基于Rho/Rho-kinase 信號(hào)通路探討丙泊酚減輕大鼠腦缺血再灌注損傷的效果

鄧 莉趙延禮何宗釗司立寧呂志堅(jiān)

(1.青海大學(xué)附屬醫(yī)院麻醉科, 西寧 810001； 2.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部, 西寧 810001；3.青海省人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科, 西寧 810007； 4.青海大學(xué)附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科, 西寧 810001)

缺血性中風(fēng)是導(dǎo)致全球成人死亡和獲得性殘疾的主要因素之一。 目前,大約有1500 萬(wàn)中風(fēng)患者,每年因此造成500 萬(wàn)人死亡[1-2]。 腦缺血/再灌注損傷的發(fā)生主要有如下幾種機(jī)制,包括興奮性毒性,炎癥,神經(jīng)元凋亡和腦水腫。 此外,眾所周知,急性炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡在由腦再灌注損傷產(chǎn)生的神經(jīng)元細(xì)胞的繼發(fā)性損傷中起關(guān)鍵作用[3]。 Rho是小分子GTPase 超家族的一部分,在多種細(xì)胞過(guò)程中起關(guān)鍵作用,包括基因轉(zhuǎn)錄,細(xì)胞遷移,運(yùn)動(dòng),凋亡,神經(jīng)再生和細(xì)胞形態(tài),并能夠通過(guò)磷酸化調(diào)節(jié)細(xì)胞肌動(dòng)蛋白的重組Rho 激酶(Rho-kinase),Rhokinase 是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,Rho-kinase激活并調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能,包括形態(tài),粘附,運(yùn)動(dòng)性和增殖。 研究結(jié)果表明,Rho-kinase 被抑制后,可減少神經(jīng)元的炎癥和細(xì)胞凋亡,并在腦缺血/再灌注中維持神經(jīng)功能[4],抑制Rho 激酶可以保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受內(nèi)皮素1 誘導(dǎo)的缺血性損傷[5]。 丙泊酚為烷基酸類的短效靜脈麻醉藥。 靜脈注射后迅速分布于全身,40 s 內(nèi)可產(chǎn)生睡眠狀態(tài),進(jìn)入麻醉迅速、平穩(wěn)。 丙泊酚的鎮(zhèn)痛效應(yīng)較弱,可使顱內(nèi)壓降低、腦耗氧量及腦血流量減少。 對(duì)呼吸系統(tǒng)有抑制作用,可出現(xiàn)暫時(shí)性呼吸停止；對(duì)循環(huán)系統(tǒng)也有抑制作用,可出現(xiàn)血壓降低。 先前的研究表明[6],丙泊酚在體內(nèi)對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷(MIRI)發(fā)揮了有益的作用；丙泊酚對(duì)MIRI 大鼠模型的保護(hù)作用涉及抗氧化和抗炎癥過(guò)程[7]。 本研究擬基于Rho/Rho-kinase 信號(hào)通路探討丙泊酚減輕大鼠腦缺血再灌注損傷的效果,為腦缺血再灌注損傷的治療提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)SD(Sprague Dawley)大鼠100 只,年齡6周；體重225 ～243 g,雌雄各半；青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供并飼養(yǎng)[SCXK(青) 2018-0013][SYXK(青) 2017-0014],本研究經(jīng)青海大學(xué)附屬醫(yī)院科研倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(20180815),大鼠飼養(yǎng)環(huán)境為：22℃～24℃；50%～55%；12 h 黑暗/光照循環(huán)。實(shí)驗(yàn)研究過(guò)程中嚴(yán)格遵循3R 原則。

