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    一株綠針假單胞菌桔黃亞種在防治番茄匍柄霉葉斑病中的應(yīng)用

    2021-02-23 05:33:46黃藝爍謝學(xué)文石延霞柴阿麗李寶聚
    關(guān)鍵詞:抑制率單胞菌防治效果

    黃藝爍,謝學(xué)文,石延霞,柴阿麗,李 磊,李寶聚

    (中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所,北京 100081)

    番茄匍柄霉葉斑病致病菌包括茄匍柄霉Stemphylium solaniWeber和番茄匍柄霉Stemphylium lycopersici(Enjoji)Yamamoto[1],主要危害番茄葉片,嚴(yán)重時(shí)蔓延至莖蔓、果實(shí)。病斑初為褐色小點(diǎn),逐漸擴(kuò)大呈圓形或近圓形,發(fā)病后期易穿孔破裂,造成嚴(yán)重?fù)p失[2]?,F(xiàn)階段該病害的防治措施主要依賴化學(xué)防治,但大量施用化學(xué)農(nóng)藥造成如農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染、菌株抗藥性等問題日益凸顯。近年來,生物防治由于其安全性及高效、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn),已成為研究熱點(diǎn)[3]。

    假單胞菌屬Pseudomonasspp.細(xì)菌廣泛分布于植物根際土壤,可以產(chǎn)生多種具有抑菌作用的次生代謝物,包括吩嗪類物質(zhì)、藤黃綠膿菌素(pyoluteorin,Plt)、硝吡咯菌素(pyrrolntrin,Prn)、2,4-DAPG(2,4-diacetylphloroglueinol,Phl)、脂多肽類及其衍生物等,在防治病害中發(fā)揮著重要作用[4]。此外,假單胞菌還可以產(chǎn)生植物激素IAA、嗜鐵素等物質(zhì),促進(jìn)植物的生長(zhǎng)[5],因而受到各國(guó)研究者的關(guān)注,是國(guó)內(nèi)外研究最早、報(bào)道最多的一類生防菌[6]。多年來,有關(guān)假單胞菌屬生物防治的研究多集中在其根際促生作用上[7],而近年來一些學(xué)者用假單胞菌成功防治了小麥[8]、草莓[9]、小白菜[10]和番茄[11]等多種植物的侵染性病害,極大地?cái)U(kuò)展了假單胞菌的應(yīng)用范圍。目前,利用生防假單胞菌防治番茄匍柄霉葉斑病鮮有報(bào)道,本研究采集番茄匍柄霉葉斑病發(fā)病地塊土壤,旨在分離獲得對(duì)番茄匍柄霉具有高效拮抗作用的菌株。

    本文采用稀釋涂布平板法,從四川番茄根際土壤分離篩選到一株具有廣譜拮抗活性的生防細(xì)菌YS05,結(jié)合形態(tài)學(xué)特征、生理生化特性、Biolog測(cè)定和多基因系統(tǒng)發(fā)育樹,明確了其分類地位,初步揭示其生防作用機(jī)理。同時(shí)測(cè)定了該菌株產(chǎn)抗生素能力、揮發(fā)性物質(zhì)抑菌活性及在離體和活體盆栽條件下對(duì)番茄匍柄霉防治效果,為該菌株的進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 供試番茄品種 番茄品種“齊達(dá)利”,購(gòu)于先正達(dá)生物科技(中國(guó))有限公司。

    1.1.2 供試菌株 番茄匍柄霉菌Stemphylium lycopersici(Enjoji)Yamamoto、炭疽菌Colletotrichumspp.、灰葡萄孢菌Botrytis cinerea、多主棒孢菌Corynespora cassiicola、辣椒疫霉菌Phytophthora capsici、立枯絲核菌Rhizoctonia solani、茄病鐮刀菌Fusarinm solani、茄鏈格孢菌Alternaria solani、西瓜殼二孢Ascochyta citrullina、密執(zhí)安棒桿菌密執(zhí)安亞種Clavibacter michiganensissubsp.michiganensis、葡萄土壤桿菌Agrobacterium vitis、丁香假單胞番茄致病變種Pseudomonas syringaepv. tomato,以上菌株均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所分離并保存。

