六君子湯中陳皮對脾虛模型大鼠胃腸道調(diào)節(jié)的藥效學(xué)研究

孫爽 尚爾雨 于新 李影 郭玉巖 楊大宇 呂邵娃

摘要 目的：研究六君子湯中陳皮對脾虛模型大鼠胃腸道調(diào)節(jié)的藥效學(xué)過程，從而明確中藥復(fù)方配伍后的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制，為后期合理用藥提供參考。方法：以脾虛證模型大鼠為研究對象，以胃腸激素水平、CD3細(xì)胞百分率及TFF3mRNA表達(dá)情況為主要指標(biāo)，大鼠體質(zhì)量變化、胃排空率及小腸推進(jìn)率為輔助指標(biāo)，追蹤并鑒定陳皮胃腸動(dòng)力調(diào)節(jié)及胃腸免疫作用的活性成分。結(jié)果：各批次六君子湯可顯著改善脾虛模型大鼠的一般狀態(tài)，對脾虛模型大鼠有促進(jìn)胃排空及小腸推進(jìn)作用，可顯著升高血漿中MTL及血清中GAS的含量，降低血漿中VIP的含量，使小腸黏膜中CD3細(xì)胞百分率明顯升高，TFF3mRNA的表達(dá)情況明顯優(yōu)于造?；謴?fù)組及長期造模組。結(jié)論：含有陳皮的六君子湯可通過調(diào)節(jié)胃腸激素水平從而改善脾虛癥狀引起的胃腸動(dòng)力紊亂，能夠升高免疫細(xì)胞的數(shù)量，增強(qiáng)TFF3mRNA的表達(dá)，可進(jìn)而促進(jìn)受損腸黏膜細(xì)胞的修復(fù)，增強(qiáng)腸黏膜防御能力。

關(guān)鍵詞 六君子湯;陳皮;脾虛;胃腸道調(diào)節(jié);藥效學(xué)

Pharmacodynamics Study of Liujunzi Decoction in Regulating Gastrointestinal Tract of Rats with Spleen Deficiency

SUN Shuang1，SHANG Eryu2，YU Xin1，LI Ying1，GUO Yuyan1，YANG Dayu1，LYU Shaowa1

（1 College of Pharmacy，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China; 2 Fire Control Room，Heilongjiang Forest Protection Institute，Harbin 150040，China）

Abstract Objective：To study the pharmacodynamic process of Liujunzi Decoction in regulating the gastrointestinal tract of rats with spleen deficiency by using dried Citri Reticulatae Pericarpium，so as to clarify the pharmacodynamic material basis and mechanism of action after the compatibility of Chinese medicinals，and to provide references for the rational use of drugs in the later period.Methods：We took spleen-deficiency model rats as the research objects，using gastrointestinal hormone levels，CD3 cell percentage and TFF3mRNA expression as the main indicators，rat body weight change，gastric emptying rate and small intestinal propulsion rate as auxiliary indicators，tracking and identifying Pericarpium Citri Reticulatae′s active ingredient for gastrointestinal motility regulation and gastrointestinal immunity.Results：Each batch of Liujunzi Decoction can significantly improve the general state of spleen-deficiency model rats，promote gastric emptying and small intestine propulsion in spleen-deficiency model rats，significantly increase the content of MTL in plasma and GAS in serum，and reduce plasma The content of VIP in the small intestine significantly increased the percentage of CD3 cells in the small intestinal mucosa，and the expression of TFF3mRNA was significantly better than the model recovery group and the long-term model.Conclusion：Liujunzi Decoction containing Pericarpium Citri Reticulatae can improve the gastrointestinal motility disorder caused by spleen deficiency symptoms by regulating the level of gastrointestinal hormones，increase the number of immune cells，enhance the expression of TFF3 mRNA，and promote the repair of damaged intestinal mucosal cells，and enhance intestinal mucosal defense capabilities.