1.2 主要試劑與儀器

戊巴比妥鈉(30 mg/kg； H31020240,上海新亞洲制藥有限公司,中國(guó) 上海)；TRIzol(sigma 美國(guó),56262)；RNeasy Mini Kit(TaKaRa,中國(guó),2544)；RIPA 緩沖液(Santa Cruz,USA,52547)；BCA 試劑盒(賽默飛世,美國(guó),20147)；12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE,sigma,45955)；聚偏二氟乙烯(PVDF,sigma,854175)；牛血清白蛋白(BSA, 碧 云 天 科 技, 410254)； 兔 抗 大 鼠 Rho(ab54835；1 ∶1000； Abcam,Cambridge,MA,USA)；Rho-kinase(ab45171,1 ∶2000； Abcam,Cambridge,MA,USA)；β-actin 單克隆抗體(ab134181；1 ∶1000；Abcam,Cambridge,MA,USA)；山羊抗兔二抗(C86 SSA004；1 ∶1000,上海Canspec 科技有限公司,中國(guó)上海)；NanoDrop2000c 分光光度計(jì)(美國(guó)塞默飛世)；Applied Biosystems 7500(美國(guó)通用)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組

根據(jù)體重隨機(jī)分成5 組：對(duì)照組、模型組、丙泊酚低劑量組(20.0 mg/kg)、丙泊酚中劑量組(40.0 mg/kg)、丙泊酚高劑量組(80.0 mg/kg)、每組20只,雌雄各半。 前期預(yù)實(shí)驗(yàn)求出丙泊酚對(duì)腦缺血再灌注大鼠LC50為160 mg/kg,以1/2 LC50為高劑量,2倍間距求出中、低劑量。

1.3.2 各實(shí)驗(yàn)組的制備及神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分

模型組、丙泊酚各劑量組通過(guò)腹膜內(nèi)注射用3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠,并固定頭和四肢放在不銹鋼手術(shù)臺(tái)上。 刮毛和滅菌后進(jìn)行宮頸正中切口,暴露左頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)后,將尼龍手術(shù)絲插入其中,當(dāng)遠(yuǎn)端遇到阻力時(shí),停止插入,并用根據(jù)Koizumi 方法測(cè)量的插入深度結(jié)扎ICA,閉塞2 h 后,取下線以允許缺血區(qū)域的完全再灌注,然后建立大腦中動(dòng)脈閉塞(MACO)的大鼠模型。 術(shù)后給予20 萬(wàn)U 青霉素肌肉注射,連續(xù)使用3 d。 對(duì)照組除不阻斷大鼠大腦中動(dòng)脈外,其余操作同上。 丙泊酚各劑量各劑量術(shù)后第1 天開(kāi)始腹腔給予相應(yīng)藥物,持續(xù)給予4 周,對(duì)照組和模型組給予等體積生理鹽水。 試驗(yàn)結(jié)束后(第29 天),對(duì)每只大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分。 包括運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)、反射和平衡能力測(cè)試等。 采用以下評(píng)分制度：0 級(jí),無(wú)赤字；1 級(jí),右前爪未能伸展； 2級(jí),向右旋轉(zhuǎn)；3 級(jí),從右到右；4 級(jí),無(wú)法自發(fā)行走,意識(shí)水平降低。

1.3.3 貼紙去除及平衡木行走實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后(第29 天), 依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)大鼠行貼紙去除及平衡木行走實(shí)驗(yàn)[8-9]。 簡(jiǎn)而言之：邊長(zhǎng)為10 mm 的正方形黏性紙粘住大鼠前肢掌面,記錄大鼠去除黏性紙的時(shí)間；大鼠于平衡木上行走,平衡木長(zhǎng)80 cm、寬2.5 cm,距離地面高10 cm 并,記錄大鼠穿越平衡木的時(shí)間。

