HB&L微生物培養(yǎng)儀在尿路感染中的臨床診斷價(jià)值*

丁賠賠，李艷君，丁毅偉，錢(qián)揚(yáng)會(huì)，趙強(qiáng)元

中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院第六醫(yī)學(xué)中心檢驗(yàn)科，北京 100048

尿路感染(UTI)是一種常見(jiàn)的感染性疾病，有資料顯示，全球每年新增UTI患者大約1.5億，而中國(guó)UTI感染率達(dá)1%，其中絕大部分患者為成年女性[1-2]。如不及時(shí)治療UTI常常會(huì)導(dǎo)致慢性感染，嚴(yán)重者可能會(huì)導(dǎo)致腎功能受損，嚴(yán)重影響患者的生命安全[3-4]。目前，臨床上診斷UTI的金標(biāo)準(zhǔn)是尿培養(yǎng)，然而尿培養(yǎng)過(guò)程復(fù)雜，從標(biāo)本采集到鑒定出結(jié)果耗時(shí)較長(zhǎng)，并且大部分送檢標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果為陰性，浪費(fèi)大量的人力、物力[5]。隨著現(xiàn)代化科技的飛速發(fā)展，臨床檢驗(yàn)技術(shù)也在不斷更新，正向著自動(dòng)化、快速、準(zhǔn)確的方向發(fā)展。因此，尋找一種省時(shí)且準(zhǔn)確率高的篩檢方法，對(duì)于臨床診斷UTI有十分重要的意義。KROUMOVA等[6]研究表明，質(zhì)譜分析前采用HB&L增菌技術(shù)將樣品富集到生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，能夠快速鑒定生長(zhǎng)菌落中的細(xì)菌。然而，HB&L增菌技術(shù)在UTI菌種鑒定中的應(yīng)用價(jià)值目前尚鮮有報(bào)道?；诖?，本研究通過(guò)比較分析尿培養(yǎng)與HB&L微生物培養(yǎng)儀增菌后質(zhì)譜的菌種鑒定結(jié)果，以期探討HB&L微生物培養(yǎng)儀在UTI臨床診斷中的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2019年6-12月于本院就診的277例疑似UTI患者作為研究對(duì)象，其中男158例，女119例。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均具有尿路刺激癥狀，如尿頻、尿急、尿痛、發(fā)熱或腎區(qū)疼痛等。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)檢測(cè)前服用皮質(zhì)激素或其他抗菌藥物的患者；(2)合并人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)感染等傳染性疾病患者；(3)合并其他對(duì)結(jié)果有影響疾病的患者。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本采集與保存 患者入院后，按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[7]采集清潔尿液標(biāo)本(包括中段尿、尿袋引流尿、膀胱穿刺尿)，立即送檢。

1.2.2尿培養(yǎng)方法 取10 μL尿液定量接種到哥倫比亞血平板和麥康凱培養(yǎng)皿平板，置于35 ℃ 5%～10%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48 h，取出培養(yǎng)皿，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，并記錄培養(yǎng)結(jié)果。判斷標(biāo)準(zhǔn)：(1)陽(yáng)性為革蘭陽(yáng)性菌>104cfu/mL，革蘭陰性菌>105cfu/mL；(2)陰性為48 h無(wú)菌落生長(zhǎng)或菌落計(jì)數(shù)<104cfu/mL。針對(duì)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行如下處理：取單個(gè)菌落涂于質(zhì)譜儀靶板，加甲酸，風(fēng)干，加基質(zhì)，風(fēng)干，然后上質(zhì)譜儀鑒定，對(duì)所有陽(yáng)性菌株進(jìn)一步鑒定到種。

