泰國斗魚酪氨酸羥化酶基因cDNA的克隆及表達(dá)分析

馬細(xì)蘭，林志遠(yuǎn)，藍(lán)筱敏，肖博怡，崔 語

（惠州學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，廣東 惠州516007）

泰國斗魚（Betta splendens）原產(chǎn)于泰國，屬于脊椎動(dòng)物門，硬骨魚綱，鱸形目，攀鱸亞目，絲足鱸科，斗魚亞科，斗魚屬［1］．其體形多姿、色彩鮮艷，生命力頑強(qiáng)且易飼養(yǎng)，是備受魚類愛好者青睞的觀賞魚品種［2］；此外，泰國斗魚雌雄個(gè)體差異十分明顯，雄性天生好斗，環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)［3］，價(jià)格便宜，適合作為研究魚類好斗性的模型．

當(dāng)前，研究發(fā)現(xiàn)魚類好斗性的分子調(diào)控機(jī)制主要有多巴胺通路、5-羥色胺通路、生長激素抑制素通路、組胺通路、下丘腦-垂體-性腺軸通路、一氧化氮通路、下丘腦-神經(jīng)垂體系統(tǒng)通路、下丘腦-垂體-腎間軸通路［4］．多巴胺（dopamine，DA），是兒茶酚胺的一種衍生物．兒茶酚胺的作用主要是增強(qiáng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)對外周的敏感性，使機(jī)體保持警覺和覺醒的狀態(tài)．有研究表明，兒茶酚胺激動(dòng)劑可以增加動(dòng)物的攻擊性行為［5］．斑馬魚好斗性的研究表明，雄性斑馬魚經(jīng)過鏡像刺激或配對斗爭后，其體內(nèi)的多巴胺通路會被激活，劣勢個(gè)體與鏡像刺激個(gè)體的視頂蓋中多巴胺分泌量增加，優(yōu)勢個(gè)體端腦分泌的多巴胺量也升高［6］．酪氨酸羥化酶（Tyrosine hydroxylase，TH）不僅是催化酪氨酸生成多巴胺的限速酶，也是兒茶酚胺合成過程中參與生成反應(yīng)的第一個(gè)酶，在其生物合成的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，因此，生物體內(nèi)兒茶酚胺的生物合成直接受到酪氨酸羥化酶活性和表達(dá)變化的影響［7］．TH在無脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物中高度保守，并具有多種生物學(xué)功能．TH作為多巴胺生成通路中重要的酶與許多神經(jīng)性疾病的發(fā)生相關(guān)，比如帕金森病、精神分裂癥、多動(dòng)癥、躁郁癥等［8］．斑馬魚經(jīng)過社群互作后，大腦中多巴胺通路某些基因的表達(dá)發(fā)生了顯著變化，進(jìn)而影響體內(nèi)多巴胺的含量［9］．斑馬魚優(yōu)勢個(gè)體下丘腦編碼多巴胺合成酶的基因（tyrosine hydroxylase，th）過量表達(dá)，此結(jié)果與突變體小鼠及哺乳動(dòng)物中的其他研究相同［10-12］．魚類好斗性的生理調(diào)控機(jī)制尚未完全清楚，有待于進(jìn)一步研究及闡明．

本研究以泰國斗魚為研究對象，利用RT-PCR方法，先從泰國斗魚的腦中克隆并鑒定出酪氨酸羥化酶基因th的部分cDNA片段，展開相關(guān)序列的同源性分析，并通過實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測比較打斗前、后或優(yōu)、劣勢個(gè)體th的表達(dá)差異，為深入闡明th在泰國斗魚好斗性行為中的分子調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)．

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)魚

雄性泰國斗魚，大小5～8 cm，購于沃爾瑪和網(wǎng)上商城（原始部落生態(tài)瓶商城和藝仟寵商城）．

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

總RNA試劑提取試劑盒：RNAiso Plus、反轉(zhuǎn)錄試劑盒Prime Script?II 1st Strand cDNA Synthesis Kit、普通PCR試劑盒Premix Taq?（Ex Taq?Version 2.0）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒TB Green?Premix Ex Taq?II（Tli RNaseH Plus），均購于TaKaRa寶生物工程（大連）有限公司.引物由賽默飛世爾科技（中國）有限公司合成．