Keywords Liujunzi Decoction; Pericarpium Citri Reticulatae; Spleen deficiency; Gastrointestinal regulation; Pharmacodynamics

中圖分類號：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.23.017

六君子湯出自《醫(yī)學(xué)正傳》，為四君子湯加陳皮、半夏而成。作為基礎(chǔ)方加味治療脾胃病證，應(yīng)用非常廣泛，如脾胃氣虛兼痰濕證、食少便溏、胸脘痞悶、嘔逆等?，F(xiàn)代臨床常用于慢性胃炎、胃及十二指腸潰瘍等屬脾胃氣虛者[1-4]。但由于受條件限制，迄今為止，對六君子湯進(jìn)行深入的分析和研究很少，其研究仍局限于湯劑藥理作用，對方中藥味在胃腸道調(diào)節(jié)和胃腸道免疫等方面的研究基本上仍是空白[5-6]。因此本實(shí)驗(yàn)中主要觀察六君子湯中陳皮黃酮類成分對脾虛模型大鼠的影響，以大黃所致脾虛大鼠為模型，分別以胃腸激素GAS、MTL、VIP的含量、TFF3mRNA的表達(dá)情況及CD3細(xì)胞百分率為量化指標(biāo)，大鼠體質(zhì)量變化、胃排空率及小腸推進(jìn)率為輔助指標(biāo)對含有不同陳化年份、不同產(chǎn)地陳皮藥材的六君子湯胃腸動(dòng)力調(diào)節(jié)及胃腸免疫的藥效學(xué)進(jìn)行評價(jià)，旨在為“要補(bǔ)氣，先理氣”的組方原則與中醫(yī)思想的傳承提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取無特定病原體（SPF）SD大鼠（青島大潤富城畜牧有限公司，合格證號：NO.11401300029922，許可證號：SCXK（魯）2014-0001）120只，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20）g。動(dòng)物在正式實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)10 d，攝食標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，自由飲水。水每日替換1次。自然光線，動(dòng)物房溫度、濕度分別維持在（21±2）℃、（70±5）%左右。獲得動(dòng)物福利倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號：2019051221）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 六君子湯處方飲片均購于哈爾濱市同仁堂大藥房，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)實(shí)訓(xùn)教研室呂邵娃教授鑒定為正品，標(biāo)本存放于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)室。據(jù)《醫(yī)學(xué)正傳》記載制備六君子湯：取人參12 g、茯苓12 g、炙甘草12 g、陳皮12 g、白術(shù)18 g、法半夏18 g，10倍量水浸泡1.5 h，第1次煎煮60 min，過濾藥液，藥渣再加10倍量水煎煮60 min，合并濾液，濃縮至200%的水煎液（含原生藥量2 g/mL）。枸櫞酸莫沙必利片（山西亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20090158），將藥片研為細(xì)粉，加蒸餾水溶解后配制成1 mg/mL的混懸液。

1.1.3 試劑與儀器 MTL、GAS、VIP試劑盒（Cloud-Clone Corp.公司，美國，批號分別為：CK-E30376R、CK-E90576R、CK-E91096R）;Transcriptor Reverse Transcriptase、FastStart Universal SYBR Green Master、Protector RNase Inhibitor、High pure RNA isolation kit（Roche公司，瑞士，批號：11828665001）;明膠、苯酚紅（天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號：20201120，20200310）;淋巴細(xì)胞分離液（Thermo Fisher公司，美國，批號：88287）;臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司，型號：湘儀H2050R）;流式細(xì)胞儀（BD公司，美國，型號：Accuri C6）;酶標(biāo)儀（Perkin Elmer公司，美國，型號：VICTOR X）;離心機(jī)（Eppendorf公司，德國，型號：5424/5424R）;StepOnePlus型QPCR儀、2990232534型PCR儀（ABI公司，美國）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 將120只大鼠隨機(jī)為空白組、自然恢復(fù)組、長期造模組、莫沙比利組（陽性藥物組）、六君子湯陳皮陰性組、六君子湯陳皮陰性液+不同產(chǎn)地陳皮組（S1-S15組）?？瞻捉M（6只）灌胃給予生理鹽水4 mL/次/d，連續(xù)28 d;其余大鼠灌胃給予100%大黃水煎液（含原生藥量1 g/mL），1 mL/（100 g·次），2次/d，連續(xù)14 d，造成脾虛大鼠模型。

