調(diào)經(jīng)止痛膠囊牡丹皮提取工藝研究

郭秀麗

調(diào)經(jīng)止痛膠囊是由地黃、牡丹皮、白芍、川芎、炒梔子等十五味組成的膠囊，具有清熱涼血、止痛調(diào)經(jīng)之效。用于月經(jīng)不調(diào)，氣滯血瘀型痛經(jīng)等。經(jīng)文獻(xiàn)及《中華人民共和國藥典》檢索，牡丹皮[1]味苦、辛、微寒，歸心、肝、腎經(jīng)，功效清熱涼血，活血化瘀。用于熱入營(yíng)血，溫毒發(fā)斑，吐血衄血，夜熱早涼，無汗骨蒸，經(jīng)閉痛經(jīng)，跌撲傷痛，癰腫瘡毒。粉性較強(qiáng)，主要含丹皮酚揮發(fā)性成分，還含有芍藥苷等成分。現(xiàn)代藥理研究表明牡丹皮具有明顯的抗菌消炎、保肝護(hù)肝等作用，還有抗動(dòng)脈硬化、保護(hù)心肌、改善微循環(huán)、鎮(zhèn)痛等作用，主要是其中丹皮酚發(fā)揮藥理作用。本研究采用單因素實(shí)驗(yàn)法對(duì)丹皮酚揮發(fā)性成分主要采用水蒸氣蒸餾法提取工藝篩查，為后期制劑設(shè)計(jì)提供基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

R1002型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申順生物科技有限公司)；LC-20AT型高效液相色譜儀(日本島津)；HS3120型超聲波提取器(天津市恒奧科技發(fā)展有限公司)；AB135-S十萬分之一型天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；ATY124型萬分之一天平(日本島津)；HH型電熱恒溫水浴鍋(江蘇中大儀器科技有限公司)。

安徽亳州藥材市場(chǎng)購買的牡丹皮，經(jīng)醫(yī)院藥檢室確認(rèn)為正品。

中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110708-200506，丹皮酚對(duì)照品；分析純級(jí)別：萊陽市康德化工的鹽酸、氫氧化鈉、醋酸、乙醇等。色譜純級(jí)別：乙腈、甲醇、磷酸(美國TEDIA公司)等。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹皮酚含量測(cè)定方法液相色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇∶水(38∶62)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)274 nm，流速1.0 ml/min。對(duì)照品溶液的制備：取丹皮酚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml約含25 μg的溶液，即得。供試品溶液的制備：取牡丹皮干膏粉適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得[2]。

2.2 牡丹皮水蒸氣蒸餾提取工藝參數(shù)篩選牡丹皮中的丹皮酚為揮發(fā)性成分，具有清熱涼血、活血化瘀作用，須單獨(dú)提取保留，采用雙提法，對(duì)藥渣和水提液保留另作處理。提取揮發(fā)性成分最常用的方法就是水蒸氣蒸餾法[3,4]，操作簡(jiǎn)單方便，以丹皮酚提取率為指標(biāo)，采用單因素考察試驗(yàn)法對(duì)牡丹皮提取純化工藝主要參數(shù)進(jìn)行優(yōu)選。

2.2.1 溫浸時(shí)間對(duì)丹皮酚提取率的影響精密稱取牡丹皮粉末(過40目篩)100.00 g，加入14倍量的水，分別溫浸0、1 h、3 h、5 h、7 h進(jìn)行水蒸氣蒸餾，得1000 ml蒸餾液，混勻，取1 ml蒸餾液放置50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。參考第2.1項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定并計(jì)算丹皮酚提取率。浸泡對(duì)丹皮酚提取率有影響，浸泡3 h后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)對(duì)丹皮酚提取率的影響差別不大，可選擇浸泡3 h后，再進(jìn)行水蒸氣蒸餾。結(jié)果見表1。

表1 不同浸泡時(shí)間對(duì)丹皮酚提取效果的影響

2.2.2 料液比對(duì)丹皮酚提取率的影響精密稱取牡丹皮粉末(過40目篩)100.00 g，分別加入12倍、14倍、16倍、18倍量的水，溫浸 3 h進(jìn)行水蒸氣蒸餾，得1000 ml蒸餾液，混勻，取1 ml蒸餾液放置50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。參考2.1項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定并計(jì)算丹皮酚提取率。料液比為1∶14左右后，丹皮酚提取率繼續(xù)升高不明顯。當(dāng)料液比小于1∶14時(shí)，隨著加水量的增加丹皮酚提取率急劇增加；當(dāng)料液比大于1∶14時(shí)，隨著加水量的增加丹皮酚提取率無明顯變化。料液比過小，丹皮酚不能完全溶出，料液比高于14倍時(shí)，對(duì)有效成分溶出率效應(yīng)不大，從節(jié)約資源方面考慮，選擇料液比1∶14最佳。結(jié)果見表2。