1.1.3 儀器設(shè)備

凝膠成像分析儀（Gel Doc XR）、超低溫冰箱（中科美菱DW-HL388）；小型臺式冷凍離心機(jī)（德國Eppendorf Centrifuge 5418R）、PCR擴(kuò)增儀（GeneAmp PCR System 9700）、熒光定量PCR儀（applied biosystems by life technologies，QuanStudio7 Flex）．

1．2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 引物的設(shè)計(jì)

在NCBI上查找與泰國斗魚親緣關(guān)系相近的4種魚類：攀鱸（Anabas testudineus）、大刺鰍（Mastacembelus armatus）、美妊麗魚（Astatotilapia calliptera）和眼斑?？~（Amphiprion ocellaris）的thmRNA序列，用ClustalX軟件進(jìn)行同源性分析，并將高度同源區(qū)序列輸入Primer Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)獲得3對簡并性引物，用于cDNA片段克?。@得cDNA片段后再設(shè)計(jì)特異性引物，用于實(shí)時(shí)定量PCR檢測．

1.2.2 總RNA的提取及檢測

Trizol法提取總RNA，步驟簡述如下：用高溫滅菌的剪刀和鑷子取出泰國斗魚的全腦，置于裝有1 mL Trizol溶液的離心管中，用1 mL一次性注射器將腦組織抽打均勻.室溫（15～30℃）放置5 min后，加入0.2 mL氯仿，用力震蕩30 s，室溫放置5 min后，12 000 r/min、4℃離心15 min，吸取上清液0.4 mL至另一新的離心管，加入0.4 mL異丙醇，上下顛倒離心管，室溫靜置10 min后，12 000 r/min、4℃離心10 min，試管底部會出現(xiàn)少量RNA沉淀．小心棄上清液后，加入1 mL 75%乙醇清洗沉淀，洗滌2次．室溫晾干沉淀，加入10～20μL DEPC水溶解RNA沉淀．0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA質(zhì)量，置于-70℃超低溫冰箱保存．

1.2.3 cDNA的合成及檢測

真核生物mRNA的3‘末端存在Poly（A），用Olig dT作為引物，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成與之互補(bǔ)的cDNA．試劑盒為Prime Script?II 1st Strand cDNA Synthesis Kit，具體操作見說明書．獲得cDNA后，進(jìn)行PCR，擴(kuò)增內(nèi)參基因β-actin，電泳檢測其產(chǎn)物，若PCR產(chǎn)物條帶單一、明亮則判斷cDNA質(zhì)量良好，可用于下一步實(shí)驗(yàn)．

1.2.4 泰國斗魚th中間片段的克隆及特異性引物的設(shè)計(jì)

以質(zhì)量良好的cDNA為模板，用表1的3對簡并性引物（TH-F和TH-R）擴(kuò)增th的cDNA片段；將符合預(yù)計(jì)片段大小的PCR產(chǎn)物送檢測序，得到th基因的部分核苷酸序列；最后用Primer Primer 5.0設(shè)計(jì)出特異性引物，用于實(shí)時(shí)定量PCR分析．

表1 引物序列

1.2.5 鏡像斗爭法和配對斗爭法行為學(xué)觀察

通過鏡像斗爭法和配對斗爭法初步研究泰國斗魚打斗的行為學(xué)．鏡像斗爭法：在實(shí)驗(yàn)裝置中放入一面鏡子，以近22°角直立，通過觀察記錄實(shí)驗(yàn)魚撕咬鏡子的次數(shù)或記錄好斗性展示所花費(fèi)的時(shí)間，來判斷個(gè)體好斗性的強(qiáng)弱．配對斗爭法：將2條實(shí)驗(yàn)魚放在同一實(shí)驗(yàn)裝置中相互打斗，觀察記錄其追逐、攻擊、撕咬對手的頻率、強(qiáng)度及打斗分出用勝負(fù)的時(shí)間長短等，并依據(jù)斗爭結(jié)果區(qū)分為優(yōu)勢個(gè)體D和劣勢個(gè)體I．