1.2.2 給藥方法

自然恢復(fù)組：于第15天起灌服生理鹽水4 mL，連續(xù)14 d;長期造模組：于第15天起繼續(xù)灌服大黃水煎液，2次/d，連續(xù)14 d;其余各組均在第15天造模成功后灌服藥物，根據(jù)《中藥藥理研究方法學(xué)》，按照動(dòng)物體表面積比率換算等效劑量法計(jì)算大鼠給藥量，六君子湯組大鼠每日灌胃劑量為7.56 g/kg，莫沙比利組大鼠每日灌胃劑量為1.35 mg/kg，連續(xù)用藥14 d。以上各組均自由采食和飲水，定時(shí)記錄動(dòng)物的一般癥狀及體征。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

1.2.3.1 一般狀況觀察 分別于造模及給藥后0 d、4 d、8 d、12 d、14 d、18 d、22 d、26 d、28 d測定每組動(dòng)物體質(zhì)量，記錄各組動(dòng)物生長情況，同時(shí)仔細(xì)觀察動(dòng)物的毛色、進(jìn)食量、行為變化等肉眼可見特征。

1.2.3.2 觀察胃排空及小腸推進(jìn) 末次給藥前禁食12 h，最后一次給藥后2 h每只大鼠用0.04%酚紅溶液（內(nèi)含有10%明膠）2 mL灌胃，20 min后腹腔注射10%水合氯醛溶液麻醉，開腹并取出胃及小腸。以酚紅在小腸中的移行距離與小腸全長的比值作為小腸推進(jìn)率來評價(jià)小腸推進(jìn)速度。

推進(jìn)率=酚紅在小腸中的移行距離/小腸全長

胃排空率=（1-實(shí)測酚紅吸光光度值）/基準(zhǔn)酚紅吸光光度值×100%

1.2.3.3 酶聯(lián)免疫法檢測大鼠血清中GAS、血漿中MTL、VIP含量 取腹主動(dòng)脈血6 mL，其中4 mL置于含10% EDTA-K2的真空采血管中，4 ℃條件下，4 000 r/min，離心半徑6 cm，離心10 min，分離上清即為血漿樣品，于-20 ℃的冰箱中保存待用。另取2 mL血于空試管中，在4 ℃條件下，4 000 r/min，離心半徑6 cm，離心10 min，分離上清即為血清，于-20 ℃的冰箱中保存待用。嚴(yán)格按照各試劑盒測定方法檢測指標(biāo)。

1.2.3.4 CD3細(xì)胞百分率測定 距回盲部5 cm處取回腸組織約20 cm，沿中線剪開腸管，用載玻片刮取腸內(nèi)組織，PBS溶解后用300目細(xì)胞篩網(wǎng)過濾，制成腸組織細(xì)胞懸液，離心，去上清，加PBS混勻后過濾2次，加入3 mL淋巴細(xì)胞分離液，離心，取白色分層，每管中加入細(xì)胞懸液100 μL，然后依次加入CD3-FITC抗體及其同型對照抗體，充分混勻，室溫避光孵育30 min。離心，去上清。4 ℃避光1 h內(nèi)在BD Accuri C6流式細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測，F(xiàn)lowjo 10（IBM，USA）軟件分析數(shù)據(jù)。

1.2.3.5 TFF3mRNA表達(dá)的測定 嚴(yán)格按照Trizol法操作提取樣本總RNA，微量紫外可見分光光度計(jì)測量RNA濃度及純度。見圖1。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。多組間比較采用單因素方差分析及兩樣本均數(shù)比較則采用t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 脾虛模型大鼠一般狀態(tài)的觀察 脾虛大鼠于造模第2、3天起開始泄瀉，多為溏泄，肛周污穢，進(jìn)食量、飲水量減少，第3天開始出現(xiàn)厭食，第5天開始出現(xiàn)明顯成群蜷縮，嗜睡，反應(yīng)遲鈍，活動(dòng)減少，四肢無力，行動(dòng)緩慢，同時(shí)皮毛失去正常潤澤而枯槁，并有毛疏散、豎立的情況。到第8、9天多數(shù)動(dòng)物明顯消瘦，體質(zhì)量減輕。9、10 d后部分動(dòng)物伴有脫肛現(xiàn)象。給藥后，大鼠的溏瀉、掉毛等癥狀得到明顯的改善、除長期造模組外，其他各組大鼠體質(zhì)量明顯上升，見圖2。