1.3.4 各組大鼠海馬區(qū)病理結(jié)構(gòu)觀察

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后(第29 天)處死大鼠,獲取海馬組織,對(duì)海馬組織常規(guī)脫水、脫臘,HE 染色觀察病理結(jié)構(gòu)變化。 簡(jiǎn)而言之：(1)二甲苯(Ⅰ)15 min、二甲苯(Ⅱ)15 min、二甲苯：無(wú)水乙醇＝1 ∶1 2 min、100%乙醇(Ⅰ)5 min、100%乙醇(Ⅱ)5 min、80%乙醇5 min、蒸餾水5 min、蘇木精液染色5 min、水洗10 min或流水沖洗5 min、1%鹽酸乙醇30 s、水洗30 s、蒸餾水過(guò)洗5 s、0.5%伊紅液染色1 ～3 min、蒸餾水稍洗30 s、80%乙醇稍洗30 s、95%乙醇(Ⅰ)1 min、95%乙醇(Ⅱ)1 min、無(wú)水乙醇(Ⅰ)3 min、無(wú)水乙醇(Ⅱ)3 min、二甲苯(Ⅰ)3 min、二甲苯(Ⅱ)3 min、中性樹(shù)膠封固。

1.3.5 各組大鼠海馬區(qū)病理評(píng)分

在高倍視野下(×40),每1/10 病變面積計(jì)一個(gè)單位,一個(gè)單位的變性評(píng)為0.2 分,一個(gè)單位的壞死評(píng)為2 分。

1.3.6 大鼠腦組織海馬區(qū)中Rho、 Rho-kinase mRNA 水平的測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束后(第29 天)處死大鼠,獲取腦組織海馬區(qū),TRIzol 提取腦組織海馬區(qū)總RNA。 使用NanoDrop2000c 分光光度計(jì)(A260：A280＞1.8)測(cè)量RNA 的純度和濃度,通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)合溴化乙錠染色評(píng)估RNA 的完整性。 根據(jù)制造商提供的說(shuō)明使用RNeasy Mini Kit 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。 簡(jiǎn)而言之,在42℃下用DNA 酶從1 μg 總RNA 中去除污染的基因組DNA 2。 接下來(lái),將1 μL 包含寡核苷酸(dT)和隨機(jī)引物的逆轉(zhuǎn)錄引物混合物,1 μL 逆轉(zhuǎn)錄酶,4 μL 5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液和4 μL DEPC 處理過(guò)的水添加到上述DNase 處理的RNA 中模板中的總反應(yīng)體積為20 μL。 將反應(yīng)液在37℃孵育15 min,然后在85℃孵育5 s,然后保存在4℃下。 使用Applied Biosystems 7500 檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR。實(shí) 時(shí) PCR 的 引 物 序 列 如 下： Rho： 5′-TACCCTGGGAGACAGAATGAAAAGC-3′(正 向) 和5′-CACCTGTGTTTCTCAGCCCTTCTCT-3′ ( 反 向)；Rho-kinase：5′-ATGACAGGGCTGGAAGTGACC-3′(正向) 和 5′-ACTATGTCCCAGTCAGGGCTCT-3′ ( 反向)； β 肌動(dòng) 蛋 白：5′-CTTAGTTGCGTTACACCCTT TCTTG-3′(正 向) 和5′-CTGTCACCTTCACCGTTCC AGTTT-3'(反向)。 引物由生工科技合成(上海,中國(guó))。 對(duì)于反應(yīng),將1 μL cDNA,12.5 μL 2× SYBR Green I Master Mix,10 pmol 特定正向引物,10 pmol反向引物和0.5 μL ROX II 合并,并用DEPC 處理過(guò)的水加入最終體積為25 μL。 反應(yīng)參數(shù)包括在95℃下孵育30 s,然后在95℃下進(jìn)行40 次循環(huán),每次5 s,然后在60℃下進(jìn)行34 次循環(huán)。 使用2-ΔΔCt方法計(jì)算相對(duì)靶基因定量,其中ΔΔCt ＝[Ct(治療組)靶基因- Ct(治療組)內(nèi)部對(duì)照]-[Ct(對(duì)照組)靶基因-Ct(對(duì)照組)內(nèi)部控制]。 β-肌動(dòng)蛋白用作內(nèi)部對(duì)照。