    1.1.3 供試培養(yǎng)基 King′s B培養(yǎng)基:蛋白胨20.0 g,甘油10.0 mL,MgSO4·7H2O 1.5 g,K2HPO41.5 g,蒸餾水1000 mL,pH 7.0±0.2;Nutrient Broth培養(yǎng)基:蛋白胨10.0 g,牛肉粉 3.0 g,NaCl 5 g,蒸餾水1000 mL,pH 7.0±0.2; Potato Dextrose Agar培養(yǎng)基:去皮馬鈴薯200.0 g,葡萄糖20.0 g,瓊脂20.0 g,蒸餾水1000 mL;WA培養(yǎng)基:5 g瓊脂,1000 mL蒸餾水。

    1.1.4 供試藥劑 50%異菌脲可濕性粉劑,江蘇省蘇州富美實(shí)植物保護(hù)劑有限公司生產(chǎn)(登記號(hào):PD20151441);8億芽胞/g蠟質(zhì)芽胞桿菌可濕性粉劑,山東泰諾藥業(yè)有限公司(登記證:PD20094534);80億芽胞/mL地衣芽胞桿菌水劑,廣西金燕子農(nóng)藥有限公司(登記證號(hào):PD20140122);46%氫氧化銅水分散粒劑,美國(guó)杜邦公司(登記證號(hào):PD20110053);33.5%喹啉銅懸浮劑,山東奧勝生物科技有限公司(登記證號(hào):PD20200743);10%多抗霉素可濕性粉劑,山東省德州祥龍生化有限公司(登記證號(hào):PD20100857);50%異菌脲可濕性粉劑,江蘇省蘇州富美實(shí)植物保護(hù)劑有限公司(登記號(hào):PD20151441)。

    1.2 拮抗菌株分離、純化

    采集四川健康番茄植株根際土壤,采用稀釋涂布平板法[12],將土壤樣品進(jìn)行梯度稀釋,取100 μL稀釋濃度為10-4、10-5、10-6的懸浮液涂布于KB固體培養(yǎng)基,28 ℃培養(yǎng)24 h[13]。對(duì)單菌落進(jìn)行劃線純化3~5次,待菌落形態(tài)穩(wěn)定后保存?zhèn)溆肹14]。

    1.3 拮抗菌株的篩選

    采用平板對(duì)峙法測(cè)定上述分離純化細(xì)菌對(duì)番茄匍柄霉的抑制率[15]。在PDA平板中心放置一個(gè)直徑5 mm的番茄匍柄霉菌餅,采用十字交叉法將5 μL OD600為0.8待測(cè)菌株菌懸液滴加距皿中心2.5 cm處,以不加待測(cè)菌株為對(duì)照,28 ℃培養(yǎng)5~7 d,每處理 3次重復(fù)。待空白對(duì)照菌株生長(zhǎng)至平板邊緣進(jìn)行調(diào)查,用抑制率表示[16]。抑制率(%)=(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/對(duì)照菌落直徑×100。

    1.4 菌株YS05的鑒定

    1.4.1 菌株形態(tài)特征觀察及生理生化指標(biāo)測(cè)定 使用滅菌牙簽挑取菌株YS05單菌落接種于KB固體培養(yǎng)基上,28 ℃培養(yǎng)24 h。菌株形態(tài)特征觀察和生理生化指標(biāo)測(cè)定參考《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定書冊(cè)》[17]和《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[18]。

    1.4.2 Biolog測(cè)定 挑取YS05單菌落接種至KB培養(yǎng)基試管斜面上,28 ℃恒溫培養(yǎng)24 h,使用BIOLOG GENⅢ試劑盒(按照試劑盒說明書操作)對(duì)其進(jìn)行唯一碳源利用的測(cè)定。

    1.4.3 菌株YS05多基因系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建 利用TIANGEN細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒,小量提取菌株YS05基因組DNA為模板,選擇16S rDNA、gyrB、rpoB和rpoD等保守基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序[19](表1)。所得PCR產(chǎn)物由北京博邁德生物公司進(jìn)行測(cè)序。使用MEGA 7.0、Sequence Matrix、Seaview4等軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析,構(gòu)建最大似然法系統(tǒng)進(jìn)化樹,分析其分類地位[14]。

