試劑盒(Generic Assays公司)。

1.3方法 第1步，患者標(biāo)本中的自身免疫抗體與包被在測(cè)試條固相上的目標(biāo)抗原結(jié)合。4 ℃震蕩反應(yīng)120 min后，未結(jié)合的標(biāo)本成分被洗液洗脫；第2步，與抗原結(jié)合上的抗體與連接了辣根過(guò)氧化物酶的抗IgG或抗IgM連接物特異性反應(yīng)。4 ℃反應(yīng)60 min后，多余的連接物在清洗過(guò)程中被從固相免疫復(fù)合物洗脫；第3步，堿性磷酸酶在膜上將無(wú)色底物轉(zhuǎn)變成暗紫色的沉淀線條，震蕩10 min后，用洗液清洗，反應(yīng)終止。測(cè)試條在干燥后可以讀出結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel表格計(jì)算陽(yáng)性率，采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1不同年齡患者抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體陽(yáng)性率比較 血清和腦脊液總檢測(cè)人數(shù)為400例，陽(yáng)性總例數(shù)(血清和腦脊液任一標(biāo)本陽(yáng)性或血清和腦脊液同時(shí)陽(yáng)性的數(shù)量)為131例，總陽(yáng)性率為32.75%。血清陽(yáng)性128例，陽(yáng)性率為32.00%，腦脊液陽(yáng)性24例，陽(yáng)性率為6.00%。>60～70歲患者陽(yáng)性率最高，為40.82%,其次是>30～40歲(38.30%)。各年齡段陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.367)。見(jiàn)表1。

表1 不同年齡組抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體陽(yáng)性率比較

2.2男、女患者抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體陽(yáng)性率比較 244例男性患者中陽(yáng)性84例，陽(yáng)性率為34.43%；156例女性患者中陽(yáng)性47例，陽(yáng)性率為30.13%。男性陽(yáng)性率雖高于女性，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.79,P=0.37)。見(jiàn)表2。

表2 抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體男女性陽(yáng)性率比較

2.3抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體血清和腦脊液陽(yáng)性占比情況 在總的131例陽(yáng)性患者中，單獨(dú)血清抗體陽(yáng)性最多，共107例，占總陽(yáng)性的81.68%；其次分別是血清陽(yáng)性抗體包含腦脊液陽(yáng)性抗體18例，占總陽(yáng)性的13.74%；單獨(dú)腦脊液抗體陽(yáng)性3例，占總陽(yáng)性的2.29%；血清和腦脊液抗體陽(yáng)性不重疊有2例，占總陽(yáng)性的1.53%；血清和腦脊液陽(yáng)性抗體有部分重疊、部分不重疊最少，僅有1例，占總陽(yáng)性的0.76%。

2.4不同抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體陽(yáng)性在400例患者血清和腦脊液中分布情況 總陽(yáng)性率最高的是抗硫脂抗體IgG，占12.75%，其次是抗GM1抗體IgG，陽(yáng)性率為8.50%，第3是抗GT1a抗體IgG，陽(yáng)性率為7.75%。 24種抗體除抗GD3抗體IgM、抗GD1a抗體IgM和抗GT1b抗體IgM抗體3項(xiàng)未出現(xiàn)陽(yáng)性外，其他抗體均有陽(yáng)性情況。血清和腦脊液陽(yáng)性率前3順序與總體陽(yáng)性率一致。血清陽(yáng)性率排序與總陽(yáng)性率排序一致。腦脊液出現(xiàn)陽(yáng)性抗體較少，有10種抗體，抗體陽(yáng)性率排序基本與血清陽(yáng)性率一致。見(jiàn)表3。

表3 不同抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體陽(yáng)性在400例患者血清和腦脊液中分布情況[n(%)]

2.5不同模式組合陽(yáng)性及占總陽(yáng)性的比例 131例抗體陽(yáng)性患者共出現(xiàn)了57種抗體組合模式，不同模式中A模式(抗硫脂抗體IgG)陽(yáng)性例數(shù)最多，為25例(19.08%)，其次是N模式(抗GM1抗體IgM)，陽(yáng)性11例(8.40%)，第3是B模式(抗GM1抗體IgG)，陽(yáng)性9例(6.87%)。見(jiàn)表4。

