艾司西酞普蘭聯(lián)合有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)小鼠抑郁癥的治療作用

孫一鳴,谷昱琛,黃瑩瑩,梁 心,魯 明,劉 哲*

(1蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥劑科,蚌埠 233000;2蚌埠醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院藥理教研室;3南京醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室;*通訊作者,E-mail:liuzhe@bbmc.edu.cn;#共同通訊作者,E-mail:lumingnjmu@sina.com)

抑郁癥(major depressive disorder,MDD)是最常見(jiàn)的精神疾病,全球約3.5億患者,已然成為了嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題[1]。據(jù)WHO調(diào)查結(jié)果顯示,自2004年起抑郁癥已成為人類第三大頑癥,預(yù)計(jì)至2030年抑郁癥將成為影響人類生活的第一大精神疾病,僅中國(guó)抑郁癥患者就有9 000萬(wàn),終生患病率6.1%-9.5%,這個(gè)數(shù)字還在逐年增長(zhǎng),給家庭和社會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的傷害及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[2,3]。

已有研究表明,抑郁癥是一類以星形膠質(zhì)細(xì)胞丟失及功能異常為主要病理特征,并伴隨神經(jīng)炎癥的神經(jīng)精神類疾病[4,5]。抑郁癥尸檢結(jié)果顯示,與正常人相比,抑郁癥患者皮層、海馬體積萎縮,多個(gè)腦區(qū)的腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素以及前列腺素(PGE2)等致炎因子水平明顯增加[6]。抑郁癥發(fā)病機(jī)制假說(shuō)包括單胺類神經(jīng)遞質(zhì)假說(shuō)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子假說(shuō)、神經(jīng)內(nèi)分泌假說(shuō)、免疫炎癥假說(shuō)[7,8],目前臨床治療主要基于單胺類神經(jīng)遞質(zhì)假說(shuō),一線治療藥物選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(selective serotonin reuptake inhibitors,SSRIs)可誘導(dǎo)血清素轉(zhuǎn)運(yùn)體(serotonin transporter,SERT)內(nèi)化,從而增加細(xì)胞間隙(Serogtonin,5-HT)濃度,達(dá)到緩解抑郁樣癥狀的目的,但此類藥物對(duì)三分之一的抑郁癥患者效果較差[9]。臨床治療方案常建議患者聯(lián)合有規(guī)律的有氧運(yùn)動(dòng),可有效改善患者抑郁樣癥狀,但是其治療機(jī)制尚不明確[10]。本研究擬建立慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激模型(chronic mild stress,CMS),探究艾司西酞普蘭與有氧運(yùn)動(dòng)結(jié)合對(duì)抑郁癥小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞丟失、促炎因子含量及氨基酸水平的調(diào)節(jié)作用,并探索艾司西酞普蘭聯(lián)合有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)抑郁癥發(fā)生發(fā)展的影響,為抗抑郁藥物研發(fā)和臨床治療提供新的思路及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與主要試劑

1.2 慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激抑郁模型的建立

采用3月齡雄性C57BL/6小鼠,適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境2 d,適應(yīng)糖水2 d,剔除不合格小鼠。隨機(jī)分為空白對(duì)照組(Control,CON,n=7)、慢性溫和不可預(yù)知溫和應(yīng)激模型組(chronic mild stress,CMS,n=7)、艾司西酞普蘭組(ESCIT,n=7)、聯(lián)合治療組(艾司西酞普蘭+轉(zhuǎn)籠有氧運(yùn)動(dòng)2 h,ESCIT+AE,n=7)。連續(xù)CMS應(yīng)激6周后進(jìn)行相關(guān)行為學(xué)檢測(cè)小鼠建模成功與否。從第7周開(kāi)始艾司西酞普蘭組給予腹腔注射ESCIT(5 mg/kg)、聯(lián)合治療組給予ESCIT(5 mg/kg)+AE 2 h治療至第10周,隨后再次檢測(cè)小鼠抑郁樣行為,每周均采用糖水偏好實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠糖水偏好率。實(shí)驗(yàn)小鼠均單籠飼養(yǎng),給予充足的飲用水及飼料(除非模型需求)。CON組小鼠正常給予進(jìn)食、飲水,與模型組分開(kāi)放置,避免任何可能的刺激。CMS抑郁模型[11]實(shí)驗(yàn)小鼠每天隨機(jī)給予2-3種應(yīng)激源,刺激10周,每天給予的應(yīng)激源及應(yīng)激時(shí)間不可雷同。CMS模型應(yīng)激源如下:夾尾巴(3 min)、不定時(shí)噪音、晝夜顛倒(24 h)、冰水浴(2-3 min)、50 ml束縛管束縛(4-6 h)、濕籠(8 h)、45°斜籠(12 h)、禁水(12 h)、禁食(12 h)、閃燈(12 h)等。轉(zhuǎn)籠有氧訓(xùn)練:采用寵物鼠轉(zhuǎn)籠,直徑8 cm,底座用固定架固定,轉(zhuǎn)籠有氧運(yùn)動(dòng)30 min/次,4次/d。CON組和CMS組小鼠不做任何訓(xùn)練,自由活動(dòng)。

