非小細(xì)胞肺癌患者外周血單個核細(xì)胞中CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平及其對化療療效及預(yù)后影響

孫 璐， 劉晶晶, 賈敬好, 王 巍, 姚學(xué)敏, 么偉楠

唐山市人民醫(yī)院1.腫瘤內(nèi)科；2.腫瘤放化科，河北 唐山 063000

肺癌是臨床常見的嚴(yán)重惡性腫瘤，是導(dǎo)致我國城市人口死亡的首位惡性腫瘤[1]。有研究報道，肺癌患者中約95%為非小細(xì)胞肺癌，一般情況下非小細(xì)胞肺癌患者無明顯臨床癥狀，隨著患者病情進(jìn)展可伴隨出現(xiàn)血痰、胸腹脹痛、咳嗽、低熱、體質(zhì)量減輕、疲乏、呼吸困難、食欲減退、咯血等臨床癥狀，在出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀后已發(fā)展至中晚期，5年存活率較低[2]?，F(xiàn)階段臨床治療多采用化療方案對非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行治療，治療后多選擇影像學(xué)檢查并依照實(shí)體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)評估臨床療效[3]。尋找可評估非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后質(zhì)量和化療方案治療效果的生物標(biāo)志物具有重要意義。有研究報道，免疫系統(tǒng)在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起到重要作用，通過評估患者免疫細(xì)胞的變化可有效反映非小細(xì)胞肺癌患者治療的臨床療效[4]。本研究分析非小細(xì)胞肺癌患者外周血單個核細(xì)胞中CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平，探討其與化療療效和預(yù)后質(zhì)量的相關(guān)性。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2017年1月至2018年4月唐山市人民醫(yī)院收治的60例非小細(xì)胞肺癌患者為觀察組，并根據(jù)患者治療后臨床療效分為緩解組(n=33)與未緩解組(n=27)；選取同期進(jìn)行體檢的50例健康者為健康組。非小細(xì)胞肺癌患者納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)既往未接受其他抗腫瘤方案治療；(2)經(jīng)病理學(xué)檢查確診為非小細(xì)胞肺癌；(3)溝通和理解力正常，可配合本研究治療；(4)無法或放棄接受手術(shù)治療。非小細(xì)胞肺癌患者排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床資料不全；(2)由于不良反應(yīng)或其他因素退出本研究；(3)未遵醫(yī)囑用藥；(4)病理診斷不明確；(5)入院時合并自身免疫性疾病或全身感染性疾??；(6)失訪或主動申請退出本研究。觀察組患者男性49例，女性11例；年齡49～75歲，平均年齡(63.19±5.38)歲；吸煙43例。健康組患者男性42例，女性8例；年齡45～76歲，平均年齡(64.87±7.12)歲；吸煙35例。健康組與觀察組性別、年齡、吸煙情況比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。緩解組患者男性27例，女性6例；年齡49～74歲，平均年齡(63.22±5.35)歲；TNM分期Ⅰ期10例，Ⅱ期13例，Ⅲ期8例，Ⅳ期2例；局限期15例,廣泛期18例。未緩解組患者男性22例，女性5例；年齡49～75歲，平均年齡(63.11±5.43)歲；TNM分期Ⅰ期8例，Ⅱ期11例，Ⅲ期7例，Ⅳ期1例；局限期13例,廣泛期14例。緩解組與未緩解組患者性別、年齡、腫瘤分期等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，研究對象均簽署知情同意書。

1.2 治療方法 非小細(xì)胞肺癌患者均采用紫杉醇+順鉑化療方案進(jìn)行干預(yù)治療?；煹?天給予紫杉醇135～175 mg/m2+500 ml葡萄糖靜脈滴注；給予70～80 mg/m2順鉑+3 000 ml生理鹽水靜脈分3 d滴注。1個月為1療程，持續(xù)性干預(yù)治療2個療程。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察組分別于治療前、后采用流式細(xì)胞術(shù)法檢測外周血單個核細(xì)胞中CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平；健康組體檢當(dāng)天采用流式細(xì)胞術(shù)法檢測上述指標(biāo)?？贵w均購買自美國BD公司，嚴(yán)格遵照試劑盒說明書和流式細(xì)胞儀操作規(guī)程進(jìn)行檢測。治療結(jié)束后，對觀察組患者臨床療效進(jìn)行評估。完全緩解：腫瘤病灶完全消失，且維持4周以上；部分緩解：腫瘤病灶區(qū)縮小50%以上，且維持4周以上；疾病穩(wěn)定：腫瘤病灶為達(dá)到完全緩解或部分緩解標(biāo)準(zhǔn)，且非目標(biāo)病灶無進(jìn)展；疾病進(jìn)展：腫瘤病灶增加或出現(xiàn)新的病灶。其中，完全緩解和部分緩解定義為緩解；疾病穩(wěn)定和疾病進(jìn)展定義為未緩解。測定觀察組患者CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平，以CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞在CD4+T細(xì)胞中的百分比表示[5-6]，分析其對患者預(yù)后的影響。對患者隨訪并統(tǒng)計患者存活情況，以觀察組患者CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平均值為截斷值[7]，分析不同CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞表達(dá)水平與患者存活率的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 健康組與觀察組治療前CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平比較 觀察組治療前CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平均高于健康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 健康組與觀察組治療前CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平比較

