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    情志刺激加速小鼠動(dòng)脈硬化進(jìn)展與SDF-1/CXCR4失衡的相關(guān)性研究*

    2021-02-05 01:02:26黃曾艷黃曼萍彭春麗劉永源李春燕梁東輝
    中國(guó)病理生理雜志 2021年1期
    關(guān)鍵詞:情志空白對(duì)照海馬

    黃曾艷, 黃曼萍, 彭春麗, 劉永源, 李春燕, 梁東輝

    (1南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院,廣東廣州510515;2廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,廣東廣州510405;3南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院,廣東廣州510280;4茂名市人民醫(yī)院,廣東茂名525000)

    易損動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)斑塊進(jìn)展和破裂引起的血小板聚集和血栓形成是導(dǎo)致急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome,ACS)等急性心腦血管事件的病理學(xué)基礎(chǔ)[1]。近年來(lái),臨床就診的ACS 患者中精神心理問(wèn)題突出,忽視對(duì)精神心理因素的干預(yù)可導(dǎo)致ACS 患者的治療依從性、臨床預(yù)后和生活質(zhì)量顯著下降[2]。因此,重視精神心理問(wèn)題并給予早期防治,有助于穩(wěn)定AS 斑塊,防止ACS的發(fā)生和發(fā)展,減少發(fā)病率與病死率。

    研究發(fā)現(xiàn),基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)被認(rèn)為是冠心病的易感基因[3],血漿SDF-1 水平是預(yù)測(cè)心肌梗死病人發(fā)生死亡、再梗和心衰等事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[4]。CXC 趨化因子受體4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)是目前研究較多的趨化因子,可特異性地結(jié)合SDF-1并互相形成生物信號(hào)關(guān)聯(lián),廣泛參與AS 的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

    本研究以SDF-1 和CXCR4 與情志刺激小鼠AS病變進(jìn)展的相關(guān)性為出發(fā)點(diǎn),通過(guò)慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)的方法干預(yù)載脂蛋白E 基因敲除(apolipoprotein E gene knockout,ApoE-/-)小鼠,從而復(fù)制ApoE-/-小鼠 CUMS情志刺激模型[5],觀察AS斑塊組織病理學(xué)形態(tài),同時(shí)檢測(cè)SDF-1和CXCR4在血漿、血小板、主動(dòng)脈和海馬中的表達(dá),觀察情志刺激與AS 斑塊易損性的相關(guān)性,為SDF-1/CXCR4 介導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化病變下游信號(hào)通路的研究奠定基礎(chǔ)。

    材 料 和 方 法

    1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    從常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司購(gòu)進(jìn)30 只雄性ApoE-/-小鼠和10 只具有相同遺傳背景的野生型C57BL/6J 小鼠,SPF 級(jí),8 周齡,體質(zhì)量為(22±1)g,動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK(蘇)2011-0003。

    2 主要試劑及儀器

    小鼠SDF-1 和CXCR4 ELISA 試劑盒(武漢華美生物工程有限公司);鼠抗SDF-1 多克隆抗體和鼠抗CXCR4 單克隆抗體(Abcam);抗GAPDH 抗體(北京全式金生物技術(shù)有限公司);聚合HRP 標(biāo)記的IgG Ⅱ抗(武漢博士德生物科技有限公司);DAB 顯色液(廣州賽國(guó)生物公司);BCA 蛋白定量試劑盒(廣州碧云天生物技術(shù)研究所)。RM2235 切片機(jī)(Leica);TS100-F 型熒光倒置顯微鏡(Nikon);MK3 酶標(biāo)定量測(cè)定儀(Thermo);SDS 電泳系統(tǒng)(北京君意東方電泳設(shè)備有限公司)。