1.3 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠抑郁樣行為

1.3.1 糖水偏好實(shí)驗(yàn) 小鼠籠內(nèi)放置蒸餾水和1%蔗糖溶液各1管,觀察8 h內(nèi)各組小鼠對(duì)兩種液體的飲用情況,在第4小時(shí)交換蒸餾水與糖水的位置,防止位置偏好,檢測(cè)8 h后稱量?jī)晒芤后w的質(zhì)量。計(jì)算糖水消耗比例:蔗糖水消耗比例=蔗糖水消耗(g)/(蔗糖水消耗+純水消耗)×100%。每周均采用糖水偏好實(shí)驗(yàn)(sucrose preference test,SPT)檢測(cè)小鼠糖水偏好率。

1.3.2 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 采用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(forced swimming test,FST)評(píng)價(jià)小鼠抑郁樣行為。具體操作為將燒杯(高30 cm,直徑20 cm)中注入蒸餾水約4 L,水溫為25 ℃。記錄燒杯中小鼠的游泳狀態(tài),從將小鼠置于燒杯內(nèi)開(kāi)始記錄,記錄6 min的游泳行為,并統(tǒng)計(jì)最后4 min小鼠的不動(dòng)時(shí)間。在第6周和第10周各進(jìn)行一次強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn),不動(dòng)時(shí)間越短,抗抑郁作用越強(qiáng)。

1.3.3 懸尾實(shí)驗(yàn) 采用懸尾實(shí)驗(yàn)(tail suspension test,TST)評(píng)價(jià)小鼠抑郁樣行為。將小鼠尾巴后三分之一固定于支架上,保持小鼠頭部懸掛向下(距離臺(tái)面15 cm)。記錄小鼠6 min行為變化,統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)小鼠后4 min的不動(dòng)時(shí)間。在第6周和第10周各進(jìn)行一次懸尾實(shí)驗(yàn),不動(dòng)時(shí)間越短,抗抑郁作用越強(qiáng)。

1.3.4 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 采用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(opening field test,OFT)評(píng)價(jià)小鼠抑郁樣行為。將小鼠放置于箱內(nèi)底面中心,計(jì)時(shí)6 min。通過(guò)計(jì)算給定時(shí)間內(nèi)小鼠行走軌跡路線及去到活動(dòng)中心的次數(shù),評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)小鼠在曠場(chǎng)環(huán)境中的自主探索行為與焦慮行為。在第6周和第10周各進(jìn)行一次曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn),自主運(yùn)動(dòng)路線越長(zhǎng),抗抑郁及焦慮作用越強(qiáng)。

1.4 ELISA酶聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)小鼠外周血炎癥因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的含量

行為學(xué)檢測(cè)完畢,每組7只實(shí)驗(yàn)小鼠分別眼球取外周血800 μl,4 ℃ 3 000g離心10 min,取外周血上清放入新的EP管,凍存于-80 ℃,備用。將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品稀釋后分別加入相應(yīng)的96孔板中,再加入生物素化抗體,37 ℃放置30 min,洗板5次。加入酶結(jié)合物工作液,37 ℃孵育30 min,洗板5次。每孔都加入顯色液A液B液,各50 μl,37 ℃避光孵育15 min。加入終止液50 μl終止反應(yīng),450 nm波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度,根據(jù)吸光度算出標(biāo)準(zhǔn)曲線,再計(jì)算檢測(cè)樣品的濃度。

