陰虛證動物模型診斷指標及分析

王 賽白 明苗明三

(河南中醫(yī)藥大學,鄭州 450046)

陰虛證即陰液不足,不能制陽的證。 陰液不足,則機體失去濡養(yǎng),臨床表現(xiàn)為口咽干燥,形體消瘦；陰虛不能制陽,陽亢而虛熱內生,臨床則表現(xiàn)為潮熱盜汗,煩躁,兩顴潮紅；陰虛火旺,膀胱化源不足,則見小便短赤且黃,大腸失去濡潤,則見便干,陰虛火旺,則見舌紅少苔,脈細數[1]。 具體癥候涉及到腎陰虛、肺陰虛、脾陰虛、胃陰虛、肝陰虛、心陰虛,涉及陰虛證的西醫(yī)疾病有糖尿病、高血壓、冠心病、中風、乙型肝炎、圍絕經期綜合征、肺癌、骨質疏松等[2]。 現(xiàn)有的陰虛證造模方法既有涉及到西醫(yī)學的給大白鼠采取口服或注射西藥、手術和感染的方法,也有中醫(yī)從證的病因、病機和證候特點出發(fā),采取如破氣溫燥中藥等中醫(yī)病因理論來造模[3],造模方法較多但評價指標卻不盡相同,本文通過總結所有公開報道的陰虛證動物模型的一般觀察狀態(tài)、檢測指標、藥物反證進行總結,為評價陰虛證動物模型提供參考,為建立更統(tǒng)一的評價體系提供思路。

1 腎陰虛

1.1 造模方法

梁汝圣等[4]通過用甲狀腺素片150 mg/kg 配制成10 mg/mL 懸混液灌胃成功制備腎陰虛大鼠,也可以用甲狀腺素加利血平[5]這兩種方法都是通過提高基礎代謝率,從而引發(fā)類似腎陰虛的癥狀屬于病理模型。 戴冰等[6]通過灌胃氫化可的松,段曉紅等[7]通過腹腔注射氫化可的松均可成功復制腎陰虛動物模型。

1.2 一般狀態(tài)觀察

體重下降,體溫上升,毛發(fā)枯槁、無光澤、易脫落,多飲,多食,多尿且黃,大便干結色黑,易怒躁動,拱背,不易抓取。

1.3 檢測指標

現(xiàn)代研究表明腎陰虛與下丘腦-垂體-靶腺軸(腎上腺、甲狀腺) 的功能亢進有關,患者表現(xiàn)為下丘腦CRH、ACTH、TSH 增加, 促進腎上腺皮質釋放糖皮質激素和甲狀腺合成甲狀腺激素,血中糖皮質激素和甲狀腺激素含量增加[14],又因為CRH 及糖皮質激素的大量釋放在下丘腦、垂體、性腺多水平對性腺軸產生抑制作用,從而導致生殖內分泌的紊亂,性激素等相關指標也發(fā)生改變[15]；環(huán)磷酸腺苷、環(huán)磷酸鳥苷的雙向調節(jié)作用作為陰陽學說的基礎,陰虛病人也會表現(xiàn)出環(huán)磷酸腺苷水平顯著升高的現(xiàn)象[16]。 動物實驗檢測指標見表1。

1.4 藥物反證

六味地黃是滋陰補腎之首方,用于治療腎陰虧損,用該藥可使血清中cAMP、ACTH、Cor.含量降低,cGMP、T 含量升高[17]。

2 肺陰虛

2.1 造模方法

肺陰虛造模主要以煙熏+灌服甲狀腺素或者灌服甲狀腺+利血平+SO2熏蒸[18]等復合方法,其原理是先利用甲狀腺素造成陰虛,再以煙熏的方式造成咳嗽,久咳不愈則傷及肺陰。

2.2 一般狀態(tài)觀察

體重減輕、皮毛(光澤差、毛發(fā)凌亂脫落)、行動(煩躁易怒)、呼吸(咳嗽、少痰、哮鳴音、鼻部干燥)、肛溫顯著升高、面溫顯著升高、抓力顯著降低[19]。

2.3 檢測指標

肺陰不足,虛熱內生,虛熱上炎而潮熱顴紅,會出現(xiàn)顴紅耳赤等癥狀,故動物面溫、肛溫升高。 肺熱為肺陰虛的基礎,而熱則為炎癥反應的表現(xiàn)[20],故炎癥因子TNF-α、IL-1 含量顯著升高。 陰虛證表現(xiàn)為交感神經-β 受體-c AMP 系統(tǒng)功能亢奮,患者血漿中cAMP 含量增多, 甲狀腺激素分泌增加,則甲狀腺激素T3、T4 表達水平升高。 cAMP 能激活細胞內的蛋白激酶,使細胞內多種蛋白磷酸化,增強脂肪分解,使TC、TG 水平升高[20-23](見表2)。