2.2 對脾虛證模型大鼠胃排空、小腸移動(dòng)速度的影響

脾虛模型組大鼠胃排空率低于空白對照組，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。S1～S15觀察組、莫沙必利組大鼠的胃排空率均高于長期造模組及造?；謴?fù)組，與這2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。此外，除S3、S12、S14組外，其他觀察組與莫沙必利組及陳皮陰性組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)果提示含有不同陳化年份、產(chǎn)地陳皮的六君子湯能促進(jìn)胃排空，且其效果優(yōu)于陽性藥物莫沙必利。見圖3。

脾虛模型組大鼠小腸推進(jìn)率低于空白對照組，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。S1～S15觀察組、莫沙必利組大鼠的小腸推進(jìn)率均高于長期造模組，與其比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。S5、S14、S15與莫沙必利組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），S2、S7、S8與莫沙必利組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。此外，S1～S3、S7～S8、S14～S15與陳皮陰性組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），S10～S11與陳皮陰性組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖4。

2.3 對脾虛證模型大鼠血漿中MTL、VIP、血清中GAS的影響 脾虛模型組大鼠血清中GAS的含量低于空白對照組，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。S1～S15觀察組、莫沙必利組大鼠的血清中GAS的含量均高于長期造模組，與其比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明15組六君子湯及莫沙必利有顯著的治療作用。S3組與莫沙必利觀察組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明其療效與莫沙必利相近。S1～S6、S8～S14觀察組與陳皮陰性組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而S7和S15與陳皮陰性組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P&gt;0.05）。見圖5。

脾虛模型組大鼠血漿中MTL的含量低于空白對照組，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。各觀察組大鼠血漿中MTL的含量均高于長期造模組，與長期造模組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。S5、S10組與莫沙必利觀察組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。除S7～S9組以外，其他各觀察組療效優(yōu)于陳皮陰性組，與陳皮陰性組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見圖6。

脾虛模型組大鼠血漿中VIP的含量高于空白對照組，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。各觀察組大鼠血漿中VIP的含量均低于長期造模組，與長期造模組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。S15與莫沙必利觀察組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明其療效與莫沙必利相近。S4～S7、S9～S15觀察組與陳皮陰性組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而S1～S3和S8與陳皮陰性組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見圖7。

2.4 CD3細(xì)胞百分率測定結(jié)果 脾虛模型組大鼠腸組織中CD3細(xì)胞百分率低于空白對照組，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。各觀察組大鼠腸組織中CD3細(xì)胞百分率均高于長期造模組，與長期造模組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。S1、S3、S6、S12、S15觀察組與陳皮陰性組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其余觀察組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見圖8。

2.5 TFF3mRNA測定結(jié)果

2.5.1 △△Ct計(jì)算方法 基因的表達(dá)量F=2-△△Ct，F(xiàn)值越大表達(dá)量越高。△△Ct=（待測樣品的目的基因的Ct的平均-待測樣本的看家基因的Ct平均值）-（對照樣品的目的基因的Ct平均值-對照樣本的看家基因的Ct平均值）。

2.5.2 擴(kuò)增圖譜及數(shù)據(jù)分析 擴(kuò)增圖譜見圖9～14。

與空白對照組比較，模型組腸組織中TFF3mRNA的表達(dá)均下降，經(jīng)六君子湯治療后TFF3mRNA的表達(dá)明顯優(yōu)于造?；謴?fù)組及長期造模組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見圖15。