    3 方法

    3.1 分組及造模 30 只8 周齡雄性ApoE-/-小鼠,造模前給予基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后,按照數(shù)字表法隨機(jī)分為正常對(duì)照(normal control)組、高脂(high fat)組和CUMS 情志刺激模型組(CUMS 組),每組各10只,另取10只同周齡近交系C57BL/6J小鼠設(shè)為空白對(duì)照(blank control)組。小鼠飼養(yǎng)環(huán)境相同(飼養(yǎng)條件SPF 級(jí),室溫22℃~24℃,相對(duì)濕度為50%,光照時(shí)段為7:00~19:00),自由飲水??瞻讓?duì)照組和正常對(duì)照組小鼠給予普通飼料喂養(yǎng);高脂組小鼠全程給予含脂肪21%和膽固醇0.15%的西方膳食飼料(60Co γ 射線(xiàn)滅菌,北京科澳協(xié)力有限公司)喂養(yǎng),無(wú)其他干預(yù);CUMS 情志刺激模型組小鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí),加用CUMS 方法干預(yù)12周,從而復(fù)制ApoE-/-小鼠 CUMS 情志刺激模型[5]。實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行13周。

    3.2 CUMS情志刺激造模 本研究采用國(guó)際公認(rèn)的CUMS 方法復(fù)制ApoE-/-小鼠情志刺激模型[5],具體方法如下:(1)傾斜鼠籠:讓小鼠保持在傾斜45°的鼠籠6 h;(2)濕潤(rùn)環(huán)境:用水將墊料弄濕(避免加水過(guò)多產(chǎn)生大水池),將小鼠放置在此潮濕環(huán)境6 h;(3)快速燈光交換+白噪音:將小鼠置于暗箱中,自動(dòng)定時(shí)器每隔7 min 交換明暗燈光,同時(shí)結(jié)合白噪音(110 db)刺激小鼠,持續(xù)2 h;(4)整晚照明:小鼠從7:00 pm-7:00 am 被置于明亮燈光室過(guò)夜;(5)孤立后群居:每只小鼠單獨(dú)放置在一個(gè)籠子持續(xù)4 h 后,再將10 只小鼠共同放置在1 個(gè)籠子里持續(xù)2 h(觀察小鼠,如果發(fā)生斗毆?jiǎng)t人為分開(kāi));(6)禁食24 h;(7)禁水24 h;(8)夾尾:用重量約800 g的塑料夾夾在距離小鼠尾根1~1.5 cm 處(紗布包住尾巴以免夾傷造成組織傷害),持續(xù)15 min 后,將夾子取下。以上幾種CUMS 干預(yù)方法隨機(jī)安排,相同刺激不連續(xù)加入,使ApoE-/-小鼠不能預(yù)知次日的刺激,避免小鼠因適應(yīng)刺激而影響干預(yù)結(jié)果。每日CUMS 刺激前后觀察各組ApoE-/-小鼠的一般狀況,重點(diǎn)記錄小鼠行為狀態(tài),如行動(dòng)活躍度、興奮程度、皮膚毛發(fā)、飲食、睡眠等內(nèi)容。

    3.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法 各組小鼠到達(dá)實(shí)驗(yàn)時(shí)點(diǎn)后取材,取材前小鼠禁食禁水12 h,無(wú)菌條件下,依據(jù)每只小鼠體重使用1%戊巴比妥鈉不同劑量腹腔注射麻醉后:(1)經(jīng)摘除眼球取血,選用洗滌法分離純化血漿、血小板;(2)無(wú)菌條件下解剖小鼠,迅速打開(kāi)胸腔和腹腔,從主動(dòng)脈弓處輕輕分離主動(dòng)脈至髂動(dòng)脈分支處;(3)無(wú)菌手術(shù)剪剝除顱骨,于四疊體中部向前傾斜30°剖開(kāi)腦組織,取海馬區(qū)新鮮腦組織;(4)無(wú)菌條件下暴露并取出整條股骨、脛骨,Hanks液反復(fù)沖洗骨髓,收集骨髓細(xì)胞混懸液,離心棄上清后保存?zhèn)溆谩?/p>

    3.3.1 血漿SDF-1 和CXCR4 含量的檢測(cè) 嚴(yán)格依照ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū),進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋、加樣、酶標(biāo)板上蓋、覆膜、溫育、配液、洗滌、加酶、溫育、洗滌、顯色、終止。終止反應(yīng)15 min 內(nèi),選擇450 nm 波長(zhǎng),測(cè)量各孔的吸光度,依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度創(chuàng)建相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),從而算出小鼠血漿SDF-1 和CXCR4的水平。