1.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR對th的表達(dá)進(jìn)行分析

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：隨機(jī)選定5條未進(jìn)行斗爭、體型規(guī)格一致的雄魚設(shè)為未斗爭組（標(biāo)記為B0、B1、B2、B3、B4）；另外隨機(jī)選定體型相近的5條雄魚進(jìn)行鏡像斗爭實(shí)驗(yàn)，斗爭時(shí)間為進(jìn)入斗爭狀態(tài)后15 min（標(biāo)記為M1、M2、M3、M4、M5）；隨機(jī)選定10條體型規(guī)格差不多的雄魚，兩兩配對進(jìn)行斗爭性實(shí)驗(yàn)，打斗時(shí)間定為進(jìn)入斗爭狀態(tài)后至分出優(yōu)劣勢個(gè)體為止（優(yōu)勢個(gè)體標(biāo)記為D1、D2、D3、D4、D5，劣勢個(gè)體標(biāo)記為I1、I2、I3、I4、I5）．

經(jīng)上述斗爭實(shí)驗(yàn)后，分別從斗魚全腦組織中提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄生成cDNA模板待用，以β-actin內(nèi)參基因?yàn)閮?nèi)源性控制品，使用相對定量的方法分析th基因在斗爭前后和優(yōu)劣勢個(gè)體中的表達(dá)差異.

qPCR程序設(shè)定：Hot Stage：95℃1 min；PCR Stage：95℃10 sec，60℃35 sec，40個(gè)循環(huán)；Melt Curve Stage：95℃10 sec，60℃35 sec，95℃10 sec.

1.2.7 數(shù)據(jù)分析

2-ΔΔCt法：利用對照樣品、待檢樣品的目的基因（th）及內(nèi)參基因（β-actin）的Ct值，以內(nèi)參基因的Ct值為內(nèi)源性控制品對目的基因進(jìn)行校正，求得相對表達(dá)量．

最后用SPSS17.0軟件進(jìn)行方差分析.

2 結(jié)果與分析

2．1 泰國斗魚th的cDNA克隆

2.1.1 總RNA的提取

總RNA的電泳結(jié)果如圖1所示，沉降系數(shù)為28 S、18 S和5 S的rRNA條帶清晰分明，表示所提的RNA質(zhì)量較佳，可進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn).

圖1 5條魚總RNA的電泳圖

2.1.2 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA及質(zhì)量檢測

將上述5份總RNA分別反轉(zhuǎn)錄生成cDNA并以其為模板，通過PCR技術(shù)擴(kuò)增內(nèi)參基因β-actin，之后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物（圖2）．各份擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳條帶單一清晰，表明cDNA質(zhì)量良好．

圖2 內(nèi)參基因PCR產(chǎn)物的電泳圖

2.1.3 泰國斗魚th中間片段的擴(kuò)增

選定其中1管cDNA為模板，以表1的3對簡并性引物TH-F1R1、TH-F2R2、TH-F3R3對目的片段進(jìn)行擴(kuò)增，1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果如圖3．第1對引物TH-F1R1擴(kuò)不出目的片段，第2對引物TH-F2R2雖能擴(kuò)出目的片段，但是雜帶較多且不分明；第3對引物TH-F3R3不僅能夠擴(kuò)出預(yù)計(jì)目的片段，雜帶少，且目的片段與雜帶分隔較遠(yuǎn)，易分離純化．從圖3可看出，擴(kuò)增的條帶亮度不夠，下一步將退火溫度由55℃提高至60℃，并對第2對引物TH-F2R2和第3對THF3R3引物進(jìn)行50μL體系的擴(kuò)增，結(jié)果如圖4，條帶更為清晰明亮，可用于DNA純化回收．