1.2.3HB&L微生物培養(yǎng)儀培養(yǎng)方法 取500 μL尿液接種到尿培養(yǎng)增菌液瓶中，放在HB&L微生物培養(yǎng)儀中培養(yǎng)3 h 15 min，根據(jù)HB&L微生物培養(yǎng)儀結(jié)果處理培養(yǎng)液。判斷標(biāo)準(zhǔn)：(1)陰性直接報(bào)陰性。(2)陽(yáng)性結(jié)果，取出1 mL培養(yǎng)液放入無(wú)菌EP管內(nèi)，在離心機(jī)上(15 000 r/min)離心2 min，棄上清液；加入1 mL注射用水混勻，15 000 r/min離心機(jī)上離心2 min，棄上清液；取沉淀進(jìn)行涂片革蘭染色鏡檢；如果是兩種或兩種以上細(xì)菌形態(tài)直接報(bào)實(shí)際的細(xì)菌形態(tài)及菌落計(jì)數(shù)，如果是單一細(xì)菌形態(tài)，取沉淀物涂在質(zhì)譜儀靶板上，風(fēng)干，加甲酸，風(fēng)干，加基質(zhì)，風(fēng)干，然后上質(zhì)譜儀鑒定。記錄具體細(xì)菌名稱(chēng)和菌落計(jì)數(shù)。所有細(xì)菌在進(jìn)行質(zhì)譜儀鑒定時(shí)均要同時(shí)進(jìn)行質(zhì)控菌株鑒定。

1.2.4質(zhì)控菌株 金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。采用Kolmogorov-Smirnov對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以M(P25～P75)表示，組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1尿培養(yǎng)與HB&L微生物培養(yǎng)儀培養(yǎng)時(shí)間比較 HB&L微生物培養(yǎng)儀培養(yǎng)時(shí)間[3.25(3.25～3.25)h]與尿培養(yǎng)時(shí)間[48.00(48.00～48.00)h]比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2尿培養(yǎng)與HB&L微生物培養(yǎng)儀陽(yáng)性檢出率比較 277例尿液標(biāo)本中，尿培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率(23.47%，65/277)與HB&L微生物培養(yǎng)儀陽(yáng)性檢出率(23.10%，64/277)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.010，P>0.05)。以尿培養(yǎng)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，277例尿液標(biāo)本中，HB&L微生物培養(yǎng)儀的靈敏度為96.92%，特異度為99.53%，準(zhǔn)確度為99.28%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為98.44%，陰性預(yù)測(cè)值為99.06 %，見(jiàn)表1。

表1 尿培養(yǎng)與HB&L微生物培養(yǎng)儀陽(yáng)性檢出結(jié)果比較(n)

2.3UTI患者病原菌分布情況 277例尿液標(biāo)本中，單一菌感染55例，混合菌感染10例，采用HB&L微生物培養(yǎng)儀鑒定菌種的檢出率為90.67%(68/75)，錯(cuò)誤率為1.33%(1/75)，未檢出率為8.00%(6/75)。革蘭陰性菌檢出率為95.65%(44/46)，錯(cuò)誤率為0.00%(0/46)，未檢出率為4.35%(2/46)；革蘭陽(yáng)性菌檢出率為78.57%(11/14)，錯(cuò)誤率為7.14%(1/14)，未檢出率為14.28%(2/14)；真菌檢出率為86.87%(13/15)，錯(cuò)誤率為0.00%(0/15)，未檢出率為13.33%(2/15)。見(jiàn)表2。

表2 UTI陽(yáng)性患者病原菌分布情況

續(xù)表2 UTI陽(yáng)性患者病原菌分布情況

3 討 論

UTI是一種由各種病原體、真菌等侵犯尿路黏膜或組織引起的尿路炎癥疾病，其臨床癥狀為尿頻、尿急、尿痛等。若不及時(shí)治療，則可能引發(fā)糖尿病、尿毒癥及腎衰竭等疾病，甚至可能危及患者生命[8-9]。因此，早期檢測(cè)并及時(shí)治療UTI，對(duì)改善患者病情十分必要。目前，尿常規(guī)檢查是診斷UTI最可靠的方法，其金標(biāo)準(zhǔn)為定量尿培養(yǎng)，但臨床有研究顯示，尿培養(yǎng)耗時(shí)較長(zhǎng)，常超過(guò)2 d，且陽(yáng)性率低[10]。因此，臨床上若出現(xiàn)UTI癥狀時(shí)，醫(yī)生通常會(huì)經(jīng)驗(yàn)性使用抗菌藥物，一方面可能導(dǎo)致抗菌藥物濫用，另一方面也可能導(dǎo)致耐藥性尿路感染菌出現(xiàn)[5]。因此，繼續(xù)尋找快速、準(zhǔn)確的UTI檢測(cè)方法，對(duì)于幫助醫(yī)生快速排除UTI及根據(jù)檢測(cè)結(jié)果合理用藥十分必要。