1.5 HPLC-ECD法檢測(cè)小鼠海馬組織氨基酸類遞質(zhì)的含量

采用HPLC-ECD法檢測(cè)小鼠海馬組織勻漿的氨基酸類遞質(zhì)含量。實(shí)驗(yàn)小鼠眼球取血后,每組取3只小鼠立即處死,迅速剝離大腦置于冰盒上并分離海馬組織,放入EP管去皮稱重,其中左側(cè)海馬組織按10 μl/mg組織加入勻漿液(0.1 mol/L高氯酸,0.1 mmol/L EDTA.2Na,DHBA 3.5×10-8mol/L),超聲勻漿。4 ℃,20 000 r/min離心30 min,取上清定量分裝后置于-70 ℃冰箱,備用。系統(tǒng)組成及參數(shù)設(shè)置如下:HPLC-ECD檢測(cè)系統(tǒng)(Thermo Fisher Scientific,USA),Thermo UniMate 3000 Pump;流速0.2 ml/min;UniMate 3000 Autosampler,4 ℃,進(jìn)樣10 μl;ESA Coulochem Ⅲ Electrochemical Detector,5041檢測(cè)池電壓350 mV,Guard Cell電壓360 mV,Rang 100 nA,Filter 5S;DIONEX Acclaim Rapid Separation Liquid Chromatography(RSLC) C18 2.2 μm,2.1 mm×100 mm;柱溫38 ℃;Chromeleon 6.9色譜工作站采集與分析數(shù)據(jù)。流動(dòng)相組成及配比:NaH2PO490 mmol/L、檸檬酸50 mmol/L、OSA 1.7 mmol/L、EDTA 50 μmol/L、乙腈5%。

1.6 免疫熒光檢測(cè)小鼠海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)

采用免疫熒光染色檢測(cè)小鼠海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞的陽(yáng)性數(shù)。實(shí)驗(yàn)小鼠眼球取血后,每組取4只小鼠給予腹腔注射戊巴比妥鈉(1%,45 mg/kg),麻醉效果滿意后,自左心室灌注PBS,沒(méi)有血色后,繼續(xù)灌注4%多聚甲醛,直至小鼠四肢僵直。即刻取出全腦放入5 ml EP管4%多聚甲醛固定、過(guò)夜。20%和30%蔗糖溶液連續(xù)梯度脫水5-7 d。以O(shè)CT膠包埋,切片,每片30 μm,裝入甘油 ∶PBS為1 ∶1的混勻液中,-20 ℃保存。挑出典型海馬區(qū)的腦片,PBS漂洗3次,每次10 min,用含0.3% Triton X-100的0.01 mol/L PBS配制的5% BSA封閉腦片1 h,棄去封閉液,不用清洗腦片,直接加入小鼠源性anti-GFAP,由抗體稀釋液配成,4 ℃過(guò)夜。復(fù)溫1 h,PBS漂洗3次,每次5 min,加入PBS配制的紅色熒光小鼠二抗,室溫孵育1 h。PBS漂洗3次,每次5 min,采用含防淬滅劑的DAPI進(jìn)行染核,封片。體視學(xué)顯微鏡(Axiovert LSM510,Carl Zeiss Co)下觀察拍片計(jì)數(shù)。

1.7 體視學(xué)細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)小鼠海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)

免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)采用體視學(xué)立體計(jì)數(shù)法(Stereo Investigator software,Microbrightfield,Williston,VT,USA)。根據(jù)小鼠腦圖譜,在20倍的物鏡下找到海馬區(qū)并圈出海馬區(qū)的目的區(qū)域,計(jì)數(shù)框?yàn)?00 μm×100 μm。目的區(qū)域以外的陽(yáng)性細(xì)胞不列入計(jì)數(shù)范圍,采用Stereo Investigator 7.0軟件統(tǒng)計(jì)分析計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)。

1.8 免疫印跡(Western blotting,WB)檢測(cè)小鼠海馬腦區(qū)焦亡相關(guān)蛋白表達(dá)

