血清DKK-1、LAG-3和SII在分化型甲狀腺癌診斷中的臨床價值

吳 玲，徐高峰

上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院南院/上海市奉賢區(qū)中心醫(yī)院：1.普外科；2.急診科，上海 201499

甲狀腺癌是普外科常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率占所有惡性腫瘤的1%～2%，按組織學(xué)類型分為乳頭狀癌、濾泡狀癌和未分化癌，其中乳頭狀癌和濾泡狀癌分化程度較好，故二者統(tǒng)稱為分化型甲狀腺癌[1]。分化型甲狀腺癌的超聲檢查診斷標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，而超聲穿刺活檢受醫(yī)院條件的限制，由于為有創(chuàng)性，所以患者接受程度較差，易被漏診和誤診。因此，尋找一種無創(chuàng)、簡單易行和依從性好的鑒別良惡性甲狀腺腫瘤的方法，具有重要臨床意義[2]。重組人Dick-kopfx相關(guān)蛋白-1(DKK-1)是Wnt信號通路中的重要拮抗劑，惡性腫瘤患者血清DKK-1呈高表達(dá)，可以通過旁分泌和自分泌多種信號通路參與腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移；血清淋巴細(xì)胞活化基因-3(LAG-3)屬于免疫球蛋白家族的跨膜蛋白，對淋巴細(xì)胞具有活化作用，參與免疫應(yīng)答的負(fù)反饋調(diào)節(jié)[3]；系統(tǒng)性免疫性炎癥指數(shù)(SII)是綜合中性粒細(xì)胞(N)、淋巴細(xì)胞(L)和血小板(P)數(shù)量，并與機體免疫應(yīng)答密切相關(guān)的指標(biāo)[4]。本研究對血清DKK-1、LAG-3和SII在分化型甲狀腺癌患者中的診斷價值進(jìn)行比較分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2019年12月在本院就診的分化型甲狀腺癌患者98例作為分化型甲狀腺癌組，均行手術(shù)治療，并經(jīng)病理檢查確診，其中男35例，女63例；年齡38～60歲，平均(46.68±8.64)歲；病理類型：乳頭狀癌71例，濾泡狀癌27例；TNM分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期35例，Ⅲ期32例，Ⅳ期16例。選擇同期在本院就診的良性甲狀腺結(jié)節(jié)患者75例作為甲狀腺結(jié)節(jié)組，均行手術(shù)治療，病理檢查確診，其中男28例，女47例；年齡37～60歲，平均(47.15±9.55)歲。選擇同期在本院健康體檢者45例作為健康對照組，其中男18例，女27例；年齡38～60歲，平均(46.23±7.28)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有受試者均知情同意并簽署知情同意書；本研究經(jīng)本院倫理委員會審核通過。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他惡性腫瘤；免疫性和血液性疾病；智力障礙和精神性疾病；高血壓、糖尿病和冠心病等慢性疾?。桓窝?、結(jié)核病和肺炎等急慢性感染性疾??；孕婦和哺乳期婦女。3組受試者年齡、性別等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2方法

1.2.1血清標(biāo)本留取 所有分化型甲狀腺癌患者入院時和術(shù)后2周，以及良性甲狀腺結(jié)節(jié)患者和健康體檢者抽取肘靜脈血5 mL。血液標(biāo)本采用離心機離心，離心半徑15 cm，離心速度3 000 r/min，離心時間15 min，抽取上清液放置在除酶管內(nèi)，置-70 ℃冰箱保存待檢。

1.2.2血清DKK-1、LAG-3和血常規(guī)檢測 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清DKK-1和LAG-3水平，采用全自動酶標(biāo)儀在450 nm處檢測吸光度值，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出DKK-1和LAG-3水平，其操作步驟嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。DKK-1和LAG-3檢測試劑盒采用美國R&D公司產(chǎn)品。采用血細(xì)胞分析儀檢測血常規(guī)，分別計算出N、L和P和絕對值。SII=P×N/L。

1.3觀察指標(biāo) 比較分化型甲狀腺癌組、甲狀腺結(jié)節(jié)組和健康對照組血清DKK-1、LAG-3水平和SII，觀察手術(shù)前后血清DKK-1、LAG-3水平和SII變化情況，觀察各指標(biāo)的相關(guān)性，以及診斷分化型甲狀腺癌的效能。