表4 不同模式陽(yáng)性率及占總陽(yáng)性率的比例

2.6檢測(cè)陽(yáng)性抗體數(shù)目比較 單獨(dú)1種抗體陽(yáng)性率最高，為73例(55.73%)，其次是兩種抗體陽(yáng)性模式34例(25.95%)，第3是3種抗體陽(yáng)性模式12例(9.16%)。

3 討 論

免疫介導(dǎo)的周?chē)窠?jīng)病臨床表現(xiàn)非常多樣,同樣，這些疾病的抗體譜也有很大的差異性，抗周?chē)窠?jīng)膜表面糖脂抗體與自身免疫介導(dǎo)的急性和慢性多發(fā)性周?chē)窠?jīng)病有密切關(guān)系，此類(lèi)抗體包括抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體和抗硫脂抗體。神經(jīng)節(jié)苷脂廣泛分布于全身各組織細(xì)胞膜的外表面，以神經(jīng)系統(tǒng)水平最高，參與神經(jīng)細(xì)胞膜的構(gòu)成，并維持其穩(wěn)定性,其分子由2個(gè)部分構(gòu)成，一部分是位于神經(jīng)細(xì)胞膜脂質(zhì)層內(nèi)疏水性的神經(jīng)酰胺，另一部分是暴露于膜表面的親水性的低聚糖基。神經(jīng)節(jié)苷脂種類(lèi)很多，主要根據(jù)其糖基結(jié)合唾液酸分子的數(shù)目及部位進(jìn)行分類(lèi)，含一個(gè)分子唾液酸為單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂(GM)；含2、3、4個(gè)唾液酸分子分別為GD、GT和GQ。又根據(jù)所含己糖的數(shù)目和種類(lèi)分為GM1、GM2、GM3、GM4。硫脂是髓鞘膜上含硫酸殘基的酸性糖脂，參與神經(jīng)鞘膜的構(gòu)成并與神經(jīng)鞘膜生理功能密切相關(guān)?？股窠?jīng)節(jié)苷脂抗體可能通過(guò)結(jié)合分布于特定部位的相應(yīng)抗原而致病，并導(dǎo)致出現(xiàn)相應(yīng)的臨床癥狀。

本研究結(jié)果顯示，400例患者抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體總陽(yáng)性率為32.00%，血清陽(yáng)性128例，陽(yáng)性率為32.00%，腦脊液陽(yáng)性24例，陽(yáng)性率為6.00%，血清陽(yáng)性率高于腦脊液。目前，對(duì)腦脊液中抗體分析及產(chǎn)生機(jī)制的報(bào)道甚少，吳德云等[2]對(duì)吉蘭-巴雷綜合征(GBS)和CIDP患者血清和腦脊液中硫脂抗體水平的相關(guān)性分析表明，無(wú)論是IgG型還是IgM型抗硫脂抗體均無(wú)相關(guān)性，說(shuō)明患者血清和腦脊液中抗硫脂抗體并非同一來(lái)源，腦脊液中的抗硫脂抗體合成部位可能在鞘內(nèi)。單獨(dú)血清抗體陽(yáng)性最多，共107例，占總陽(yáng)性的81.68%，其次是血清陽(yáng)性抗體包含腦脊液陽(yáng)性抗體，為18例，占總陽(yáng)性的13.73%，第3是單獨(dú)腦脊液抗體陽(yáng)性(3例)，占總陽(yáng)性的2.29%。血清和腦脊液抗體陽(yáng)性不重疊僅占總陽(yáng)性的1.53%，血清和腦脊液抗體陽(yáng)性有部分重疊、部分不重疊最少(1例)，占總陽(yáng)性的0.76%。血清和腦脊液均能檢測(cè)到相關(guān)抗體，證明二者之間無(wú)相關(guān)性，這可能提示血清和腦脊液中均存在針對(duì)免疫性周?chē)窠?jīng)病的免疫反應(yīng)，并且參與了免疫性周?chē)窠?jīng)病的發(fā)病機(jī)制?？股窠?jīng)節(jié)苷脂抗體大部分在血清中被檢測(cè)到，并且腦脊液大多數(shù)陽(yáng)性抗體與血清重疊，也有可能是抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)破壞了血腦屏障的完整性，增加其通透性，推測(cè)在血清中產(chǎn)生后進(jìn)入腦脊液。