右側(cè)海馬組織稱重,按比例加入含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液,組織勻漿,16 000 r/min×15 min,4 ℃離心,吸取上清。取1 μl進(jìn)行BCA蛋白定量(碧云天,上海),余下上清蛋白按照體積比加入1/4體積的5×Loading buffer,95 ℃金屬浴,5 min,分裝-20 ℃保存?zhèn)溆?。上樣?300 mA恒流下電轉(zhuǎn),轉(zhuǎn)至PVDF膜(Millipore,USA)。在10%脫脂奶粉里封閉1 h,結(jié)束后TBST漂洗3次,每次10 min,再加入TBST配制5% BSA的一抗,4 ℃孵育過(guò)夜。所用的一抗包括:鼠抗GFAP(1 ∶1 000),兔抗GSDMD(1 ∶1 000),鼠抗Caspase-1(1 ∶1 000),小鼠抗GAPDH(1 ∶1 000)。復(fù)溫30 min,TBST漂洗10 min×3次。加入HRP標(biāo)記的二抗:山羊抗小鼠-HRP(1 ∶2 000),室溫孵育1 h,TBST漂洗10 min×3次,用Image Quant LAS 4000(GE)化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)顯色。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 ESCIT聯(lián)合AE改善CMS小鼠抑郁樣行為

與對(duì)照組相比,模型組小鼠糖水偏好率降低(P<0.01);與模型組相比,艾司西酞普蘭組及聯(lián)合治療組小鼠糖水偏好率增加(P<0.05);與艾司西酞普蘭組相比,聯(lián)合治療組小鼠糖水偏好率顯示增加趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見(jiàn)圖1)。與對(duì)照組相比,模型組小鼠TST不動(dòng)時(shí)間、FST不動(dòng)時(shí)間增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組相比,艾司西酞普蘭組及聯(lián)合治療組小鼠TST不動(dòng)時(shí)間、FST不動(dòng)時(shí)間減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與艾司西酞普蘭組相比,聯(lián)合治療組小鼠TST不動(dòng)時(shí)間、FST不動(dòng)時(shí)間有減少趨勢(shì),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見(jiàn)圖1)。與對(duì)照組相比,模型組小鼠曠場(chǎng)總運(yùn)動(dòng)路線減少(P<0.01);與模型組相比,艾司西酞普蘭組及聯(lián)合治療組小鼠曠場(chǎng)總運(yùn)動(dòng)路線增加(P<0.05);與艾司西酞普蘭組相比,聯(lián)合治療組小鼠曠場(chǎng)總運(yùn)動(dòng)路線增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見(jiàn)圖1)。

與空白對(duì)照組相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;與模型組相比,#P<0.05,##P<0.01;與艾司西酞普蘭組相比,△P<0.05圖1 艾司西酞普蘭聯(lián)合有氧運(yùn)動(dòng)改善CMS小鼠抑郁樣行為Figure 1 ESCIT combined with AE improves depression-like behavior in CMS mice

2.2 ESCIT聯(lián)合AE可降低CMS小鼠外周血促炎因子水平

ELISA結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,模型組外周血清炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α濃度增加(P<0.01);與模型組相比,艾司西酞普蘭組及聯(lián)合治療組外周血清促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α濃度降低(P<0.05);與艾司西酞普蘭組相比,聯(lián)合治療組外周血清促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α濃度有降低趨勢(shì),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見(jiàn)圖2)。四組間外周血清抑炎因子IL-10差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見(jiàn)圖2)。

與對(duì)照組相比,**P<0.01,***P<0.001;與模型組相比,#P<0.05,##P<0.01圖2 艾司西酞普蘭聯(lián)合有氧運(yùn)動(dòng)降低CMS小鼠外周血促炎因子水平Figure 2 ESCIT combined with AE inhibits inflammatory factors in peripheral blood of CMS mice