1.3.7 大鼠腦組織海馬區(qū)中Rho、Rho-kinase 蛋白水平的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后(第29 天)處死大鼠,獲取腦組織海馬區(qū),用預(yù)冷的PBS 洗滌,并在RIPA 緩沖液中裂解,然后使用BCA 試劑盒測(cè)量蛋白質(zhì)濃度。 用12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離25 μg蛋白質(zhì)樣品,并通過(guò)半干電泳轉(zhuǎn)移將其轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜上。 用5%牛血清白蛋白封閉過(guò)夜后,將標(biāo)本與兔抗大鼠Rho,Rho-kinase 和β-actin 單克隆抗體在搖床上于4℃放置2 h。 然后將PVDF 膜與山羊抗兔二抗在搖床上孵育4 h。 隨后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光,并使用Quantity One 軟件進(jìn)行定量分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用單因素方差分析比較,多重比較采用LSD-t檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α 為0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分及海馬組織病理評(píng)分的比較

模型組神經(jīng)功能缺損評(píng)分、雙側(cè)貼紙去除時(shí)間、平衡木過(guò)桿時(shí)間、海馬組織病理評(píng)分明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)；丙泊酚各劑量組神經(jīng)功能缺損評(píng)分、雙側(cè)貼紙去除時(shí)間、平衡木過(guò)桿時(shí)間、海馬組織病理評(píng)分明顯低于模型組(P＜0.05)；且隨著丙泊酚給藥劑量的增加,神經(jīng)功能缺損評(píng)分、雙側(cè)貼紙去除時(shí)間、平衡木過(guò)桿時(shí)間、海馬組織病理評(píng)分逐漸降低,劑量-效應(yīng)關(guān)系明顯(P＜0.05)(見(jiàn)表1)。

2.2 丙泊酚對(duì)各組大鼠海馬結(jié)構(gòu)的影響

圖1 可見(jiàn),對(duì)照組海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞完整,排列緊密；模型組海馬區(qū)神經(jīng)元排列松散,細(xì)胞深染固縮,有片狀壞死,神經(jīng)細(xì)胞間質(zhì)隔離；丙泊酚高劑組神經(jīng)元細(xì)胞趨于正常；丙泊酚中、低劑量組較模型組而言,神經(jīng)細(xì)胞疏松、固縮程度輕,神經(jīng)元細(xì)胞核仁清楚可見(jiàn)。

2.3 各組大鼠腦組織海馬區(qū)Rho、Rho-kinase mRNA 表達(dá)水平的比較

模型組Rho、Rho-kinase mRNA 表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)；丙泊酚各劑量組Rho、Rhokinase mRNA 表達(dá)水平明顯低于模型組(P＜0.05)；且隨著丙泊酚給藥劑量的增加,Rho、Rho-kinase mRNA 表達(dá)水平逐漸降低,劑量-效應(yīng)關(guān)系明顯(P＜0.05)(見(jiàn)表2)。

2.4 各組大鼠腦組織海馬區(qū)Rho、Rho-kinase 蛋白表達(dá)水平的比較

模型組Rho、Rho-kinase 蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)；丙泊酚各劑量組Rho、Rhokinase 蛋白表達(dá)水平明顯低于模型組(P＜0.05)；且隨著丙泊酚給藥劑量的增加,Rho、Rho-kinase 蛋白表達(dá)水平逐漸降低,劑量-效應(yīng)關(guān)系明顯(P＜0.05),見(jiàn)表3 及圖2。

表1 各組大鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分及海馬組織病理評(píng)分的比較(,n ＝20)Table 1 Comparison of neuromotor function score and hippocampal histopathology score of rats in each group

表1 各組大鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分及海馬組織病理評(píng)分的比較(,n ＝20)Table 1 Comparison of neuromotor function score and hippocampal histopathology score of rats in each group

注：與對(duì)照組比較,1)P＜0.05；與模型組比較,2)P＜0.05；與丙泊酚組低劑量比較,3)P＜0.05；與丙泊酚組中劑量比較,4)P＜0.05。Note.Compared with the control group,1)P＜0.05.Compared with the model group, 2)P＜0.05.Compared with the low dose of the propofol group,3)P＜0.05.Compared with the dose in the propofol group, 4)P＜0.05.