2.6 S1-S15批六君子湯對胃腸動(dòng)力調(diào)節(jié)指標(biāo)的影響 由表1可以看出，以GAS水平評價(jià)六君子湯胃腸動(dòng)力作用效果時(shí)，S5、S7、S10、S14和S15之間效果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.083>0.05）;S1、S4、S10、S12、S14和S15之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.057>0.05）;S1、S4、S10、S12、S13和S14之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.085>0.05）;S2和S11之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.204>0.05）;S3、S6、S8和S9批之間均數(shù)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中，S9作用效果最佳。由表2可以看出，以MTL水平評價(jià)六君子湯胃腸動(dòng)力作用效果時(shí)，S7、S8和S9之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.432>0.05）;S2、S3和S4之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.097>0.05）;S2、S4和S13之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.056>0.05）;S4、S12、S13、S14和S15之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.126>0.05）;S1、S11、S12、S14、S15之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.157>0.05）;S1、S5、S6和S11之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.100>0.05）;S5、S6和S10之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.431>0.05）。由表3可以看出，以VIP水平評價(jià)六君子湯胃腸動(dòng)力作用效果時(shí)，S7、S13、S15與對照組之間均數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.076>0.05）;S7、S12和S13之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.062>0.05）;S1、S4、S5、S6、S9、S10、S11、S12和S14之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.263>0.05）;S1、S2、S4、S5、S6、S9、S10、S11、S14之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.088>0.05）;S1、S2、S4、S6、S8、S9、S10、S11、S14之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.075>0.05）;S1、S2、S3、S6、S8和S10之間效果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.102>0.05）。

2.7 S1～S15批六君子湯對胃腸免疫指標(biāo)的影響由表4可以看出，以CD3細(xì)胞百分率水平評價(jià)六君子湯胃腸免疫作用效果時(shí)，S1～S3、S5～S15之間效果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.082>0.05）;S4和對照組之間效果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.154>0.05），表明S4效果較佳。由表5可以看出，以TFF3mRNA表達(dá)量來評價(jià)六君子湯胃腸免疫作用效果時(shí)，S1、S2、S9、S11、S13和S15之間效果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.091>0.05）;S1、S2、S6、S11、S13和S15之間效果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.052>0.05）;S2、S6、S11和S12之間效果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.059>0.05）;S6、S11、S12和對照組之間效果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.208>0.05）;S3、S4、S5、S7、S8、S10和S14作用效果優(yōu)于對照組。

3 討論

中醫(yī)理論認(rèn)為脾為后天之本，氣血化生之源，消化系統(tǒng)功能障礙是脾虛證的主要特征，同時(shí)內(nèi)分泌、神經(jīng)、血液及免疫系統(tǒng)也會(huì)表現(xiàn)出病理狀態(tài)。脾虛動(dòng)物存在不同程度的胃腸動(dòng)力異常，且可能與脾虛狀態(tài)下胃腸激素分泌紊亂有關(guān)[7-11]。因此，本實(shí)驗(yàn)選用15批含有不同陳化年份、不同產(chǎn)地陳皮藥材的六君子湯為實(shí)驗(yàn)藥物，化學(xué)藥物莫沙必利片為陽性對照藥物，對脾虛模型大鼠進(jìn)行治療，以便進(jìn)一步深入探討六君子湯對胃腸動(dòng)力調(diào)節(jié)及胃腸黏膜免疫作用的影響。通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，含有陳皮的六君子湯可明顯改善胃腸動(dòng)力調(diào)節(jié)作用，但對于具體的作用機(jī)制，還有待進(jìn)一步研究。

