EDTA-K2抗凝血漿與血清中心臟標(biāo)志物檢測結(jié)果的一致性驗證

楊郝亮，張 萍，武利濤，周航宇，郝金莉，王 昊，丁 然，陳維華，楊曦明△

1.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院檢驗科，北京 100700；2.北京市通州區(qū)疾病預(yù)防控制中心中心實(shí)驗室，北京 101100

隨著社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們生活方式發(fā)生了巨大變化，尤其是人口老齡化及城鎮(zhèn)化進(jìn)程加速，中國心血管疾病危險因素流行趨勢明顯，如吸煙、高血壓、血脂異常、糖尿病、超重/肥胖、缺乏運(yùn)動和不合理膳食等，導(dǎo)致心血管疾病的發(fā)病人數(shù)持續(xù)增加[1-3]。今后10年，心血管疾病患病人數(shù)仍將快速增長。急性心肌梗死(AMI)是冠狀動脈急性、持續(xù)性缺血缺氧引起的心肌壞死，作為一種心血管危急癥，其具有發(fā)病急、病死率高、最佳救治窗口期短且容易合并多器官系統(tǒng)疾病等特點(diǎn)[4-5]。2002-2016年，AMI病死率總體仍呈上升態(tài)勢，從2005年開始，AMI病死率呈快速上升趨勢。肌紅蛋白(Myo)、肌鈣蛋白I(cTnI)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)對AMI的早期診斷有重要作用，可為臨床提供診斷依據(jù)，從而降低AMI急性期的病死率[6-9]。在實(shí)際應(yīng)用過程中，推薦使用的血清標(biāo)本因分離時間長對報告的及時性可造成一定影響，而使用血漿可以縮短標(biāo)本預(yù)處理時間。本研究對乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血漿和血清對心臟標(biāo)志物檢測結(jié)果的一致性進(jìn)行初步驗證，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院因急性冠狀動脈綜合征入院的患者133例作為研究對象。選取CK-MB、Myo和cTnI正常參考值人群標(biāo)本、異常人群標(biāo)本2個梯度，其中每個梯度各40例，男女各20例。

1.2儀器與試劑 亞輝龍iFlash 3000-H化學(xué)發(fā)光測定儀及配套CK-MB、Myo及cTnI原裝試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控物。CK-MB參考值為：男性<5.60 ng/mL，女性<3.10 ng/mL；Myo參考值為：男性<118.0 ng/mL，女性<59.5 ng/mL；cTnI參考值為：<0.03 ng/mL。真空采血管為北京格瑞納健峰生物技術(shù)有限公司提供的奧地利非可替紫頭管(內(nèi)含EDTA-K2，批號：454222)和紅頭管(內(nèi)含分離膠，批號：454067)。

1.3方法 分別用紅頭管和紫頭管采集同一患者靜脈血，紅頭管為血清組，紫頭管為血漿組，分別于低速離心機(jī)4 000 r/min離心10 min(排除高脂血、溶血、高膽紅素血標(biāo)本)，采用直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)的夾心免疫法測定CK-MB、Myo和cTnI水平，抽血后4 h內(nèi)完成全部項目的檢測。所有檢測項目均按試劑盒說明書設(shè)定參數(shù)，采用試劑配套校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)，確認(rèn)質(zhì)控結(jié)果在控后，同時對兩種標(biāo)本進(jìn)行檢測。

2 結(jié) 果

2.1CK-MB、Myo和cTnI檢測結(jié)果陰性、陽性一致性評價 CK-MB、Myo和cTnI定性分析結(jié)果存在一致性，Kappa值為0.75～1.00，一致性較好。其中CK-MB和cTnI檢測結(jié)果的Kappa值一致性檢驗完全相符，在標(biāo)本前處理過程中，抽取血漿或血清對CK-MB和cTnI檢測定性結(jié)果無影響。Myo檢測結(jié)果Kappa值一致性檢驗不完全相符。血清組中有2例Myo陽性患者在血漿組中檢測結(jié)果為陰性，這2例血清陽性值在參考區(qū)間的臨界值附近。Myo血清組與血漿組經(jīng)一致性檢驗Kappa值為0.95，一致性較好。血清和血漿CK-MB、Myo和cTnI檢測結(jié)果陰性、陽性一致性評價見表1。

表1 3項指標(biāo)檢測結(jié)果陰性、陽性一致性評價

2.2血清組與血漿組CK-MB、Myo和cTnI檢測結(jié)果比較 EDTA-K2抗凝血漿組與血清組CK-MB、Myo和cTnI檢測結(jié)果的數(shù)據(jù)分布均呈偏態(tài)分布，Myo偏態(tài)分布數(shù)據(jù)取以10為底的對數(shù)后轉(zhuǎn)換為正態(tài)分布。血漿組和血清組CK-MB和Myo檢測結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；血漿組和血清組cTnI檢測結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 血清組與血漿組CK-MB、Myo和cTnI檢測結(jié)果比較(ng/mL)