2 結(jié) 果

2.1各組血清DKK-1、LAG-3水平和SII比較 分化型甲狀腺癌組患者血清DKK-1水平和SII均明顯高于甲狀腺結(jié)節(jié)組，甲狀腺結(jié)節(jié)組患者又明顯高于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；分化型甲狀腺癌組患者血清LAG-3水平明顯低于甲狀腺結(jié)節(jié)組，而甲狀腺結(jié)節(jié)組患者又明顯低于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清DKK-1、LAG-3水平和SII比較

2.2分化型甲狀腺癌患者術(shù)后血清DKK-1、LAG-3水平和SII變化 分化型甲狀腺癌患者術(shù)后血清DKK-1[(61.58±6.13)μg/L]水平和SII[(368.31±114.68)]均較術(shù)前明顯降低(t=8.680、7.595，P<0.05)，而血清LAG-3[(533.91±126.64)μg/L]水平較術(shù)前明顯升高(t=13.174，P<0.05)。

2.3分化型甲狀腺癌患者血清DKK-1、LAG-3水平和SII與臨床病理因素的關(guān)系 分化型甲狀腺癌患者血清DKK-1、LAG-3水平和SII與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有明顯關(guān)系(P<0.05)；而與性別、年齡、病理類型、腫瘤最大徑和腺外浸潤無明顯關(guān)系(P>0.05)。見表2。

表2 分化型甲狀腺癌患者血清DKK-1、LAG-3水平和SII與臨床病理因素的關(guān)系

續(xù)表2 分化型甲狀腺癌患者血清DKK-1、LAG-3水平和SII與臨床病理因素的關(guān)系

2.4分化型甲狀腺癌患者血清DKK-1、LAG-3水平與SII之間的相關(guān)性分析 分化型甲狀腺癌患者血清LAG-3水平與DKK-1水平(r=-0.642，P<0.05)和SII(r=-0.716，P<0.05)均呈負(fù)相關(guān)，DKK-1水平與SII呈正相關(guān)(r=0.784，P<0.05)。

2.5血清DKK-1、LAG-3和SII對甲狀腺癌的診斷效能 血清DKK-1、LAG-3和SII對甲狀腺癌具有較高的診斷效能，通過將3項指標(biāo)進(jìn)行二元Logistic回歸分析得方程=0.148×DKK-1-0.013×LAG-3+0.009×SII-7.655，DKK-1、LAG-3、SII聯(lián)合檢測的靈敏度為88.8%，特異度為96.0%，受試者工作特征曲線下面積(AUC)為0.965，明顯高于DKK-1、LAG-3和SII(P<0.05)單獨檢測，而DKK-1、LAG-3和SII之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3和圖1。

表3 血清DKK-1、LAG-3水平和SII對分化型甲狀腺癌的診斷效能

圖1 血清DKK-1、LAG-3和SII診斷分化型甲狀腺癌的靈敏度和特異度

3 討 論

分化型甲狀腺癌由于缺乏典型的臨床表現(xiàn)，術(shù)前與良性甲狀腺結(jié)節(jié)難以鑒別，現(xiàn)有診斷方法主要有B超、CT和細(xì)胞學(xué)穿刺病理活檢，其單獨使用均不能達(dá)到滿意的診斷效果。現(xiàn)有的CT和B超等影像學(xué)方法對診斷甲狀腺癌的靈敏度較低，易產(chǎn)生誤診。病理活檢雖然為確診手段，但其為有創(chuàng)檢查，患者依從性較差。血清學(xué)指標(biāo)出現(xiàn)異常往往比癥狀早3～6個月，因此，早期血清學(xué)指標(biāo)聯(lián)合檢測已是目前診斷惡性腫瘤的研究熱點之一。

DKK-1是一種分泌性蛋白，屬于Dick-kopfx-1家族成員，可以通過與相應(yīng)的受體結(jié)合后調(diào)控細(xì)胞通路的傳導(dǎo)，對細(xì)胞的分化、增殖、凋亡和遷移有重要作用，在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中也有重要作用。DKK-1含有1個信號肽序列和2段富含半胱氨酸的保守結(jié)構(gòu)域，其羧基端可以與低密度脂蛋白受體結(jié)合，對Wnt信號通路具有明顯的抑制作用[5]。DKK-1在不同腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)明顯不同，在胃癌、腸癌和乳腺癌中呈低表達(dá)，在肝癌、肺癌和甲狀腺癌中呈高表達(dá)[6-7]。DKK-1在腫瘤中呈負(fù)反饋調(diào)節(jié)，Wnt信號通路對腫瘤的發(fā)生和發(fā)展具有重要作用，其在正常組織中呈低表達(dá)，在惡性腫瘤患者血清中呈高表達(dá)，通過自分泌和旁分泌激活多種信號通路，參與腫瘤增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移的負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，分化型甲狀腺癌患者血清DKK-1水平明顯高于甲狀腺結(jié)節(jié)組和健康對照組，且手術(shù)后血清DKK-1水平較術(shù)前明顯降低，說明DKK-1水平降低與甲狀腺癌手術(shù)有一定的關(guān)聯(lián)，推測DKK-1主要來源于甲狀腺癌，參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。當(dāng)血清DKK-1>64.30 μg/L時，其診斷分化型甲狀腺癌的靈敏度為77.6%，特異度為86.7%，AUC為0.858，對分化型甲狀腺癌具有較高的診斷效能，與文獻(xiàn)[9]報道血清DKK-1表達(dá)水平對胃癌具有較高診斷效能的結(jié)果接近。