2.2 不同臨床療效非小細(xì)胞肺癌患者CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平比較 未緩解組患者CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平明顯高于緩解組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床療效患者CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平

2.3 CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平對臨床療效影響 CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平是影響非小細(xì)胞肺癌患者臨床療效的獨(dú)立危險因素(P<0.05)。見表3。

表3 CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平對臨床療效影響

2.4 不同CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平患者預(yù)后情況 繪制對數(shù)生存曲線顯示，CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞高表達(dá)患者存活率低于低表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

圖1 非小細(xì)胞肺癌患者存活曲線

3 討論

惡性腫瘤患者體內(nèi)免疫系統(tǒng)多處于異常狀態(tài)，導(dǎo)致腫瘤出現(xiàn)浸潤、生長和轉(zhuǎn)移[8]。有研究報道，我國非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)病率較高，嚴(yán)重威脅患者生命安全[9]。采用化療藥物治療干預(yù)后可有效清除和殺傷腫瘤細(xì)胞，但因化療藥物缺乏特異性，常導(dǎo)致正常細(xì)胞也受到損傷[10]。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是腫瘤細(xì)胞逃避免疫系統(tǒng)監(jiān)控的結(jié)果，免疫系統(tǒng)、腫瘤抗原是影響腫瘤逃避的重要機(jī)制[11]。有研究報道，腫瘤患者體內(nèi)免疫功能多處于抑制狀態(tài)，檢測患者體內(nèi)免疫狀態(tài)是評估患者預(yù)后質(zhì)量和病情的重要指標(biāo)和方案[12]。

細(xì)胞性免疫監(jiān)視功能和免疫應(yīng)答在腫瘤相關(guān)的監(jiān)控和消滅過程中占重要主導(dǎo)地位[13]。T細(xì)胞功能與特異性細(xì)胞免疫密切相關(guān)，自然殺傷細(xì)胞、非特異性細(xì)胞免疫、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等均起到重要作用[14]。有研究報道，自然殺傷細(xì)胞和T細(xì)胞亞群是評估體內(nèi)非特異性和特異性細(xì)胞免疫的關(guān)鍵免疫指標(biāo)，臨床中已廣泛應(yīng)用于腫瘤的預(yù)后判斷和療效評價[15]。腫瘤免疫過程中，細(xì)胞免疫起到重要主導(dǎo)地位，CD8+T細(xì)胞屬于負(fù)向調(diào)節(jié)的抑制性T淋巴細(xì)胞，可介導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡和細(xì)胞裂解，特異性殺傷腫瘤細(xì)胞[16]。有研究報道，腫瘤患者外周血中CD8+T細(xì)胞比例異常升高，在外周血中CD4+T細(xì)胞、CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞比例均呈一定程度下降[17]。腫瘤細(xì)胞可大量合成并分泌免疫抑制因子，降低CD4抗原量，抑制淋巴細(xì)胞增殖分化，CD8+細(xì)胞反應(yīng)性增高，并進(jìn)一步降低CD4+T細(xì)胞數(shù)量，導(dǎo)致CD4+/CD8+T細(xì)胞比例下降。此外，隨著腫瘤患者病情進(jìn)展，其體內(nèi)合成和分泌的抑制性因子量顯著增加，誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞水平增高并阻斷CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是體內(nèi)重要的高異質(zhì)性細(xì)胞，可合成并分泌不同可溶性因子，起到介導(dǎo)免疫抑制作用。一般情況下，腫瘤患者腫瘤局部病灶和外周血中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平多呈現(xiàn)明顯的異常升高狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者不良預(yù)后和腫瘤高負(fù)荷與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞異常升高密切相關(guān)，相較于早期浸潤性乳腺癌，晚期患者體內(nèi)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平明顯升高，并可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)不良預(yù)后[18]。

本研究結(jié)果顯示，觀察組治療前CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平均高于健康組；未緩解組患者CD84+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平明顯高于緩解組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平是影響非小細(xì)胞肺癌患者臨床療效的獨(dú)立危險因素。這說明隨著患者CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平增高，體內(nèi)免疫狀態(tài)可能呈現(xiàn)顯著的受抑制狀態(tài)，患者體內(nèi)免疫抗腫瘤效果明顯減弱，導(dǎo)致臨床療效和預(yù)后較差。本研究也存在一定不足，臨床樣本量較少，且并未對患者進(jìn)行長期隨訪追蹤，有待后續(xù)深入研究探討。

綜上所述，非小細(xì)胞肺癌患者CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平較健康者明顯增高，CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞水平是影響患者臨床療效的獨(dú)立危險因素。