    3.3.2 冷凍切片油紅O 染色觀察主動(dòng)脈病理?yè)p傷程度 實(shí)驗(yàn)?zāi)┬∈筇幩篮螅鹘M小鼠行主動(dòng)脈冷凍切片油紅O 染色,具體步驟如下:(1)載玻片粘取冷凍切片,切片干燥后入60%異丙醇浸洗10 min;(2)油紅O 工作液染色10 min;(3)60%異丙醇分化3~10 s至間質(zhì)清晰,水洗;(4)Mayer蘇木精復(fù)染1 min,自來(lái)水返藍(lán);(5)濾紙吸干水分,甘油明膠封片。依據(jù)每個(gè)標(biāo)本連續(xù)切片的染色結(jié)果,選擇AS 斑塊面積最大的切片做病理形態(tài)學(xué)分析。

    3.3.3 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)主動(dòng)脈內(nèi)SDF-1 和CXCR4 的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)?zāi)┬∈筇幩篮?,各組小鼠主動(dòng)脈行石蠟切片,烤片,脫蠟至水;3% H2O220 min;PBS 洗 3 min×3 次;0.05% 胰蛋白酶 37℃ 30 min;PBS 洗3 min×3 次;37℃封閉1 h;吸去封閉液,滴加Ⅰ抗(抗 SDF-1 抗體 1∶250 稀釋?zhuān)?CXCR4 抗體 1∶500 稀釋?zhuān)?℃過(guò)夜;37℃復(fù)溫1 h;PBS 洗3 min×3次;滴加聚合HRP 標(biāo)記的抗小鼠IgG Ⅱ抗,室溫孵育1 h;PBS洗3 min×3次;DAB顯色;充分水洗;蘇木素染色1 min;水洗;分化數(shù)秒;氨水返藍(lán)10 min;梯度乙醇脫水;二甲苯透明;中性樹(shù)膠封片;59℃烤箱過(guò)夜。

    顯微鏡下觀察:陽(yáng)性細(xì)胞為抗原呈顆粒狀、或彌漫性棕黃色或棕褐色著色。采用Image-Pro Plus 6.0圖像分析儀分析小鼠主動(dòng)脈陽(yáng)性產(chǎn)物的積分吸光度(integrated absorbance,IA)及 血 管 總 面 積(sum area),IA/sum area 即為平均吸光度(mean absorbance,MA)。

    3.3.4 Western blot 檢測(cè)ApoE-/-小鼠血小板、主動(dòng)脈、海馬和骨髓中SDF-1 和CXCR4 的蛋白表達(dá) 各組小鼠分別提取主動(dòng)脈、海馬組織蛋白,提取血小板、骨髓細(xì)胞蛋白,加入細(xì)胞裂解液,低溫機(jī)器勻漿混勻,10 000 r/min 離心 3 min,取上清,根據(jù) BCA 蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定樣品蛋白含量后制樣。分別按照各自計(jì)算的上樣量上樣,進(jìn)行SDS-PAGE,行濕轉(zhuǎn)法蛋白轉(zhuǎn)膜,脫脂奶粉快速封閉30 min。特異性抗體按比例稀釋?zhuān)?SDF-1 抗體1∶250 稀釋?zhuān)笴XCR4 抗體1∶500 稀釋?zhuān)饪冢?℃孵育過(guò)夜;HRP標(biāo)記的Ⅱ抗(1∶1 000 稀釋?zhuān)┦覝胤跤? h。經(jīng)洗滌、顯影、灰度掃描后,用ImageJ 圖像分析軟件對(duì)電泳條帶進(jìn)行測(cè)定,分別以目的條帶灰度與內(nèi)參照GAPDH灰度的比值表示SDF-1和CXCR4蛋白的表達(dá)水平。

    4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    運(yùn)用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。連續(xù)性變量指標(biāo)組間差異顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析(oneway ANOVA)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1 小鼠行為的變化