    表1 構(gòu)建多基因系統(tǒng)發(fā)育樹引物信息Table 1 Primers of phylogenetic tree

    1.5 菌株YS05抑菌譜測(cè)定

    采用平板對(duì)峙法測(cè)定菌株YS05對(duì)9種病原真菌抑制效果,操作步驟同1.3。采用雙層培養(yǎng)法[21]測(cè)定菌株YS05對(duì)3種病原細(xì)菌抑制效果。將5 μL OD600為0.8的菌株YS05菌懸液接種在KB平板中心,28 ℃培養(yǎng)24 h后用3 mL氯仿熏蒸滅活,使用5 mL含有病原細(xì)菌的WA培養(yǎng)基作為上層。28 ℃培養(yǎng)48 h后測(cè)量抑菌圈直徑,計(jì)算抑菌率,每個(gè)處理 3次重復(fù)。抑制率(%)=(對(duì)照菌落直徑—處理菌落直徑)/對(duì)照菌落直徑×100。

    1.6 菌株YS05生防機(jī)制分析

    1.6.1 蛋白酶的檢測(cè) 在脫脂牛奶培養(yǎng)基中心位置接種5 μL OD600為0.8的菌株YS05菌懸液,28 ℃培養(yǎng)24 h后觀察消解圈。每個(gè)處理3次重復(fù)[22]。

    1.6.2 HCN的檢測(cè) Whatman濾紙剪成5 mm×25 mm的紙條,分別稱取25 mg copper (Ⅱ) ethylacetoacetate和25 mg 4-4’-methylenebis-(N, N-dimethylaniline)溶于10 mL氯仿中,鑷子滅菌后將Whatman濾紙條在上述溶液中完全浸濕,晾干,于9 cm玻璃培養(yǎng)皿中保存?zhèn)溆肹12]。

    1.6.3 抗生素耐受性測(cè)定 測(cè)定菌株YS05對(duì)10種抗生素的耐受性(表2),在15 mL無(wú)菌管中加入3 mL含抗生素KB液體培養(yǎng)基,接種1% OD600為0.8的菌株YS05菌懸液于搖菌管中,設(shè)置未加抗生素空白對(duì)照,搖培24 h,觀察菌株對(duì)抗生素的耐受性,每個(gè)處理3次重復(fù)[23]。

    表2 抗生素溶液配制Table 2 Preparation of antibiotic solution

    1.6.4 菌株YS05抗生素基因特異性引物擴(kuò)增 為分析菌株YS05合成抗生素能力,選擇吩嗪、2,4-DAPG、硝吡咯菌素、藤黃綠膿菌素、2-羥基吩嗪等抗生素合成基因特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增(表3),PCR程序和條件參照相應(yīng)文獻(xiàn)。利用熒光假單胞菌2P24作為對(duì)照,PCR產(chǎn)物測(cè)序驗(yàn)證與抗生素生物合成序列一致性[26]。

    表3 抗生素基因及引物序列信息Table 3 Antibiotic gene and primer sequence information

    1.7 菌株YS05揮發(fā)性物質(zhì)抑菌活性測(cè)定

    取菌株YS05單菌落接種在液體KB培養(yǎng)基中,28 ℃搖培24 h,調(diào)整其OD600為0.8備用。在二分皿中加入PDA培養(yǎng)基,滅菌牙簽蘸取菌株YS05種子液平板一側(cè)劃線,對(duì)應(yīng)一側(cè)加入5 mm病原真菌菌餅,置于28 ℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng),未加生防菌作為對(duì)照[27]。觀察到空白對(duì)照病原菌生長(zhǎng)至平板邊緣處進(jìn)行調(diào)查,測(cè)定病原菌生長(zhǎng)直徑并計(jì)算抑制率,每個(gè)處理重復(fù)3次。抑制率(%)=(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/對(duì)照菌落直徑×100。