圖3 PCR產(chǎn)物電泳圖（退火溫度55度）

圖4 PCR產(chǎn)物電泳圖（退火溫度60度）

2.1.4 泰國斗魚th部分片段測序結(jié)果

經(jīng)比較分析，選定第3對簡并性引物擴(kuò)增的50μL體系的PCR產(chǎn)物送檢測序，得到261 bp核苷酸序列，結(jié)果如下：

TTGCACCTTTGCCCAGTTTTCGCAGAACCTTGGC CTGGCATCTCTCGGGGCCTCGGACGAGGATATTGAG AAACTCTCCACTCTGTACTGGTTCACTGTGGAGTACG GCTTATGCAAACAGAACGGCGAGGTGAAGGCCTATG GCGCTGGGCTGCTCTCCTCCTACGGAGAGCTTGTGTA CTCCCTGTCCGACGAACCGGAGACCAGGGAGTTTGA CCCCGGGGCCGCGGCGGTGCAGCCCTACCAAGACCA GACATACCA

將得到的核苷酸序列輸入NCBI的Blast程序進(jìn)行同源性比對，結(jié)果顯示：測序得到的核苷酸序列與已知的龜殼攀鱸（Anabas testudineus）、大刺鰍（Mastacembelus armatus）、眼斑雙鋸魚（Amphiprion ocellaris）、橙線雀（Acanthochromis polyacanthus）、美國黃金鱸（Perca flavescens）、牙鲆（Paralichthys olivaceus）、革首南極魚（Notothenia coriiceps）、奈（里）氏樸麗魚（Pundamilia nyererei）、青鳉（Oryzias latipes）的th的同源性分別為87.6%、86.87%、86.10%、85.71%、84.56%、84.56%、84.56%、84.17%、83.78%，說明本次克隆的cDNA為泰國斗魚th的部分序列.

2．2 泰國斗魚th中間片段的分析

2.2.1 氨基酸序列分析

將上述測序得到的核苷酸序列輸入DNA Star軟件的Editseq程序當(dāng)中，通過手動(dòng)尋找開放閱讀框并翻譯成如下氨基酸序列：

CTFAQFSQNLGLASLGASDEDIEKLSTLYWFTVEY GLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELVYSLSDEPETREFD PGAAAVQPYQDQTY

該肽段的分子大小為9 447.35道爾頓，等電點(diǎn)3.81，共有86個(gè)氨基酸，包含了4個(gè)堿性氨基酸（K、R），13個(gè)酸性氨基酸（D、E），28個(gè)疏水性氨基酸（A、I、F、W、V）和30個(gè)極性氨基酸（N、C、Q、S、T、Y）．利用NCBI的BLAST程序進(jìn)行氨基酸序列的同源性比對，其與龜殼攀鱸、奈（里）氏樸麗魚、青鳉、牙鲆、眼斑雙鋸魚、橙線雀、美國黃金鱸、大刺鰍、革首南極魚的同源性分別 為：98.82%、96.47%、95.29%、95.29%、95.29%、95.29%、94.12%、94.12%、91.76%，表明魚類th具有高度的同源性．

2.2.2 進(jìn)化樹分析

從NCBI上查找哺乳綱、鳥綱、爬行綱和魚綱中幾種有代表性物種的酪氨酸羥化酶基因的核苷酸序列，轉(zhuǎn)化為MEGA7軟件能夠識別的格式（.txt）并用其與泰國斗魚th的中間片段進(jìn)行同源性比對后建立NJ進(jìn)化樹（圖5）．泰國斗魚（Betta splendens）與哺乳綱的智人（Homo sapiens）、食蟹猴（Macaca fascicularis）、褐家鼠（Rattus norvegicus）、小家鼠（Mus musculus），鳥綱的珍珠雞（Numida meleagris）、原雞（Gallusgallus）和爬行綱西部錦龜（Chrysemyspictabellii）、鬃獅蜥（Pogonavitticeps）的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，因此在進(jìn)化樹上屬于不同的大分支；泰國斗魚與青鳉魚（Oryzias latipes）和黑點(diǎn)青鳉魚（Oryzias melastigma）雖同屬魚綱，但屬于不同目，因此在進(jìn)化樹上的分支不同，親緣關(guān)系稍遠(yuǎn)；而泰國斗魚與龜殼攀鱸（Anabas testudineus）和大刺鰍（Mastacembelus armatus）同屬于魚綱的鱸形目，在進(jìn)化樹上屬于同一分支；說明泰國斗魚th與龜殼攀鱸等歸為一對的同源性可靠．