表2 不同料液比對(duì)丹皮酚提取效果的影響

2.2.3 收集餾液倍量對(duì)丹皮酚提取率的影響精密稱取牡丹皮粉末(過40目篩)100.00 g，加入14倍量的水，溫浸 3 h進(jìn)行水蒸氣蒸餾，得800 ml蒸餾液，分段收集蒸餾液，收集3段，每段100 ml,蒸餾液總共收集1100 ml，混勻，取1 ml蒸餾液放置50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。參考2.1項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定并計(jì)算丹皮酚提取率。收集10倍量餾液丹皮酚的提取率己達(dá)78.99%，且已耗時(shí)較長(zhǎng)，繼續(xù)蒸餾對(duì)丹皮酚提取率影響不大，且考慮到牡丹皮中水溶性成分避免長(zhǎng)時(shí)間受熱，選擇收集10倍量蒸餾液講行后續(xù)處理。結(jié)果見表3。

表3 不同收集餾液倍數(shù)對(duì)丹皮酚提取效果的影響

2.2.4 加鹽量對(duì)丹皮酚提取率的影響精密稱取牡丹皮粉末(過40目篩)100.00 g，加入14倍量的水，溫浸 3 h進(jìn)行水蒸氣蒸餾，得1000 ml蒸餾液，用鹽析冷藏析晶法處理蒸餾液，蒸餾液中分別加入1.0%，1.5%，2.0%，2.5%，3.0%的氯化鈉，攪拌使溶解，靜置，冷藏(2～10 ℃)24 h，濾過，得丹皮酚結(jié)晶，減壓干燥(40～45 ℃，-0.08 MPa)，稱重。當(dāng)加鹽量為2.0%時(shí)，丹皮酚提取率達(dá)到最大值。當(dāng)加鹽量小于2.0%時(shí)，隨著加鹽量的增加丹皮酚提取率逐漸增加；當(dāng)加鹽量大于2.0%時(shí)，隨著加鹽量的增加丹皮酚提取率增加不明顯，因此，選擇加鹽量2.0%為最佳提取條件。結(jié)果見表4。

表4 加鹽量對(duì)丹皮酚提取效果的影響

綜合，最終丹皮酚的提取工藝為：加入14倍量的水，溫浸 3 h進(jìn)行水蒸氣蒸餾，收集10倍量餾分，餾出液加入2.0%的氯化鈉，于冰箱冷藏24 h，析晶，抽濾，干燥器干燥，稱重，即得丹皮酚結(jié)晶，提取水液及藥渣備用。

3 討論

揮發(fā)油是中藥牡丹皮中的主要藥用活性成分之一。提取中藥揮發(fā)油的方法有多種，其中以共水蒸餾最為常用，為提取植物揮發(fā)油的經(jīng)典方法，同時(shí)也是《中華人民共和國藥典》所載方法[5]。本研究采用水蒸氣蒸餾法提取丹皮酚，提取率較高，可滿足后續(xù)制劑的要求。通過查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，影響丹皮酚提取的因素有很多，主要有加水量、加鹽量、提取時(shí)間、浸泡時(shí)間、冷藏時(shí)間等。本研究設(shè)計(jì)了4個(gè)影響因素：溫浸時(shí)間、料液比、收集餾液倍量、加鹽量進(jìn)行考察。在提取分析的過程中，又發(fā)現(xiàn)流速在實(shí)際研究中并不易控制，主要因?yàn)殡S著提取容器內(nèi)水量減少，流速也相應(yīng)減慢；加一定量的氯化鈉或硫酸鈉均可提高丹皮酚的提取效果，而氯化鈉的效果更好一些，由此可見，牡丹皮水蒸氣蒸餾提取丹皮酚的影響因素較多。結(jié)果表明，丹皮酚的提取工藝是完全可行的，具有操作簡(jiǎn)單、可控等優(yōu)點(diǎn)。

經(jīng)過實(shí)驗(yàn)研究最終確定肝胃疏顆粒處方中牡丹皮的提取及丹皮酚包合工藝為：牡丹皮加入14倍量的水，溫浸3 h進(jìn)行水蒸氣蒸餾，收集10倍量餾分，餾出液加入2.0%的氯化鈉，于冰箱冷藏24 h，析晶，抽濾，干燥器干燥，稱重，即得丹皮酚結(jié)晶，提取水液及藥渣備用，為后續(xù)制劑打下基礎(chǔ)。