慢性乙型肝炎患者血清可溶性E-鈣黏蛋白表達(dá)與氧化應(yīng)激的相關(guān)性分析

許俊 謝國艷 黃敏

研究表明，與健康人相比，HBV相關(guān)的肝癌(HCC)患者會(huì)出現(xiàn)過度的氧化應(yīng)激[1]。然而，氧化應(yīng)激在HBV相關(guān)疾病中的病理生理相關(guān)性仍有待闡明。CDH1基因編碼的E-鈣黏蛋白(E-cadherin)可以與核轉(zhuǎn)錄因子-kB(NF-kB)結(jié)合，從而防止NF-kB核定位[2]。同時(shí)，促炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1和腫瘤壞死因子-α等介導(dǎo)的E-cadherin表達(dá)降低，并減弱E-cadherin介導(dǎo)的langerhans細(xì)胞與角質(zhì)形成細(xì)胞的粘附[3]。E-cadherin可以被蛋白酶分解，從而釋放出胞外N端可溶性片段，稱為可溶性E-cadherin(soluble E-cadherin，sE-cadherin)。既往研究認(rèn)為，sE-cadherin只能作為非功能性肽發(fā)揮作用[4]。同時(shí)，sE-cadherin可能是導(dǎo)致HBV相關(guān)肝病發(fā)生和發(fā)展的細(xì)胞因子之一，HCC患者的sE-cadherin水平明顯高于健康個(gè)體[5]。本研究評(píng)估了CHB患者血清sE-cadherin水平和體內(nèi)氧化應(yīng)激的相關(guān)性，進(jìn)一步揭示CHB的發(fā)病機(jī)制。

材料與方法

一、研究對(duì)象

研究對(duì)象為2018年1月至2019年12月在上海新華醫(yī)院崇明分院診斷為HBsAg陽性54例患者，入組前6個(gè)月內(nèi)未接受抗病毒治療。根據(jù)CHB的嚴(yán)重程度分為輕度16例，中度20例和重度18例，所有患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年更新版)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。排除合并有慢性丙型肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝病、代謝性肝病及藥物濫用者。選擇同期健康體檢者20名作為對(duì)照組。本研究根據(jù)《赫爾辛基宣言》的原則進(jìn)行，并獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象簽署知情同意書。

二、標(biāo)本的采集和測(cè)定

采集所有研究對(duì)象空腹靜脈血6 mL，分兩管。一管離心后分離血清，采用Au480全自動(dòng)生化分析儀(日本Olympus公司)測(cè)定血清中AST和ALT，然后用采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(試劑盒購于美國Quidel公司)檢測(cè)血清中sE-cadherin、谷胱甘肽(glutathione，GSH)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)和NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2，NOX2)，操作方法按說明書進(jìn)行；采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)測(cè)定試劑盒(WST-1法)測(cè)定血清SOD濃度(試劑盒購于南京建城生物工程研究所)。另一管加入1 mL TRIzol 后-80 ℃保存?zhèn)溆?。采用?shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR，RT-PCR)測(cè)定血漿中HBV DNA的水平。HBV DNA<2.0×103拷貝/mL為陰性。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；進(jìn)行Pearson分析；采用二分類Logistic回歸分析探討重度CHB的影響因素，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、研究對(duì)象一般臨床資料比較

各組研究對(duì)象的年齡和性別之間，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與對(duì)照組比較，各CHB組患者血清中AST、ALT、sE-cadherin、MDA、NOX2和HBV DNA增加，GSH和SOD濃度降低，且隨著病情的加重呈相應(yīng)的變化，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見表1。

表1 研究對(duì)象一般臨床資料比較(±s)

二、sE-cadherin與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性分析

血清中sE-cadherin與AST、ALT及HBV DNA呈正相關(guān)(r=0.591、0.538、0.675，P<0.05)。

三、sE-cadherin與氧化應(yīng)激指標(biāo)的相關(guān)性分析

血清中sE-cadherin與GSH和SOD 呈負(fù)相關(guān)(r=-0.499、-0.492，P<0.05)，與MDA和NOX2呈正相關(guān)(r=0.527、0.458，P<0.05)。

四、CHB嚴(yán)重程度的影響因素

將sE-cadherin、AST、ALT、HBV DNA、GSH、SOD、MDA和NOX2是否為重度CHB作為因變量進(jìn)行多因素分析，結(jié)果sE-cadherin、HBV DNA和NOX2是重度CHB的影響因素(P<0.05)。見表2。

表2 Logistic回歸分析CHB嚴(yán)重程度影響因素

討 論

越來越多的證據(jù)表明，血清sE-cadherin水平升高可能與全身炎癥反應(yīng)的嚴(yán)重程度以及多器官衰竭有關(guān)[7]。重癥急性胰腺炎患者血清中sE-cadherin濃度高于輕度急性胰腺炎患者，同時(shí)，sE-cadherin濃度與炎癥和器官損傷的標(biāo)志物成正比[8]。研究顯示，sE-cadherin在肝炎組織中高表達(dá)，并且與炎癥活動(dòng)程度甚至肝纖維化相關(guān)，但尚無研究CHB患者中sE-cadherin與氧化應(yīng)激之間的關(guān)系[9]。AST和ALT可以作為HBV誘導(dǎo)的肝臟炎癥和疾病進(jìn)展的標(biāo)志物[10]。本研究中，CHB患者的sE-cadherin濃度高于對(duì)照組，并且sE-cadherin水平與AST和ALT的水平呈正相關(guān)。血清中的HBV DNA水平與肝臟疾病的進(jìn)展和組織病理學(xué)分級(jí)之間密切相關(guān)[11]。本研究結(jié)果顯示sE-cadherin與HBV DNA水平呈正相關(guān)。因此，sE-cadherin對(duì)慢性HBV感染的臨床預(yù)后具有預(yù)測(cè)價(jià)值。

HBV介導(dǎo)的ROS可以誘導(dǎo)慢性感染和炎癥，從而導(dǎo)致嚴(yán)重的肝臟疾病[12]。研究證實(shí)，脂質(zhì)氧化與HBV相關(guān)疾病的進(jìn)展有關(guān)，MDA、GSH和SOD由于其穩(wěn)定性而通常被用作脂質(zhì)氧化標(biāo)志物[13]。NOX2是人類呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的NF-κB抑制蛋白(IκBα)磷酸化過程中的重要調(diào)節(jié)劑，可抑制甲型流感病毒的復(fù)制，進(jìn)而改善由甲型流感病毒引起的肺部炎癥反應(yīng)[14]。重要的是，血清NOX2是HBV相關(guān)并發(fā)癥進(jìn)展的一個(gè)重要指標(biāo)。本研究中，CHB患者的GSH和SOD水平低于健康者，與sE-cadherin呈負(fù)相關(guān)；CHB患者的MDA和NOX2高于健康者，與sE-cadherin呈正相關(guān)；同時(shí)，sE-cadherin對(duì)CHB嚴(yán)重程度具有診斷價(jià)值。

綜上所述，CHB患者血清中sE-cadherin濃度升高，sE-cadherin與氧化應(yīng)激呈正相關(guān)，可能是導(dǎo)致CHB相關(guān)肝病發(fā)生和發(fā)展的細(xì)胞因子之一。