2.3 ESCIT聯(lián)合AE緩解CMS小鼠海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞焦亡

免疫熒光結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,模型組小鼠海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP陽(yáng)性細(xì)胞顯著減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組相比,艾司西酞普蘭組及聯(lián)合治療組小鼠海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP陽(yáng)性細(xì)胞增加(P<0.05);與艾司西酞普蘭組相比,聯(lián)合治療組小鼠海馬區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP陽(yáng)性細(xì)胞略有增加,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見(jiàn)圖3)。此外Western blotting結(jié)果顯示,CMS小鼠海馬腦區(qū)GSDMD,Caspase-1成熟體表達(dá)顯著增加,ESCIT聯(lián)合AE可改善CMS小鼠海馬區(qū)GSDMD,Caspase-1成熟體表達(dá)水平(見(jiàn)圖3)。

圖3 艾司西酞普蘭聯(lián)合有氧運(yùn)動(dòng)緩解CMS小鼠海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞丟失Figure 3 ESCIT combined with AE increases the amount of astrocytes in the hippocampus of CMS mice

2.4 ESCIT聯(lián)合AE改善CMS小鼠海馬組織牛磺酸及γ-氨基丁酸水平

HPLC檢測(cè)結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,模型組小鼠海馬腦區(qū)?；撬?、γ-氨基丁酸含量增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);與模型組相比,艾司西酞普蘭組及聯(lián)合治療組小鼠?；撬?、γ-氨基丁酸水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與艾司西酞普蘭組相比,聯(lián)合治療組小鼠海馬腦區(qū)?；撬帷ⅵ?氨基丁酸水平略降低,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見(jiàn)圖4)。

與對(duì)照組組相比,***P<0.001;與模型組相比,###P<0.05圖4 艾司西酞普蘭聯(lián)合有氧運(yùn)動(dòng)改善CMS小鼠海馬組織牛磺酸及γ-氨基丁酸水平Figure 4 ESCIT combined with AE improves Tau and GABA levels in hippocampus of CMS mice

3 討論

與正常人相比,抑郁癥患者尸檢結(jié)果顯示額葉皮層、海馬體積及質(zhì)量顯著減少,星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少,其標(biāo)記物GFAP和S100鈣結(jié)合蛋白β(S100β)的mRNA水平和蛋白表達(dá)亦顯著下調(diào)[12],其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病則是以神經(jīng)元的異常為主。同時(shí)抑郁癥患者多個(gè)腦區(qū)出現(xiàn)廣泛的神經(jīng)炎癥反應(yīng),白介素(interleukin,IL)家族成員(IL-1,IL-6)、TNF-α和PGE2等致炎因子水平顯著升高[13,14]。因此,抑郁癥是一類以星形膠質(zhì)細(xì)胞病理改變及功能障礙為主要特征,伴隨神經(jīng)炎癥的神經(jīng)精神類疾病。尋找理想的干預(yù)靶標(biāo),抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞丟失并恢復(fù)其正常功能,抑制炎癥過(guò)度激活有望成為抑郁癥治療和藥物研發(fā)的新方向和新策略。

基礎(chǔ)研究也顯示當(dāng)機(jī)體受到外界過(guò)度刺激時(shí),外周免疫細(xì)胞、單核細(xì)胞會(huì)過(guò)度釋放炎癥因子,而在炎性環(huán)境下血腦屏障的通透性顯著增加,外周炎癥因子則會(huì)透過(guò)血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi),促使腦內(nèi)產(chǎn)生過(guò)度的炎性反應(yīng)[15]。此外,外周炎癥因子、趨化因子以及色氨酸代謝產(chǎn)物也會(huì)激活腦內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞,加劇神經(jīng)炎性反應(yīng)。炎癥因子對(duì)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝、谷氨酸代謝及神經(jīng)毒性、突觸可塑性、下丘腦-垂體-腎上腺軸(hypothalamic pituitary adrenal axis,HPA)的興奮性均產(chǎn)生影響[16,17]。因此,試圖通過(guò)抑制神經(jīng)炎癥的過(guò)度激活改善抑郁癥狀有一定理論基礎(chǔ)。細(xì)胞焦亡(pyroptosis)是近年發(fā)現(xiàn)并被證實(shí)由Gasdermin家族蛋白介導(dǎo)的調(diào)節(jié)性細(xì)胞死亡形式,也是一種炎性細(xì)胞死亡形式。不同的蛋白酶或者顆粒酶介導(dǎo)了Gasdermin家族蛋白的剪切,使其釋放N末端結(jié)構(gòu)域,隨后轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜上形成焦亡小孔,由此引起細(xì)胞膜通透性改變、細(xì)胞腫脹和細(xì)胞膜破裂,釋放胞內(nèi)炎性物質(zhì)[18,19],介導(dǎo)焦亡的發(fā)生發(fā)展。