    1.8 菌株YS05與6種藥劑對(duì)番茄匍柄霉離體葉片防效測(cè)定

    采用貼菌片法測(cè)定菌株YS05和其他6種藥劑對(duì)番茄匍柄霉離體葉片防效,測(cè)定步驟參照文獻(xiàn)[28],將5 mm真菌菌餅置于番茄葉片正面,28 ℃、光暗交替條件下培養(yǎng)3 d。使用OD600為0.8的菌株YS05菌懸液稀釋100倍后噴霧接種于含真菌菌餅的番茄葉片上,清水作為空白對(duì)照,選擇6種對(duì)照藥劑測(cè)定對(duì)番茄匍柄霉離體防效。每個(gè)處理6個(gè)葉片,3次重復(fù)。處理后7 d調(diào)查發(fā)病情況,計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。按照《農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則》中的病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),病情按病斑面積占葉片比例分級(jí):0級(jí)為 0;1級(jí)為1%~5%;2級(jí)為6%~10%;3級(jí)為11%~25%;4級(jí)為26%~50%;5級(jí)為50%以上[29]。病情指數(shù)=∑(各級(jí)病葉數(shù)×病級(jí)數(shù))/(調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高病級(jí)數(shù))×100,防治效果(%)=(對(duì)照組病情指數(shù)-處理組病情指數(shù))/對(duì)照病情指數(shù)×100。

    1.9 菌株YS05防治番茄匍柄霉活體盆栽防治效果測(cè)定

    采用噴霧接種法將15 mL濃度為1×108cfu/mL的番茄匍柄霉菌懸液接種于5片真葉的番茄幼苗上,于28 ℃下保濕24 h后,將OD600為0.8的菌株YS05菌懸液稀釋100倍后,噴霧接種于處理植株,以50%異菌脲可濕性粉劑和清水作為對(duì)照。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)處理8棵番茄幼苗,病情指數(shù)和防治效果計(jì)算方法參照1.8。

    1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

    采用Excel 2016軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和繪圖,采用SPSS 20軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異性分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 拮抗菌株的分離篩選

    從四川健康番茄根際土壤中共分離獲得236株細(xì)菌,利用平板對(duì)峙法獲得23株對(duì)番茄匍柄霉具有抑制效果的拮抗細(xì)菌,對(duì)其編號(hào)為YS01~YS23。試驗(yàn)結(jié)果表明,23株拮抗細(xì)菌對(duì)番茄匍柄霉具有一定的抑制效果,菌絲生長(zhǎng)被抑制,其中菌株YS05抑制效果最高,抑制率達(dá)68.91%(表4)。

    表4 23株假單胞菌對(duì)番茄匍柄霉拮抗效果測(cè)定Table 4 Inhibition rate of 23 strains of antagonistic bacteria against Stemphylium lycopersici in tomato

    2.2 菌株YS05的鑒定

    菌株YS05在KB平板中正面呈現(xiàn)乳白色,背面為淡黃色,電鏡下觀察菌株形態(tài)為桿狀,鞭毛單個(gè)極生,大小為(0.8~1.1)μm×(1.2~2.7)μm(圖1)。Biolog測(cè)定菌株YS05可利用α-D-葡萄糖、D-甘露糖、D-果糖、D-半乳糖等碳源,不可利用3-Methyl 葡萄糖、肌苷、D-山梨醇、D-甘露醇等碳源。菌株YS05生理生化指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果表明,菌株YS05的耐鹽性、明膠液化、V-P反應(yīng)、淀粉水解和硝酸鹽還原利用等試驗(yàn)結(jié)果與綠針假單胞菌HL5-4和綠針假單胞菌Pa40的反應(yīng)特征一致,初步確定其為綠針假單胞菌屬細(xì)菌(表5)。

    圖1 菌株YS05形態(tài)特征觀察Fig. 1 Observation on morphological of strain YS05

    表5 生理生化特征鑒定結(jié)果Table 5 The physiological and biochemical reaction of bacterial strain YS05

    經(jīng)PCR擴(kuò)增后,得到菌株YS05 16S rDNA、gyrB、rpoB和rpoD基因序列,構(gòu)建YS05多基因系統(tǒng)進(jìn)化樹,該菌株與綠針假單胞菌桔黃亞種模式菌株P(guān). chlororaphissubsp.aurantiacaLMG 21630聚在一個(gè)分支。結(jié)合形態(tài)和生理生化特征,鑒定菌株YS05屬于綠針假單胞菌桔黃亞種(圖2)。

    圖2 菌株YS05基于16S rDNA、gyrB、rpoB和rpoD基因序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig. 2 Phylogenetic tree based on 16S rDNA, gyrB, rpoB and rpoD gene sequences of strain YS05