    ApoE-/-小鼠行為變化的記錄結(jié)果顯示,與其余組比較,情志刺激模型組ApoE-/-小鼠表現(xiàn)出行動(dòng)活躍度、靈活性、興奮度減低,皮膚毛發(fā)光澤度減少,喜歡貼邊、瞇眼、嗜睡和覓食活動(dòng)減少等行為學(xué)異常狀態(tài)。

    2 ELISA法檢測(cè)小鼠血漿中SDF-1和CXCR4的表達(dá)水平

    空白對(duì)照組血漿中SDF-1 和CXCR4 的水平最低,CUMS 情志刺激模型組最高;與空白對(duì)照組相比,正常對(duì)照組、高脂組和CUMS 情志刺激模型組SDF-1 和CXCR4 的含量顯著升高(P<0.05);與正常對(duì)照組比較,高脂組和CUMS 情志刺激模型組SDF-1和 CXCR4 的含量顯著升高(P<0.05);與高脂組相比,情志刺激模型組SDF-1 和CXCR4 的含量顯著升高(P<0.05),見(jiàn)圖1。

    3 小鼠主動(dòng)脈的病理形態(tài)觀察

    冷凍切片油紅O 染色通過(guò)檢測(cè)含脂泡沫細(xì)胞及其組成的粥樣斑塊判斷主動(dòng)脈的粥樣硬化程度。空白對(duì)照組小鼠的主動(dòng)脈各層排列整齊,結(jié)構(gòu)清晰,細(xì)胞形態(tài)良好,少見(jiàn)皺褶、空泡,無(wú)AS病灶,見(jiàn)圖2A;其余3 組小鼠的主動(dòng)脈均存在不同程度的AS 病變,粥樣硬化區(qū)域脂質(zhì)呈鮮紅色,細(xì)胞核呈藍(lán)色,間質(zhì)無(wú)色;正常對(duì)照組處于脂紋期,AS 病灶可見(jiàn)少量泡沫細(xì)胞聚集于部分內(nèi)膜下,見(jiàn)圖2B;高脂組和CUMS 情志刺激模型組以粥樣斑塊和復(fù)合斑塊為主要表現(xiàn),細(xì)胞成分減少,脂質(zhì)成分較豐富,大量泡沫細(xì)胞崩解,纖維及基質(zhì)成分增加,斑塊深部為大量無(wú)定形壞死物質(zhì),為AS 最具特征性的病變,見(jiàn)圖2C、D;其中CUMS情志刺激組小鼠AS斑塊所占動(dòng)脈管腔面積最大,呈現(xiàn)薄纖維帽、大壞死核、中膜裂隙和大量針狀空隙膽固醇結(jié)晶,脂質(zhì)池較大,不穩(wěn)定斑塊已發(fā)生破裂,見(jiàn)圖2D。

    Figure 1.Plasma levels of SDF-1 and CXCR4 in the mice of different groups.Mean±SD. n=10.*P<0.05 vs blank control group;△P<0.05 vs normal control group;▲P<0.05 vs high fat group.圖1 各組小鼠血漿SDF-1和CXCR4水平的比較

    Figure 2.Pathological changes of aortas in mice from different groups observed by oil red O staining(×200).A:blank control group;B:normal control group;C:high fat group;D:CUMS group.圖2 各組小鼠主動(dòng)脈病理學(xué)改變

    4 免疫組化法檢測(cè)各組小鼠主動(dòng)脈組織中SDF-1和CXCR4的蛋白表達(dá)

    免疫組化結(jié)果顯示,SDF-1 和CXCR4 主要表達(dá)于小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中。其中SDF-1陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物呈棕褐色顆粒,在空白對(duì)照組中表達(dá)微弱,接近陰性;在正常對(duì)照組中表達(dá)較少,著色淺,呈淺棕褐色;在高脂組和CUMS 情志刺激模型組中可見(jiàn)大量陽(yáng)性表達(dá)顆粒,主要表達(dá)于AS 斑塊纖維帽的平滑肌細(xì)胞胞漿中,顏色呈深棕褐色,見(jiàn)圖3A。CXCR4 陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物呈棕黃色彌漫性著色,在空白對(duì)照組中表達(dá)較少,著色不連續(xù),呈淺黃色;在正常對(duì)照組中表達(dá)較空白對(duì)照組強(qiáng),著色連續(xù),顏色較深;在高脂組和CUMS 情志刺激模型組中除血管及斑塊纖維帽的平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性外,在斑塊內(nèi)的泡沫細(xì)胞上也有表達(dá),呈深棕黃色,見(jiàn)圖3B。