組別Groups劑量(mg/kg)Dose神經(jīng)功能缺損評(píng)分(分)Neurological impairment score (points)雙側(cè)貼紙去除時(shí)間(s)Double-sided sticker removal time平衡木過(guò)桿時(shí)間(s)Balance beam crossing time海馬組織病理評(píng)分(分)Hippocampal histopathology score(points)對(duì)照組Control group - 0.00±0.00 26.34±6.87 1.99±0.34 0.00±0.00模型組Model group - 10.66±0.4711) 103.63±25.6511) 16.54±6.8711) 9.96±0.561)丙泊酚組Propofol Group 20 8.14±0.3411)2) 80.76±8.1211)2) 12.30±0.5111)2) 8.65±0.441)2)40 6.23±0.2311)2)3) 51.28±9.8811)2)3) 8.65±0.5111)2)3) 5.98±0.481)2)3)80 5.35±0.1611)2)3)4) 50.32±9.1611)2)3)4) 4.71±0.5011)2)3)4) 3.99±0.391)2)3)4)

圖1 丙泊酚對(duì)各組大鼠海馬結(jié)構(gòu)的影響(HE 染色)A, Control group.B, Model group.C, Propofol group low-dose group.D, Propofol group medium-dose group.E, Propofol group high-dose group.Figure 1 Effect of propofol on the hippocampus structure of each group of rats(HE staining)

表2 各組大鼠腦組織海馬區(qū)Rho、Rho-kinase mRNA表達(dá)水平的比較(n＝20)Table 2 Comparison of Rho and Rho-kinase mRNA expression levels of rats in each group

表3 各組大鼠腦組織海馬區(qū)Rho、Rho-kinase蛋白表達(dá)水平的比較(n＝20)Table 3 Comparison of Rho and Rho-kinase protein expression levels of rats in each group

圖2 各組大鼠腦組織海馬區(qū)Rho、Rho-kinase 蛋白表達(dá)水平的比較Note.A, Control group.B, Model group C, Propofol group low-dose group.D, Propofol group medium-dose group.E, Propofol group high-dose group.Figure 2 Comparison of Rho and Rho-kinase protein expression levels of rats in each group

3 討論

丙泊酚是一種短效的靜脈催眠麻醉劑,可通過(guò)多種機(jī)制為腦缺血再灌注提供保護(hù)。 丙泊酚(2,6-二異丙基苯丙醇)是一種速效,持續(xù)時(shí)間短的靜脈內(nèi)催眠麻醉劑,在腦手術(shù)期間和之后被廣泛使用。異丙酚的化學(xué)結(jié)構(gòu)類似于具有抗氧化特性的α-生育酚(維生素E)的活性核[10]。 本研究結(jié)果顯示；丙泊酚各劑量組神經(jīng)功能缺損評(píng)分、雙側(cè)貼紙去除時(shí)間、平衡木過(guò)桿時(shí)間、海馬組織病理評(píng)分明顯低于模型組。 這說(shuō)明,丙泊酚能減輕大鼠腦缺血再灌注神經(jīng)功能損傷。 根據(jù)先前的研究,炎癥,氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡是腦缺血再灌注損傷有害過(guò)程的三個(gè)主要機(jī)制,被證明是全球第二大常見(jiàn)致死因素,也是成人神經(jīng)系統(tǒng)殘疾的主要原因。 此外,凋亡是腦缺血再灌注損傷的主要原因之一,因此,抑制神經(jīng)元凋亡是治療缺血性中風(fēng)的關(guān)鍵目標(biāo)。 證據(jù)表明凋亡在缺血后神經(jīng)細(xì)胞死亡中起重要作用,這表明抑制凋亡性細(xì)胞死亡的治療性干預(yù)措施可能會(huì)減輕腦缺血再灌注損傷。 近期研究表明[11-12],丙泊酚可抑制神經(jīng)細(xì)胞線粒體細(xì)胞色素c 的釋放,進(jìn)而抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡。 本次研究病理結(jié)果顯示：對(duì)照組海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞完整,排列緊密；模型組海馬區(qū)神經(jīng)元排列松散,細(xì)胞深染固縮,有片狀壞死,神經(jīng)細(xì)胞間質(zhì)隔離；丙泊酚高劑組神經(jīng)元細(xì)胞趨于正常；丙泊酚中、低劑量組較模型組而言,神經(jīng)細(xì)胞疏松、固縮程度輕,神經(jīng)元細(xì)胞核仁清楚可見(jiàn)。 這與上述討論一致。