圖5 th的N-J進(jìn)化樹

2.2.3 遺傳距離矩陣圖分析

在得到上述進(jìn)化樹的基礎(chǔ)上，選用各綱典型物種，利用MEGA7繪制th的遺傳距離矩陣圖，結(jié)果如圖6所示，與泰國斗魚（Bettasplendens）th基因同源性由近至遠(yuǎn)的物種分別為哺乳綱、鳥綱和爬行綱．其中，泰國斗魚與龜殼攀鱸（Anabas testudineus）同為鱸形目，攀鱸亞目，兩者th的遺傳距離最小，為0.141 68；而與爬行綱，有鱗目的鬢獅蜥（Pogona vitticeps）遺傳距離最大，為0.371 19．

圖6 遺傳距離矩陣圖

2．3 斗爭行為學(xué)觀察

2.3.1 鏡像斗爭

當(dāng)把鏡子放入透明燒杯后，斗魚立即表現(xiàn)出某些好斗性行為．包括鰓的張開，鰭條的豎立和身體的抖動(dòng)及起伏，好斗性強(qiáng)的個(gè)體更是展示出身體尾部撞擊鏡像，張嘴撕咬鏡像的斗爭行為（圖7a）．

2.3.2 配對斗爭

2條魚同時(shí)放入一個(gè)透明燒杯后立即進(jìn)入戰(zhàn)斗狀態(tài)，包括張鰓和表現(xiàn)出捍衛(wèi)領(lǐng)域的行為，即A魚突然發(fā)出抖動(dòng)行為使對面正在靠近的B魚轉(zhuǎn)變前進(jìn)方向，抑或是A魚猛然突擊不遠(yuǎn)處的B魚使其逃避后返回原地；接著是互相盤旋并試圖撕咬對方．隨著戰(zhàn)斗強(qiáng)度的增加，斗爭行為更表現(xiàn)為：頻繁的撕咬，撕咬部位通常為臀鰭和尾鰭；用身體或尾鰭攻擊對手；最后優(yōu)勢個(gè)體表現(xiàn)出追擊行為，而劣勢個(gè)體則表現(xiàn)出順從、靜止和逃跑行為（圖7b）．

圖7 斗爭行為照片

2．4 斗爭前后th的mRNA表達(dá)分析

運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對斗爭前、后或斗爭后優(yōu)、劣勢個(gè)體間th基因的mRNA表達(dá)差異進(jìn)行比較．利用鏡像刺激法和配對斗爭法將實(shí)驗(yàn)魚分為4個(gè)組：斗爭前（B組），鏡像斗爭（M組）和配對斗爭（包括優(yōu)勢個(gè)體D組及劣勢個(gè)體I組），B組包含4個(gè)平行且選其中1個(gè)平行作為對照樣品，M組、D組和I組分別包含3個(gè)平行.

2.4.1 各實(shí)驗(yàn)組總RNA的提取

各實(shí)驗(yàn)組總RNA電泳結(jié)果顯示28 S、18 S和5 S rRNA條帶清晰（圖8），說明所提總RNA質(zhì)量較好，可用于反轉(zhuǎn)錄.

圖8 各實(shí)驗(yàn)組總RNA的電泳圖

2.4.2 各實(shí)驗(yàn)組cDNA的反轉(zhuǎn)錄合成及質(zhì)量檢測

將各實(shí)驗(yàn)組的總RNA反轉(zhuǎn)錄生成cDNA，以cDNA為模板，分別對β-actin（內(nèi)參基因）進(jìn)行擴(kuò)增，用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物，產(chǎn)物出現(xiàn)單一電泳條帶，證明模板質(zhì)量良好（圖9）．

圖9 各實(shí)驗(yàn)組cDNA質(zhì)量檢測電泳圖

2.4.3 特異性引物的設(shè)計(jì)與檢測

將測序結(jié)果輸入Primer Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)出各項(xiàng)評分最高的特異性引物：qth-F、qth-R，使用特異性引物進(jìn)行熒光定量PCR，通過融解曲線判定該特異性引物質(zhì)量，圖10顯示：融解曲線為單峰，證明PCR產(chǎn)物專一，引物特異性強(qiáng)，可用于定量表達(dá)分析．