不同年齡、不同性別患者陽(yáng)性率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但與劉玲春等[3]報(bào)道的免疫反應(yīng)介導(dǎo)的周?chē)窠?jīng)病多發(fā)生于30～50歲的中、青年,其中男女比例約為1.7∶1.0不同；與SEJVAR等[4]報(bào)道的GBS男性與女性的比例為3∶2，兒童發(fā)病率較成人低，且發(fā)病率隨著年齡增長(zhǎng)而增加不同；與YEH等[5]報(bào)道的多灶性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病常見(jiàn)于男性，男女比例為2.7∶1.0，癥狀發(fā)作年齡為20～70歲，平均40歲也不相同。這可能與研究的疾病分類(lèi)和數(shù)據(jù)差異有關(guān)。

特定抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體和具有某些特異臨床特點(diǎn)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)，本研究中血清和腦脊液抗體陽(yáng)性率排前3位的抗體均為抗硫脂抗體IgG、抗GM1抗體IgG和抗GT1a抗體IgG，順序與總體陽(yáng)性率一致。血清陽(yáng)性率排序與總體陽(yáng)性率排序一致。腦脊液出現(xiàn)陽(yáng)性抗體較少，有10種抗體，抗體陽(yáng)性率排序基本與血清陽(yáng)性率一致。本研究發(fā)現(xiàn)，在神經(jīng)節(jié)苷脂抗體譜檢查出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果患者中，共出現(xiàn)了57種抗體組合模式，不同模式中A模式(抗硫脂抗體IgG)陽(yáng)性例數(shù)最多，為25例(19.08%)，其次是N模式(抗GM1抗體IgM)，其陽(yáng)性例數(shù)為11例(8.40%)，第3是B模式(抗GM1抗體IgG)，其陽(yáng)性例數(shù)為9例(6.87%)。GM1是神經(jīng)膜最豐富的神經(jīng)節(jié)苷脂抗體之一[6]，而硫脂在周?chē)窠?jīng)組織中水平是任何節(jié)苷脂的100倍以上[7]。在一些GBS和CIDP患者血清中可檢測(cè)到高滴度的抗硫脂抗體，但對(duì)于抗硫脂抗體在炎性周?chē)窠?jīng)病中的致病機(jī)制尚不十分清楚?？笹M1抗體IgG與急性運(yùn)動(dòng)性軸索型神經(jīng)病及AIDP相關(guān)[8]，GM1抗體是MMN一個(gè)有效的診斷標(biāo)記[9]?？笹M1和抗硫脂抗體也常見(jiàn)于抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體相關(guān)性血管炎和其他多器官免疫介導(dǎo)疾病患者[10]，抗GT1a抗體IgG的存在和疾病的重疊提示咽-頸-臂-肱變體不僅與GBS密切相關(guān)，而且與費(fèi)雪綜合征和腦干腦炎也密切相關(guān)[11]。抗GT1a抗體與GBS的暴發(fā)和空腸彎曲菌相關(guān)菌株中神經(jīng)節(jié)苷脂模擬關(guān)聯(lián)[12]。ALPA等[13]報(bào)道的復(fù)發(fā)性GBS中也會(huì)出現(xiàn)抗GT1a抗體IgG和抗GQ1b抗體IgG。

單獨(dú)1種抗體陽(yáng)性率最高[73例(55.73%)]，其次是兩種抗體陽(yáng)性模式[34例(25.95%)]，第3是3種抗體陽(yáng)性模式[12例(9.16%)]，兩種以上抗體陽(yáng)性占比44.27%。單獨(dú)某個(gè)抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體的臨床意義不同，多種抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體同時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，可能具有不同的臨床特點(diǎn)，不同種類(lèi)神經(jīng)節(jié)苷脂之間具有相似的抗原表位，也可能發(fā)生不同抗體之間的交叉反應(yīng)。

診斷免疫介導(dǎo)的周?chē)窠?jīng)病，抗體檢測(cè)具有重要性。血清和腦脊液中可檢測(cè)到相應(yīng)的抗神經(jīng)節(jié)苷脂譜抗體,這些抗體的出現(xiàn)對(duì)于確定病因及診斷分型有很大的幫助，可為早期診斷、鑒別診斷及有效治療等提供幫助。