本研 究 結(jié) 果 顯 示： 模 型 組Rho、 Rho-kinase mRNA 和蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組；丙泊酚各劑量組Rho、Rho-kinase mRNA 和蛋白表達(dá)水平明顯低于模型組；且隨著丙泊酚給藥劑量的增加,Rho、Rho-kinase mRNA 表達(dá)水平逐漸降低,劑量-效應(yīng)關(guān)系明顯。 這說(shuō)明,丙泊酚能抑制Rho、Rho-kinase mRNA 和蛋白表達(dá)水平的表達(dá)進(jìn)而抑制Rho/Rhokinase 信號(hào)通路的激活。 炎癥反應(yīng),神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣超載和細(xì)胞凋亡已被證明是腦I/R 損傷的主要原因。 屬于高度保守的先天免疫受體GTPase 超家族的Rho 可以識(shí)別從死亡/垂死細(xì)胞釋放的外源病原體或與損傷相關(guān)的分子模式(DAMP)。 Rho 是第一個(gè)被表征的哺乳動(dòng)物GTPase,主要在小膠質(zhì)細(xì)胞,星形膠質(zhì)細(xì)胞,神經(jīng)元和內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)。 許多研究表明,Rho 在腦缺血/再灌注的病理過(guò)程中起關(guān)鍵作用,并且在缺血后小鼠腦中Rho 的mRNA 上調(diào)[13-14]。 免疫組織化學(xué)研究表明,在MCAO 小鼠模型中,缺血/再灌注后Rho 陽(yáng)性細(xì)胞從1 h 逐漸增加至22 h。 此外,在缺血/再灌注后,Rho-KO 小鼠的梗死面積和神經(jīng)功能缺損均低于野生型小鼠[15]。 Rho可以激活Rho-kinase 和有絲分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信號(hào)傳導(dǎo)途徑,導(dǎo)致神經(jīng)炎癥反應(yīng)。 c-jun氨基末端激酶(JNK)是Rho-kinase 的主要組成部分,已被證明在腦缺血/灌注損傷后的神經(jīng)元凋亡中起關(guān)鍵作用[16]。 大量證據(jù)表明,Bcl-2 充當(dāng)Rhokinase 的非核底物,并通過(guò)調(diào)節(jié)線粒體膜的通透性在細(xì)胞內(nèi)凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。 Caspase-3是凋亡執(zhí)行過(guò)程中的關(guān)鍵分子,抑制其激活可能在凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)的最后一步起作用并阻止凋亡細(xì)胞的死亡[17-18]。 結(jié)合本次研究結(jié)果,提示對(duì)Rho/Rho-kinase 信號(hào)通路的抑制可能是治療腦缺血再灌注損傷的新方向。

綜上所述,丙泊酚能減輕大鼠腦缺血再灌注神經(jīng)功能損傷；其機(jī)制與丙泊酚能抑制Rho、Rhokinase mRNA 和蛋白的表達(dá)進(jìn)而抑制Rho/Rhokinase 信號(hào)通路的激活有關(guān)。