HB&L微生物培養(yǎng)儀是一種快速、自動(dòng)化的尿液和生物樣品細(xì)菌篩查儀器，使用光散射技術(shù)檢測(cè)細(xì)菌生長(zhǎng)。有研究表明，尿液快速篩查系統(tǒng)中用于增菌的HB&L體液培養(yǎng)基適合于所有人體體液培養(yǎng)及血培養(yǎng)，并且能夠培養(yǎng)較難培養(yǎng)的細(xì)菌[11]。FONTANA等[12]研究表明，采用HB&L UROQUATTROTM系統(tǒng)可以明顯縮短診斷時(shí)間?？稍? h內(nèi)得出血流感染的陰性診斷，并可在22～28 h內(nèi)得出陽(yáng)性診斷，明顯提高血流感染的診斷率。本研究結(jié)果顯示，HB&L微生物培養(yǎng)儀檢測(cè)時(shí)間明顯短于尿培養(yǎng)，提示HB&L微生物培養(yǎng)儀能夠有效縮短培養(yǎng)時(shí)間。

PICCINELLI等[13]對(duì)血液透析用水和胃腸道內(nèi)窺鏡進(jìn)行微生物檢測(cè)，結(jié)果表明，HB<M系統(tǒng)具有較高的特異性，且使用傳統(tǒng)培養(yǎng)方法從陽(yáng)性培養(yǎng)物中鑒定出的分離株與通過(guò)Uro4 HB<M系統(tǒng)鑒定出的分離株相同。CAMPOSAMPIERO等[14]研究表明，HB&L微生物培養(yǎng)儀檢測(cè)眼角膜保存液中微生物的靈敏度為95.5%，特異度為99.8%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為90.1%，陰性預(yù)測(cè)值為99.9%。本研究結(jié)果顯示，277例患者尿液標(biāo)本中尿培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率(23.47%)與HB&L微生物培養(yǎng)儀陽(yáng)性檢出率(23.10%)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且HB&L微生物培養(yǎng)儀檢測(cè)UTI的靈敏度為96.92%，特異度為99.53%，準(zhǔn)確度為99.28%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為98.44%，陰性預(yù)測(cè)值為99.06%，與CAMPOSAMPIERO等[14]研究結(jié)果大致相同。由此提示HB&L微生物培養(yǎng)儀對(duì)于診斷UTI具有重要應(yīng)用價(jià)值。

本研究進(jìn)一步分析菌種鑒定情況，結(jié)果顯示，277例尿液標(biāo)本中，單一菌感染55例，混合菌感染10例，HB&L微生物培養(yǎng)儀可能對(duì)于混合菌檢測(cè)的準(zhǔn)確度較低。ALTUN等[15]通過(guò)分析FilmArray血培養(yǎng)在無(wú)菌體液中快速鑒定微生物的臨床表現(xiàn)，結(jié)果表明，單一微生物標(biāo)本準(zhǔn)確鑒定率為100%(84/84)，多微生物樣品準(zhǔn)確鑒定率為75%(18/24)。由此提示采用HB&L增菌技術(shù)培養(yǎng)后，可能受不同菌株生長(zhǎng)情況的影響，存在部分弱勢(shì)菌株，在短期增菌后菌株生長(zhǎng)量未達(dá)到質(zhì)譜檢測(cè)的最低檢出限，使部分菌株未被檢測(cè)出。本研究結(jié)果顯示，采用HB&L增菌后質(zhì)譜鑒定菌種的總體檢出率為90.67%(68/75)，提示HB&L微生物培養(yǎng)儀結(jié)果的總體檢出率較高，可以作為一種快速、準(zhǔn)確診斷UTI的新方法。

綜上所述，HB&L微生物培養(yǎng)儀可大幅度縮短培養(yǎng)時(shí)間，菌株檢出率高，為UTI的診斷和給出合理用藥方案贏得了寶貴時(shí)間。然而，本研究標(biāo)本容量較小，部分菌株數(shù)量較少，檢測(cè)結(jié)果可能存在一定誤差，下一步將擴(kuò)大標(biāo)本容量，并將其與藥敏試驗(yàn)相結(jié)合，進(jìn)行大規(guī)模臨床研究。