LAG-3屬于免疫球蛋白超家族成員，是一種跨膜蛋白，在多種免疫細(xì)胞表面表達(dá)，可以選擇性活化T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞，激活免疫應(yīng)答，對腫瘤細(xì)胞增殖和遷移具有明顯抑制作用，參與腫瘤微環(huán)境和免疫調(diào)節(jié)作用[10]。LAG-3在腫瘤組織中表達(dá)并釋放入血，通過檢測LAG-3水平可評估腫瘤的惡性程度[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，分化型甲狀腺癌患者血清LAG-3水平明顯低于甲狀腺結(jié)節(jié)組和健康對照組，并且術(shù)后甲狀腺癌患者血清LAG-3水平較術(shù)前明顯升高，說明LAG-3與甲狀腺癌具有密切的相關(guān)性，是分化型甲狀腺癌的重要保護因子，對甲狀腺癌具有負(fù)調(diào)節(jié)作用。本研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血清LAG-3≤446.09 μg/L時，其靈敏度為90.8%，特異度為73.3%，AUC為0.898，說明LAG-3對分化型甲狀腺癌有較高的診斷效能，與文獻(xiàn)[12]報道血清LAG-3水平是診斷胃癌的重要血清標(biāo)記物，與腫瘤分期、浸潤深度和分化程度相關(guān)的結(jié)論相類似。

SII是已經(jīng)廣泛證實的與惡性腫瘤的診斷和預(yù)后密切相關(guān)的重要指標(biāo)，主要在肝癌、胃癌、甲狀腺癌和生殖細(xì)胞腫瘤中有重要臨床意義。SII升高代表高水平的P和N及低的L計數(shù)，P升高存在于10%～57%的惡性腫瘤中，是副腫瘤綜合征較為常見的一種，與腫瘤的惡性程度具有明顯相關(guān)性。腫瘤細(xì)胞與活化的P結(jié)合后，誘導(dǎo)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化[13]。N通過產(chǎn)生與多種腫瘤相關(guān)的炎癥因子，包括內(nèi)源性和外源性途徑，改變腫瘤炎性微環(huán)境，增加腫瘤侵襲性和免疫監(jiān)視的逃避[14]。而L通過誘導(dǎo)細(xì)胞毒性導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡，抑制惡性腫瘤細(xì)胞增殖和遷移[15]，對機體惡性腫瘤的免疫監(jiān)視和防御具有重要作用，是惡性腫瘤發(fā)生免疫應(yīng)答的重要部位[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，分化型甲狀腺癌患者SII明顯高于甲狀腺結(jié)節(jié)組和健康對照組，與腫瘤的TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，在診斷甲狀腺癌方面有較高的靈敏度和特異度。并且手術(shù)后甲狀腺癌患者SII明顯低于術(shù)前，說明SII參與了分化型甲狀腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程。

本研究發(fā)現(xiàn)，血清LAG-3水平與DKK-1水平和SII均呈負(fù)相關(guān)，血清DKK-1水平與SII呈正相關(guān)，說明3項指標(biāo)之間存在某種內(nèi)在聯(lián)系；聯(lián)合檢測DKK-1、LAG-3和SII的靈敏度為88.8%，特異度為96.0%，AUC為0.965，明顯高于單項指標(biāo)，說明3項指標(biāo)聯(lián)合檢測診斷分化型甲狀腺癌具有某種互補性，其具體機制仍不清楚，需要進(jìn)一步研究。

綜上所述，血清DKK-1、LAG-3和SII參與了分化型甲狀腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程，對于分化型甲狀腺癌具有較高的診斷效能。