世界衛(wèi)生組織調(diào)查結(jié)果顯示,抑郁癥女性患者平均發(fā)病率遠(yuǎn)高于男性平均發(fā)病率,且女性抑郁癥主要發(fā)生在圍絕經(jīng)期和月經(jīng)周期的低雌激素階段,目前各個(gè)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域也普遍認(rèn)為雌激素與抑郁癥密切相關(guān),因此本研究為避免雌激素干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選用雄性小鼠建立CMS模型[20,21]。本研究結(jié)果表明,模型組曠場(chǎng)總路線相較于對(duì)照組顯著縮短,給予艾司西酞普蘭及有氧運(yùn)動(dòng)治療至第10周,曠場(chǎng)總路線顯著增多,說(shuō)明艾司西酞普蘭聯(lián)合有氧運(yùn)動(dòng)可顯著改善模型組小鼠焦慮抑郁樣行為。與對(duì)照組相比,模型組小鼠促炎因子水平顯著升高,海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞顯著丟失,焦亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平增加,給予艾司西酞普蘭及有氧運(yùn)動(dòng)治療至第10周,顯著改善模型組小鼠促炎因子水平、焦亡相關(guān)蛋白表達(dá)。提示模型組小鼠外周血促炎因子水平增加以及海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞的丟失可能與星形膠質(zhì)細(xì)胞焦亡相關(guān),給予艾司西酞普蘭及有氧運(yùn)動(dòng)治療后緩解模型組小鼠外周炎癥因子水平及海馬腦區(qū)細(xì)胞焦亡。其中,艾司西酞普蘭聯(lián)合有氧運(yùn)動(dòng)治療組與艾司西酞普蘭單用組相比,TST、FST不動(dòng)時(shí)間減少,外周血促炎因子降低,海馬腦區(qū)GFAP表達(dá)增加、焦亡相關(guān)蛋白表達(dá)減少,但結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,分析其原因一可能與樣本量較少有關(guān),原因二可能與聯(lián)合治療組小鼠運(yùn)動(dòng)時(shí)間略短有關(guān)。?；撬崾且活惡虬被?可維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài),具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)作用,可促進(jìn)大腦發(fā)育,增強(qiáng)記憶[22,23]。本研究表明,模型組小鼠海馬腦區(qū)牛磺酸水平顯著增加,可能是應(yīng)激作用下機(jī)體的代償作用。在哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中γ-氨基丁酸是一種天然存在的非蛋白質(zhì)氨基酸,也是一種抑制性的神經(jīng)遞質(zhì),具有鎮(zhèn)靜、抗焦慮、增強(qiáng)記憶以及改善睡眠的作用,對(duì)抑郁、失眠、自主神經(jīng)失調(diào)等疾病均具有保護(hù)作用[24,25]。本研究中模型組小鼠海馬腦區(qū)γ-氨基丁酸水平顯著降低,小鼠抑郁樣癥狀增加,也與報(bào)道相符,給予艾司西酞普蘭及有氧運(yùn)動(dòng)治療后,上述變化顯著改善。艾司西酞普蘭結(jié)合有氧運(yùn)動(dòng)可能通過(guò)調(diào)節(jié)?；撬峒唉?氨基丁酸水平,減少神經(jīng)毒性,促進(jìn)神經(jīng)再生,從而通過(guò)神經(jīng)保護(hù)發(fā)揮抗抑郁作用,其機(jī)制需進(jìn)一步探究。

綜上所述,艾司西酞普蘭聯(lián)合有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)抑郁小鼠焦慮行為的治療效果優(yōu)于艾司西酞普蘭單獨(dú)治療組,其機(jī)制可能是通過(guò)抑制外周促炎因子水平及星形膠質(zhì)細(xì)胞焦亡,調(diào)節(jié)體內(nèi)氨基酸水平緩解神經(jīng)炎癥,該研究進(jìn)一步充實(shí)了神經(jīng)炎癥假說(shuō),為下一步臨床治療提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。