    2.3 菌株YS05抑菌譜的測(cè)定

    菌株YS05可以有效抑制灰葡萄孢菌、多主棒孢菌、辣椒疫霉、立枯絲核菌、炭疽菌、茄鏈格孢菌和番茄匍柄霉菌等7種真菌抑制率大于50%,對(duì)茄病鐮刀菌和西瓜殼二孢抑制率分別為21.4%和7.73%。菌株YS05對(duì)病原細(xì)菌也有較好的抑制效果,對(duì)丁香假單胞番茄致病變種和葡萄根癌菌抑菌率均在50%以上(表6)。

    表6 菌株YS05對(duì)病原菌的抑菌效果Table 6 The effects of strain YS05 on pathogens

    2.4 菌株YS05生防機(jī)制分析

    菌株YS05在脫脂牛奶培養(yǎng)基中有透明圈產(chǎn)生(圖3A);接種菌株YS05離心管中試紙條變藍(lán)(圖3B),證明其代謝產(chǎn)物中含有蛋白酶和HCN。菌株YS05對(duì)氨芐青霉素、氯霉素、萬(wàn)古霉素、羧芐青霉素、鏈霉素、奇霉素等抗生素耐受,對(duì)卡那霉素、利福平、四環(huán)素、慶大霉素等4種抗生素不耐受??股靥禺愋砸颬CR擴(kuò)增結(jié)果表明,菌株YS05含有編碼合成吩嗪-1-羧基(phenazine-1-carboxilic acid, PCA),硝吡咯菌素(pyrrolnitrin, Pln)基因,未擴(kuò)增出2,4-DAPG(2, 4-diacetylphloroglucinol, DAPG)、藤黃綠膿菌素(pyoluteorin, Plt)和2-羥基吩嗪(2-hydroxylated phenazine, 2-OH-PHZ)基因(圖3C)。

    圖3 菌株YS05生防機(jī)制分析Fig. 3 Analysis of biocontrol mechanism of strain YS05

    2.5 菌株YS05揮發(fā)性物質(zhì)抑菌活性測(cè)定

    測(cè)定菌株YS05揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)病原真菌抑制效果結(jié)果表明,菌株YS05揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)立枯絲核菌和西瓜殼二孢效果較好,抑制率分別為43.95%和49.53%,而對(duì)茄病鐮刀菌抑制率較低為10.43%(表7)。

    表7 菌株YS05揮發(fā)性物質(zhì)抑制效果Table 7 Inhibitory effect of volatile compounds of strain YS05

    2.6 菌株YS05與6種藥劑對(duì)番茄匍柄霉離體葉片防效

    菌株YS05菌懸液和6種藥劑對(duì)番茄匍柄霉離體葉片的防治試驗(yàn)結(jié)果表明,7個(gè)處理的病情指數(shù)均顯著低于清水對(duì)照,菌株YS05菌懸液稀釋100倍液后,對(duì)番茄匍柄霉葉斑病防治效果達(dá)到71.52%,顯著高于其他6種藥劑防治效果(P<0.05)(表8)。

    表8 菌株YS05與6種藥劑對(duì)番茄匍柄霉離體葉片防效Table 8 Control efficiency of YS05 strain against gray leaf spot of tomato

    2.7 菌株YS05防治番茄灰葉斑匍柄霉活體盆栽防治效果

    清水對(duì)照處理接種番茄匍柄霉菌7 d后葉片上出現(xiàn)明顯的病斑,菌株YS05菌懸液稀釋100倍液后,對(duì)番茄匍柄霉葉斑病的防治效果達(dá)到61.27%,顯著高于藥劑對(duì)照50%異菌脲可濕性粉劑處理防效57.68%(P<0.05)(表9)。

    表9 菌株YS05對(duì)番茄匍柄霉盆栽防效測(cè)定Table 9 Control efficiency of strain YS05 against gray leaf spot of tomato by potted test

    3 討論

    本研究從四川健康番茄植株根際土壤中分離到一株對(duì)番茄匍柄霉菌具有良好拮抗效果的生防細(xì)菌YS05,經(jīng)鑒定屬于綠針假單胞菌桔黃亞種。綠針假單胞菌桔黃亞種屬于假單胞菌屬、綠針假單胞菌種細(xì)菌[30],