胃腸激素是由分布于消化道的內(nèi)分泌細(xì)胞和腸神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元所分泌的起激素作用的生物活性多肽，這些肽類物質(zhì)主要存在于胃腸道中[12-14]。許多胃腸激素對消化道運(yùn)動(dòng)有促進(jìn)和（或）抑制作用，GAS主要能刺激胃蛋白酶及胃酸的分泌，營養(yǎng)胃腸黏膜，促胃腸肌收縮，從而促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)[15-17]。MTL是一種重要的腦腸肽激素，具有促進(jìn)胃排空、調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力的作用，且其對胰腺及膽汁的分泌有抑制作用[18]。VIP具有舒張胃腸平滑肌及括約肌的作用，從而維持正常的胃腸下行蠕動(dòng)功能[19-20]。因此，用GAS、MTL和VIP等胃腸激素指標(biāo)從微觀層面揭示脾虛證的相關(guān)胃腸運(yùn)動(dòng)機(jī)制，可為中醫(yī)臨床有效治療脾虛證提供評價(jià)指標(biāo)和依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，六君子湯可顯著改善脾虛模型大鼠的一般狀態(tài)，升高血漿中MTL、血清中GAS的含量，降低血漿中VIP的含量。表明六君子湯可顯著改善脾虛癥狀引起的胃腸動(dòng)力紊亂，其作用機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)胃腸激素水平來實(shí)現(xiàn)的。

CD3細(xì)胞作為所有T淋巴細(xì)胞的共同標(biāo)志物，在腸黏膜免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著十分重要的作用。而脾虛時(shí)會(huì)造成胃腸黏膜分泌功能紊亂，免疫功能低下，因而胃腸道局部免疫狀態(tài)在脾虛證研究中十分重要。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白對照組比較，脾虛模型大鼠小腸組織中CD3細(xì)胞百分率下降，而S1～S15各觀察組、莫沙必利組、陳皮陰性組CD3細(xì)胞百分率高于模型組。這一結(jié)果表明六君子湯能增加免疫細(xì)胞的數(shù)量，加強(qiáng)腸黏膜的免疫功能。

研究表明，TFF3可以驅(qū)動(dòng)受損黏膜周圍完好的上皮細(xì)胞向黏膜損傷表面遷移覆蓋，加速損傷修復(fù)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)六君子湯治療后各組大鼠腸黏膜中TFF3mRNA的表達(dá)量明顯高于造?；謴?fù)組及長期造模組，提示六君子湯可增強(qiáng)TFF3mRNA的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)受損腸黏膜細(xì)胞的修復(fù)，增強(qiáng)腸黏膜防御能力。

將5個(gè)藥效學(xué)數(shù)據(jù)與SNK結(jié)果相結(jié)合，得到分析如下：對于胃腸激素GAS而言，S9效果較好，S5、S7效果較差;對于胃腸激素MTL而言，S10效果較好，S7、S8效果較差;對于胃腸激素VIP而言，S15、S13效果較好，S3、S8效果較差;對于CD3細(xì)胞百分率而言，S4效果較好，其他批次效果相近;對于TFF3mRNA表達(dá)情況而言，S3效果較好，S9效果較差。對于胃腸動(dòng)力調(diào)節(jié)而言，陳化時(shí)間較短的陳皮加入湯劑中效果較好，陳化5年以上的陳皮作用反而降低;與胃腸動(dòng)力調(diào)節(jié)指標(biāo)相反，對于胃腸免疫指標(biāo)而言，陳化5年以上的陳皮加入湯劑中效果較好，而陳化時(shí)間較短的陳皮效果較差。這一結(jié)果也與聚類分析結(jié)果相一致。

參考文獻(xiàn)

[1]Zou CC，Yan HY.Research progress on chromatographic fingerprint similarity evaluation method for traditional Chinese medicine in the past 30 years（1988-2017）and its prospect[J].Zhongguo Zhong Yao Za Zhi.2018，43（10）：1969-1977.

[2]Xu HY，Zhang YQ，Liu ZM，et al.ETCM：an encyclopaedia of traditional Chinese medicine[J].Nucleic Acids Res，2019，47（D1）：D976-976D982.

[3]Chen X，Wan ZQ，Han GC，et al.Study on efficacy of liujunzi decoction combined with zuojin pills in treating acute radioactive duodenitis and their mechanism[J].Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2014，39（2）：278-284.

[4]Zhang S，Zhao L，Wang H，et al.Efficacy of modified LiuJunZi decoction on functional dyspepsia of spleen-deficiency and qi-stagnation syndrome：a randomized controlled trial[J].BMC Complement Altern Med，2013，13：54.