    比較各組小鼠主動(dòng)脈SDF-1和CXCR4陽(yáng)性產(chǎn)物的MA值顯示:與空白對(duì)照組相比,正常對(duì)照組、高脂組和CUMS 情志刺激模型組SDF-1 和CXCR4 的表達(dá)顯著升高(P<0.05);與正常對(duì)照組比較,高脂組和CUMS 情志刺激模型組SDF-1 和CXCR4 的表達(dá)水平顯著升高(P<0.05);與高脂組相比,CUMS情志刺激模型組SDF-1 和CXCR4 的表達(dá)水平顯著升高(P<0.05),見(jiàn)圖3C、D。

    Figure 3.Detection of SDF-1 and CXCR4 expression in aortas of mice by immunohistochemical staining.A and B:the expression of SDF-1 and CXCR4 in aortas was detected by immunohistochemistry;C and D:the MA values of SDF-1 and CXCR4.a:black control group;b:normal control group;C:high fat group;d:CUMS group.Mean±SD. n=10.*P<0.05 vs blank control group(a);△P<0.05 vs normal control group(b);▲P<0.05 vs high fat group(c).圖3 免疫組化法檢測(cè)各組小鼠主動(dòng)脈SDF-1和CXCR4表達(dá)及MA值的比較

    5 情志刺激對(duì)ApoE-/-小鼠血小板、主動(dòng)脈、海馬和骨髓中SDF-1和CXCR4蛋白表達(dá)的影響

    與空白對(duì)照組比,正常對(duì)照組、高脂組和CUMS情志刺激模型組小鼠血小板、主動(dòng)脈和海馬SDF-1和CXCR4 蛋白表達(dá)顯著增高(P<0.05),骨髓SDF-1和CXCR4 蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05);與正常對(duì)照組比,高脂組和CUMS 情志刺激模型組小鼠血小板和主動(dòng)脈和海馬SDF-1和CXCR4蛋白表達(dá)顯著增高(P<0.05),骨髓SDF-1 和CXCR4 蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05)。與高脂組相比,CUMS 情志刺激模型組血小板、主動(dòng)脈和海馬SDF-1 和CXCR4 蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.05),骨髓SDF-1 和CXCR4 蛋白表達(dá)水平顯著降低(P<0.05),見(jiàn)圖4。

    討 論

    目前,隨著“生物-心理-社會(huì)醫(yī)學(xué)”模式的發(fā)展,不良情緒如焦慮、抑郁等精神心理因素與ACS 的關(guān)系逐漸受到人們的重視?;趯?duì)ACS 患者精神心理問(wèn)題的長(zhǎng)期觀察研究和臨床實(shí)踐,我們發(fā)現(xiàn)不良的情志刺激是ACS 發(fā)病的重要因素,給予ACS 患者常規(guī)基礎(chǔ)用藥的同時(shí),重視精神心理治療和中醫(yī)疏肝理氣中藥的運(yùn)用,對(duì)緩解ACS 患者的癥狀和穩(wěn)定病情具有確切的療效[6-8]。本研究采用國(guó)際公認(rèn)的CUMS應(yīng)激方法,通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間、低強(qiáng)度的環(huán)境干擾、心理干預(yù)ApoE-/-小鼠,造成小鼠緊張、焦慮、抑郁等不良應(yīng)激反應(yīng)及異常的行為學(xué)狀態(tài),從而有效地復(fù)制了ApoE-/-小鼠情志刺激模型[5],且油紅 O 染色顯示CUMS組小鼠含脂泡沫細(xì)胞量高,主動(dòng)脈發(fā)生了最嚴(yán)重的AS 病變,說(shuō)明不良的情志刺激加速了小鼠動(dòng)脈硬化進(jìn)展。