    據(jù)報(bào)道綠針假單胞菌桔黃亞種對(duì)多種植物病害均有較好的防治效果。Jiao等[12]分離獲得一株綠針假單胞菌桔黃亞種Pa40,可有效控制小麥紋枯病致病菌禾谷絲核菌Rhizoctonia cereali的生長(zhǎng);Rovera等[31]發(fā)現(xiàn)綠針假單胞菌桔黃亞種SR1可有效地抑制大豆炭腐病Macrophomina phaseolina的發(fā)生,并顯著增加大豆莖、根長(zhǎng)度及莖和根的干重;Hu等[32]從小麥田中分離獲得一株可高產(chǎn)PCN的菌株P(guān)cho10,可防治小麥赤霉病Fusarium graminearum。本研究發(fā)現(xiàn),菌株YS05對(duì)9種病原真菌和3種病原細(xì)菌在離體條件下均有抑制效果,已報(bào)道綠針假單胞菌常用于防治真菌性病害,鮮有對(duì)細(xì)菌性病害具有防治效果,因此該生防菌具有一定的開發(fā)潛力。

    生防菌防治植物病害主要的作用機(jī)理為抗生作用、營(yíng)養(yǎng)和位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)及誘導(dǎo)植物抗性等[33]。不同的菌株產(chǎn)生的抗生素的種類和數(shù)量可能會(huì)不同,因此不同的假單胞菌對(duì)不同的病原菌具有抑制活性,且抑制程度也不相同[34]。綠針假單胞菌Pa40含有編碼參與吩嗪-1-羧酸、2-羥基吩嗪和硝吡咯菌素等合成基因[12];菌株2P24和CPF-10中均可擴(kuò)增到抗生素2,4-DAPG[12];假單胞菌M18可分泌吩嗪-1-羧酸PCA,有效抑制黃瓜枯萎病菌及多種植物病原菌菌絲的生長(zhǎng)[35]。本研究中菌株YS05擴(kuò)增到含有編碼吩嗪-1-羧酸和硝吡咯菌素等合成基因,結(jié)合菌株全基因組測(cè)序結(jié)果,使用antismash比對(duì)發(fā)現(xiàn)該菌株有18個(gè)次生代謝物合成基因簇(數(shù)據(jù)未發(fā)表),從基因?qū)用嫔辖忉屃嗽摼昕捎行б种贫喾N病原菌的原因。

    目前,微生物揮發(fā)性物質(zhì)的研究仍處于發(fā)展階段,郭潔心等[36]利用平板對(duì)扣法測(cè)定解淀粉芽胞桿菌XJ5揮發(fā)性化合物可有效抑制蘋果褐腐病菌Monilinia fructigena等多種病原菌病斑擴(kuò)展和菌絲生長(zhǎng);楊藝煒等[37]從土壤樣品中篩選出一株綠針假單胞菌 XF10,其揮發(fā)性代謝產(chǎn)物可有效抑制煙草黑脛病菌菌絲的生長(zhǎng);馮福山等[38]測(cè)定枯草芽胞桿菌4種揮發(fā)性化合物對(duì)油茶病原真菌均具有較好的抑菌活性,抑菌活性壬醛>苯甲醛>3-甲基-4-苯基吡唑>苯丙噻唑。本研究采用二分皿法測(cè)定了綠針假單胞菌桔黃亞種 YS05揮發(fā)性物質(zhì)對(duì) 8種病原菌的抑制效果,均具有一定的抑制效果,后續(xù)將采用頂空固相微小萃取技術(shù)(HS-SPME)和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)對(duì)其揮發(fā)性物質(zhì)成分進(jìn)行分析,為該菌株的開發(fā)提供理論依據(jù)。

    番茄匍柄霉葉斑病由于其發(fā)病機(jī)制和宿主抗病機(jī)理不明確[39],缺乏抗性基因和有效的化學(xué)防治措施[40],給農(nóng)戶造成了嚴(yán)重的損失。生物防治由于綠色無(wú)污染、持效期長(zhǎng)等特點(diǎn)而被廣泛接受。李新宇等[15]測(cè)定枯草芽胞桿菌ZF161對(duì)番茄匍柄霉葉斑病盆栽防效達(dá)63.27%,本研究通過番茄離體葉片和活體盆栽試驗(yàn)測(cè)定綠針假單胞菌YS05對(duì)番茄匍柄霉葉斑病防治效果分別達(dá)到71.52%和58.27%,其中離體葉片防效均高于對(duì)照藥劑,表明其具有良好的生防潛力。

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