圖10 特異性引物PCR產(chǎn)物的融解曲線

2.4.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR對th的表達(dá)進(jìn)行分析

以斗爭前B0為對照樣品，β-actin為內(nèi)源性控制品，對鏡像斗爭前、后，或配對斗爭優(yōu)、劣勢個(gè)體進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，以RQ值作為基因的相對表達(dá)量．以B0對為對照樣品，其表達(dá)值設(shè)為1，其余樣品的相對表達(dá)值RQ如圖11所示．

圖11 th在斗爭前和斗爭后優(yōu)劣勢個(gè)體中的相對表達(dá)量

將RQ值輸入SPSS軟件進(jìn)行方差分析及多重比對，結(jié)果如表2所示，D、I、M組的RQ值差異與B組均達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；其中D組與B組差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；D組與I組的RQ值差異顯著（P＜0.05）；I組與M組的RQ值差異未達(dá)到顯著水平（P＞0.05）．結(jié)果表明，無論是鏡像斗爭法還是配對斗爭法，斗爭后個(gè)體th的mRNA表達(dá)量都明顯高于未斗爭個(gè)體；配對斗爭中，優(yōu)勢個(gè)體的表達(dá)量顯著高于劣勢個(gè)體，也顯著高于鏡像斗爭后個(gè)體，而劣勢個(gè)體的表達(dá)量與鏡像斗爭后個(gè)體相近．

表2 th基因的相對表達(dá)量

3 討論與結(jié)論

多巴胺通路被證明與脊椎動(dòng)物的好斗性密切相關(guān).雄鼠在社群斗爭后其多巴胺含量升高；經(jīng)反復(fù)斗爭的優(yōu)勢雄性小鼠酪氨酸羥化酶基因th的mRNA表達(dá)水平明顯高于未打斗的小鼠［10-12］．雄斑馬魚的多巴胺通路在配對斗爭或鏡像刺激后被激活，其中優(yōu)勢個(gè)體端腦中的多巴胺含量較高，下丘腦中的th過量表達(dá)［13］．本研究的結(jié)果也與上述小鼠、斑馬魚的研究結(jié)果相一致，即th在泰國斗魚的優(yōu)勢個(gè)體中mRNA表達(dá)水平顯著高于劣勢個(gè)體；經(jīng)配對斗爭和鏡像斗爭后的個(gè)體th的表達(dá)水平均高于斗爭前個(gè)體．這進(jìn)一步表明多巴胺通路是魚類好斗性調(diào)控的重要通路之一．

本研究利用RT-PCR方法，從泰國斗魚的全腦中克隆并鑒定出了酪氨酸羥化酶基因th的部分cDNA片段，通過實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測了斗魚在打斗前后th的表達(dá)差異，其結(jié)果顯示不管是經(jīng)過鏡像斗爭還是配對斗爭，斗爭后個(gè)體th的表達(dá)量都明顯高于未斗爭個(gè)體（P＜0.05）；配對斗爭中，優(yōu)勢個(gè)體的表達(dá)量顯著高于劣勢個(gè)體（P＜0.05），極顯著高于未斗爭個(gè)體（P＜0.01）；鏡像斗爭個(gè)體的表達(dá)量顯著低于配對斗爭的優(yōu)勢個(gè)體（P＜0.05），但與配對斗爭的劣勢個(gè)體無顯著差別（P＞0.05）．此研究結(jié)果與其他動(dòng)物好斗性研究結(jié)果類似，斑馬魚中與多巴胺合成相關(guān)的基因能夠被社群互作激活，優(yōu)勢個(gè)體下丘腦中th的mRNA表達(dá)量在打斗后有明顯提高［9］；經(jīng)反復(fù)斗爭的優(yōu)勢雄性小鼠thmRNA表達(dá)水平明顯高于未打斗的小鼠［10-12］．泰國斗魚斗爭后個(gè)體th的表達(dá)量明顯高于未斗爭個(gè)體，優(yōu)勢個(gè)體高于劣勢個(gè)體，由此推測泰國斗魚酪氨酸羥化酶基因與泰國斗魚的好斗性呈明顯的正相關(guān)，說明酪氨酸羥化酶基因參與了斗魚好斗性的分子調(diào)控機(jī)制．