    Figure 4.The effects of emotional stimulation on SDF-1 and CXCR4 protein expression in the platelets,aortas,hippocampus and bone marrow of mice.Mean±SD. n=10.*P<0.05 vs blank control group;△P<0.05 vs normal control group;▲P<0.05 vs high fat group.圖4 SDF-1和CXCR4蛋白在小鼠血小板、主動(dòng)脈、海馬及骨髓組織中的表達(dá)

    SDF-1 又稱(chēng) CXCL12,屬于 CXC 類(lèi)趨化因子亞家族成員,來(lái)源于骨髓微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞,作為造血干/祖細(xì)胞、單核淋巴細(xì)胞、巨核細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的化學(xué)引誘物[9],它不僅在炎癥及免疫監(jiān)督方面發(fā)揮重要作用,同時(shí)也調(diào)節(jié)著血小板祖細(xì)胞間的相互作用,驅(qū)動(dòng)血小板修復(fù)機(jī)制[10]。在超過(guò)100 000 例患者的全基因組關(guān)聯(lián)研究中發(fā)現(xiàn),編碼序列位于10q11 的SDF-1基因被認(rèn)為是冠心病的易感基因[3,11],血漿 SDF-1 水平是預(yù)測(cè)心肌梗死病人發(fā)生死亡、再梗、心衰等事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[4],與本研究中CUMS情志刺激小鼠骨髓SDF-1水平降低,血漿和血小板SDF-1水平升高結(jié)果一致。

    CXCR4 屬于G 蛋白偶聯(lián)趨化因子受體,可與其配體SDF-1 特異性結(jié)合,從而激活下游的信號(hào)分子如聯(lián)絡(luò)黏附激酶、蛋白激酶C、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶和核因子κB 等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[12]。大腦內(nèi)源性的趨化因子系統(tǒng),包括SDF-1/CXCR4,可作為大腦的第三大系統(tǒng),與神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽系統(tǒng)一起協(xié)同調(diào)節(jié)大腦功能[13]。海馬屬于邊緣系統(tǒng)重要結(jié)構(gòu)之一,參與心理應(yīng)激的神經(jīng)內(nèi)分泌和情緒調(diào)節(jié),與抑郁等不良情緒的發(fā)生有因果關(guān)系[14]。作為AS 的始動(dòng)環(huán)節(jié),SDF-1 可上調(diào)CXCR4 表達(dá),促進(jìn)單核細(xì)胞黏附、聚集至內(nèi)皮損傷部位,并進(jìn)一步遷移入內(nèi)膜下形成巨噬細(xì)胞,巨噬細(xì)胞又可攝取氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL),形成在AS 發(fā)生過(guò)程中起關(guān)鍵作用的泡沫細(xì)胞;SDF-1/CXCR4 也可引起ox-LDL 介導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞發(fā)生異常遷移與增殖,并抑制其凋亡,加速AS 的發(fā)生、發(fā)展,與本研究中CUMS 情志刺激干預(yù)的ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈和海馬中SDF-1和CXCR4水平升高的結(jié)果一致。

    鑒于AS 病變與血漿、血小板、骨髓和海馬中SDF-1/CXCR4 表達(dá)的相關(guān)性,本研究對(duì)ApoE-/-小鼠采取CUMS結(jié)合高脂飲食喂養(yǎng)建立AS易損斑塊動(dòng)物模型,以SDF-1/CXCR4的變化為主要觀察靶點(diǎn),研究表明情志刺激狀態(tài)下,CUMS 小鼠血漿、血小板、主動(dòng)脈和海馬中SDF-1 和CXCR4 的水平增加,骨髓中SDF-1 和CXCR4 的水平降低,與冷凍切片油紅O 染色顯示CUMS 小鼠主動(dòng)脈粥樣硬化程度最重的病理結(jié)果一致,由此可見(jiàn)CUMS 情志刺激引起了SDF-1/CXCR4 表達(dá)失衡,并且加速了AS 進(jìn)展,也進(jìn)一步證實(shí)了情志刺激是引起AS 斑塊不穩(wěn)定和破裂的重要因素之一。

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