2.4 藥物反證

肺陰虛證是津液消耗,肺失濡養(yǎng)而出現(xiàn)的陰津不足,以致肺失清潤,宣肅失職,虛熱內生等臨床表現(xiàn)的統(tǒng)稱。 南沙參、玉竹、麥冬(同屬甘涼歸肺經)通過甘涼入肺從而改善物質代謝異常,其作用機制可能是通過下調肺陰虛模型動物體內過高的甲狀腺激素、環(huán)核苷酸的水平,從而調節(jié)肺陰證引起的體內紊亂,改善肺陰虛證的整體證侯表現(xiàn)[23]。

表1 腎陰虛檢測指標Table 1 Detection of kidney yin deficiency

3 脾陰虛

3.1 造模方法

脾陰虛常采用復合因素造模法,前14 d 通過饑飽不勻,例如：間隔進食或單日喂甘藍,雙日喂豬油(大鼠每只3 mL),加上單日游泳至耐力極限使其疲勞過度造成脾氣虛,后16 d 在脾氣虛基礎上使用耗傷陰液藥,例如：附子、吳茱萸等,制成脾陰虛模型[24]。

3.2 一般狀態(tài)觀察

食量減少、體重減輕、便溏、神態(tài)萎靡、毛色干枯、蜷縮聚堆。

3.3 檢測指標：

脾陰不足,脾主運化功能失司,體內的蛋白質等精微物質不能正常轉輸,大量的蛋白質積于內質網內[27],則相關轉運蛋白和蛋白激酶含量發(fā)生改變。 脾陰虛常與糖尿病、癡呆和消化系統(tǒng)疾病(胃炎、消化不良、厭食、便秘等),根據不同病癥,針對性檢測血糖、腦源性因子和MMC 含量(見表3)。

3.4 藥物反證

四君子湯為補益劑,具有補氣,益氣健脾之功效。 主治脾胃氣虛證,,脾虛動物模型病理學觀察到脾、空腸、回腸粘膜破損、脫落,等現(xiàn)象,經四君子顆粒治療后, 腸組織病理形態(tài)恢復正常,對脾虛證的蛋白質代謝系統(tǒng)有復健作用[28],可使“脾虛證”模型復健,對其有反證效果。

4 胃陰虛

4.1 造模方法

選擇燥熱耗陰中藥草烏連續(xù)灌胃復制胃陰虛癥,每天用燥熱耗陰中藥草烏水煎濃縮煎劑灌胃1次, 連續(xù)至7 d[36]。

4.2 一般狀態(tài)觀察

躁動不安、小便黃、饑不欲食、大便干燥。

4.3 檢測指標

胃陰虛在臨床上常表現(xiàn)為胃炎相關疾病,胃部有炎癥反應,產生潰瘍,故炎癥相關因子水平升高,出現(xiàn)出血癥狀,紅細胞數量減少體積增大,又因為炎癥細胞侵蝕胃黏膜則粘膜層變薄(見表4)。

表2 肺陰虛檢測指標Table 2 Detection index of lung yin deficiency

表3 脾陰虛檢測指標Table 3 Detection index of spleen yin deficiency

4.4 藥物反證

胃陰虛者,養(yǎng)陰生津降逆,宜清補,如麥冬、沙參、杏仁、白芍、石斛、茯神、粳米、麻仁、白扁豆等。 已有研究證明沙參麥冬湯可改善患者血氣指標(對照檢測指標中的紅細胞計數與紅細胞體積)[36]。

5 肝陰虛

5.1 造模方法

在四氯化碳誘導大鼠慢性肝損傷的基礎上,結合溫熱中藥灌胃制作大鼠肝陰虛證動物模型,也有研究結合長期激怒法制造肝腎陰虛動物模型[32],所造模型更接近臨床人為影響因素較少。

5.2 一般狀態(tài)觀察

形體消瘦、身熱、飲水增多、飲食減少、大便干硬、小便黃(反應精液損傷情況)、毛發(fā)干枯、煩躁易怒、行動遲緩、反應遲鈍、舌紅少津。

5.3 檢測指標：

肝陰虛患者腎素-血管緊張素系統(tǒng)功能增強,故醛固酮含量升高[37],李莉等[36]研究結果表明肝陰虛患者存在TXB2 水平顯著增高,6-Keto-PGF1α水平顯著降低,在動物實驗中仍有體現(xiàn)(見表5)。