[5]Ning Dai，Jinghong Hu，Yan Liu，et al.Effects of Xiangsha Liujunzi decoction drug serum on gastric antrum smooth muscle cells from rats with functional dyspepsia by regulating gastrointestinal hormones[J].Journal of Traditional Chinese Medical Sciences，2020，7（1）：45-52.

[6]Yue P，Zhong J，Huang J，et al.The efficacy and safety of Xiangsha Liujunzi decoction in the treatment of chronic non-atrophic gastritis：A protocol for a systematic review and meta-analysis[J].Medicine（Baltimore），2021，100（4）：e24504.

[7]何勁，周莉，陳家旭等.中醫(yī)脾虛證實(shí)質(zhì)研究進(jìn)展[J].吉林中醫(yī)藥，2015，35（1）：103-107.

[8]高曉娟，劉一塵.加味升陽益胃方聯(lián)合莫沙必利對非小細(xì)胞肺癌化療期伴脾虛痰濕型厭食癥患者胃腸激素水平的影響研究[J].中國處方藥，2021，19（2）：120-122.

[9]曹陽.養(yǎng)正合劑聯(lián)合莫沙必利對NSCLC化療期伴脾虛痰濕型厭食癥患者胃腸激素水平的影響[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2021，15（1）：228-230.

[10]馮溢君.脾虛氣滯型功能性消化不良應(yīng)用香砂六君子湯加味效果臨床觀察[J].中醫(yī)臨床研究，2020，12（35）：40-43.

[11]林力森，李國政，符月敏.養(yǎng)胃溫脾湯輔助治療脾胃虛弱型消化性潰瘍患者的療效[J].世界中醫(yī)藥，2020，15（21）：3323-3326.

[12]張仲林，臧志和，鐘玲，等.六君子湯對脾虛證大鼠胃腸激素影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中成藥，2010，32（4）：659-661.

[13]胡靜艷.胃復(fù)春聯(lián)合四聯(lián)療法對慢性萎縮性胃炎患者胃腸激素及免疫功能的影響[J].醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2021，34（6）：956-958.

[14]聶圣娜.小柴胡湯合小陷胸湯輔治慢性胃炎對氧化應(yīng)激及胃腸激素水平的影響[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2021，37（3）：421-423.

[15]譚舒舒，陳海芳，宋玉鵬，等.枳殼及其主要活性成分對脾虛模型大鼠血清胃泌素、血漿乙酰膽堿、胃動(dòng)素、P物質(zhì)和血管活性腸肽的影響[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2017，28（5）：1037-1040.

[16]李月梅，劉衛(wèi)紅.薏苡仁水煎液對脾虛證大鼠胃腸動(dòng)力及激素水平的影響[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2019，34（1）：90-93.

[17]呂暉.小承氣湯聯(lián)合多模式鎮(zhèn)痛護(hù)理對腹部手術(shù)后患者胃腸功能及MOT、GAS的影響[J].光明中醫(yī)，2021，36（4）：646-648.

[18]趙云準(zhǔn)，肖化偉.奧美拉唑?qū)δ苄韵涣蓟颊哐錓L-6、TNF-α、GAS、MTL水平的影響及安全性分析[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與健康研究（連續(xù)型電子期刊），2021，5（2）：30-32.

[19]宋玉鵬，陳海芳，胡源祥，等.陳皮及其主要活性成分對脾虛模型大鼠血清胃泌素、血漿乙酰膽堿、P物質(zhì)、胃動(dòng)素和血管活性腸肽的影響[J].中藥藥理與臨床，2017，33（3）：79-83.

[20]王陽，鮑曉蕾，郎軼箮，等.實(shí)驗(yàn)性腹瀉型腸易激綜合征模型大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞改變對胃腸動(dòng)力及VIP和CGRP水平的影響[J].中國老年學(xué)雜志，2021，41（6）：1293-1296.

（2020-12-21收稿 責(zé)任編輯：吳珊）