2.3血清組與血漿組CK-MB陽性者和陰性者CK-MB檢測結(jié)果比較 血清組與血漿組CK-MB陽性者和陰性者CK-MB檢測結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 血清組與血漿組CK-MB陽性者和陰性者CK-MB檢測結(jié)果比較[M(P25～P75)，ng/mL]

2.4血漿組和血清組Myo陽性者和陰性者M(jìn)yo檢測結(jié)果比較 血漿組和血清組Myo陽性者M(jìn)yo檢測結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；血漿組和血清組Myo陰性者M(jìn)yo檢測結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 血漿組和血清組Myo陽性者和陰性者M(jìn)yo檢測結(jié)果比較[M(P25～P75)，ng/mL]

2.5血漿組和血清組cTnI陽性者和陰性者cTnI檢測結(jié)果比較 血漿組和血清組cTnI陽性者和陰性者cTnI檢測結(jié)果比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表5。

表5 血漿組和血清組cTnI陽性者和陰性者cTnI檢測結(jié)果比較[M(P25～P75)，ng/mL]

3 討 論

據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示,近年來我國心血管疾病持續(xù)增加,老齡心血管疾病患者數(shù)量大幅增多[10]，其中AMI患者需要早期診斷，以便及時采取治療措施，挽救生命。使用抗凝管獲取血漿可避開血液凝固的過程，可以盡快對標(biāo)本進(jìn)行分離、檢測，從而縮短檢測時間。應(yīng)注意各種抗凝劑(如肝素或EDTA-K2等)對不同檢測方法的影響程度不一。檢測心肌損傷標(biāo)志物時使用血漿可以縮短標(biāo)本周轉(zhuǎn)時間，但是一定要考慮抗凝劑對檢測結(jié)果的影響。EDTA-K2抗凝血漿和血清標(biāo)本均為亞輝龍公司認(rèn)可的心肌損傷標(biāo)志物標(biāo)本類型，但這兩種標(biāo)本類型的檢測結(jié)果是否一致需進(jìn)行驗證。

本研究結(jié)果表明，EDTA-K2抗凝血漿和血清的心肌損傷標(biāo)志物定性分析結(jié)果一致性較好。CK-MB和cTnI檢測結(jié)果Kappa一致性檢驗完全相符，表明血漿中的纖維蛋白原和EDTA-K2抗凝劑對CK-MB和cTnI定性分析無非特異性干擾。Myo檢測結(jié)果Kappa一致性檢驗不完全相符，Myo在血清組中有2例陽性，在血漿組中按現(xiàn)有的參考值判為陰性，這2例血清陽性值在參考區(qū)間臨界值附近。Myo作為急性冠狀動脈綜合征患者心肌損傷的早期標(biāo)志物，其參考區(qū)間在EDTA-K2抗凝血漿中需要根據(jù)實(shí)驗室具體情況來建立。

本研究EDTA-K2抗凝血漿和血清的心肌損傷標(biāo)志物定量分析結(jié)果表明，cTnI作為最特異的心肌標(biāo)志物[11-12]，EDTA-K2抗凝血漿組和血清組檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。Myo和CK-MB則因試管而異，EDTA-K2抗凝血漿組和血清組檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與血清組比較，血漿組Myo和CK-MB檢測結(jié)果偏低，這與國內(nèi)外相關(guān)報道結(jié)果一致[13-14]。國外文獻(xiàn)報道，分離膠干擾Myo和CK-MB檢測機(jī)制尚不清楚[14]。從凝膠中釋放出的未知物質(zhì)可以輕微影響化學(xué)發(fā)光信號產(chǎn)生，也可以影響檢測中使用的抗體與Myo或CK-MB之間的相互作用。有文獻(xiàn)報道，抗凝劑不同對檢測結(jié)果有影響[14]。DAVES等[14]研究發(fā)現(xiàn)，使用Beckman Coulter Access時，含分離膠血清管的CK-MB檢測結(jié)果比不含分離膠肝素鋰抗凝管高，但HEDBERG等[15]觀察到Abbott AxSYM檢測肝素鋰血漿CK-MB檢測結(jié)果比血清高?？鼓齽┡c分離膠對心肌損傷標(biāo)志物檢測結(jié)果的影響有待進(jìn)一步研究。各實(shí)驗室在使用各檢測系統(tǒng)前需對廠家聲明進(jìn)行驗證，并制訂各自實(shí)驗室的參考區(qū)間。

綜上所述，EDTA-K2抗凝血漿可作為血清替代標(biāo)本檢測cTnI，但不適合作為血清替代標(biāo)本檢測Myo和CK-MB。如在工作中需要使用EDTA-K2抗凝血漿，則需要實(shí)驗室根據(jù)具體情況建立相應(yīng)的Myo和CK-MB參考區(qū)間。