5.4 藥物反證

采用滋補肝腎中藥,能減輕肝組織的炎癥程度(IL-6、IL-10、TNF-α 水平降低)和纖維化程度,對于陰虛證相關的表征有一定的改善作用[44]。

表4 胃陰虛檢測指標Table 4 Detection index of stomach yin deficiency

表5 肝陰虛檢測指標Table 5 Detection index of liver yin deficiency

6 討論

動物模型是動物實驗的基礎,隨著中醫(yī)藥研究的發(fā)展,中醫(yī)癥候動物模型的制備越來越受關注,如何判定造模成功與否也成為了大家思考的問題,通過查閱現(xiàn)有陰虛證動物實驗的文獻發(fā)現(xiàn)：陰虛證動物模型的一般狀態(tài)主要包括體征和狀態(tài),這在模型評價中是很重要的一部分,動物的表現(xiàn)往往與中醫(yī)臨床所對應,例如：動物體重減輕相當于患者形體消瘦,爪和尾的顏色(紅色程度)相當于患者五心煩熱,飲水量與大小便情況反映出津液損傷等。 動物的表觀指征與人的中醫(yī)癥的表現(xiàn)相對應,為判斷造模是否成功提供重要依據。 但也存在各臟腑的表現(xiàn)區(qū)別不大,特異性不明顯的缺點,應根據不同病癥部位再深入挖掘研究[49]。

在檢測指標中,環(huán)核苷酸參與調節(jié)不同的生化代謝和生理功能,且在病理反應過程中也起介導作用,對細胞功能處于穩(wěn)定狀態(tài)具有雙向控制調節(jié)作用[50],有研究證明陰虛時血漿cAMP 升高,cAMP/cGMP 比值無明顯變化,臨床上患者也出現(xiàn)這種現(xiàn)象[51],這一指標常用來作為判定是否陰虛的依據,但也有實驗證明脾陰虛、肝陰虛時血漿cAMP 含量下降,故單用這一指標證明脾陰虛、肝陰虛是否造模成功是存在爭議的,而腎陰虛和肺陰虛相關研究血漿cAMP 均為升高,除此之外,腎陰虛、肺陰虛模型血清T3、T4 也均為升高與兩種疾病都能引起甲狀腺功能亢奮相一致。 肺陰虛、脾陰虛、肝陰虛都檢測了炎癥因子的含量,結果均為升高,與臨床三種疾病都伴有炎癥反應相一致。 檢測指標應根據不同的臟腑或其相聯(lián)系部位檢測相關指標的變化從而反應病理變化,例如臨床上腎陰虛與下丘腦-垂體-靶腺軸的功能亢進有關,反應在動物實驗中也會出現(xiàn)甲狀腺、腎上腺指標的改變；肺陰虛常伴隨炎癥反應,肺陰虛動物模型中炎癥因子表達水平也會出現(xiàn)升高；中醫(yī)上脾主運化,臨床上脾陰虛患者體內的蛋白質等物質不能正常轉運,大量的蛋白質積于內質網內,實驗中脾陰虛動物也會伴隨相關轉運蛋白和蛋白激酶含量發(fā)生改變；胃陰虛患者在西醫(yī)臨床上常表現(xiàn)為胃炎、胃潰瘍等,在胃陰虛實驗中,動物胃部也會出現(xiàn)潰瘍和炎癥反應與臨床相對應；肝陰虛患者腎素-血管緊張素系統(tǒng)功能增強,醛固酮增多,肝陰虛動物模型也會出現(xiàn)這種癥狀。心陰虛的研究較少本文并沒有進行總結,日后有待加強相關研究。 本文針對每種虛證總結有效治療藥物,通過藥物反證,觀察表征是否得到改善,檢測指標是否回歸正常,也可以在一定程度上判斷造模成功與否,為評價動物模型提供新的思路。

由于造模后疾病會自然演化和環(huán)境因素的影響,可能出現(xiàn)兩種或者兩種以上證候交疊或前后出現(xiàn)的情況,導致癥候區(qū)分不明確,在指標檢測中,不同臟腑的虛癥沒有明確的某一指標作為依據來判斷造模成功,所以建立各個證型的動物宏觀表現(xiàn)和客觀的理化指標公認評價標準是迫切之需[52]。