大白菜中氟氯氰菊酯殘留的快速測(cè)定及方法評(píng)估

譚慧林, 金永生, 余 琪, 牛貴洋, 包東東, 陳海元, 張志東

(1.阿克蘇地區(qū)食品安全檢測(cè)中心，新疆阿克蘇 843000；2.阿克蘇地區(qū)檢驗(yàn)檢測(cè)中心，新疆阿克蘇 843000；3. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所/新疆特殊環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830091)

0 引 言

【研究意義】大白菜為2年生草本，十字花科蕓薹屬常見蔬菜，其常見的蟲害主要有小菜蛾[1]、蚜蟲、白粉虱、菜螟等[2, 3]。氟氯氰菊酯是一類化學(xué)合成類殺蟲劑，具有觸殺、胃殺等作用，特別適用于防治大白菜生產(chǎn)過(guò)程中的常見害蟲。氟氯氰菊酯屬于殘效期比較短的農(nóng)藥，但隨著害蟲對(duì)該類農(nóng)藥抗藥性日漸增加，導(dǎo)致用藥量不斷增加，其殘留量也隨之變大。對(duì)加大氟氯氰菊酯農(nóng)藥殘留篩查，及時(shí)有效進(jìn)行相關(guān)重大食品安全預(yù)警、安全評(píng)估有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前，國(guó)內(nèi)外氟氯氰菊酯農(nóng)藥殘留定量測(cè)定方法主要有氣相色法[4-9]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀法[10-15]?？鞕z技術(shù)及相關(guān)試劑盒因其快速、高效、簡(jiǎn)便、性價(jià)比高的特點(diǎn)，特別適合食品的快速抽查，但由于相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、易仿造等，導(dǎo)致快檢生產(chǎn)廠家較多，產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊[16-19]，在相關(guān)產(chǎn)品使用前有必要進(jìn)行對(duì)相關(guān)快檢產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)估，保證產(chǎn)品的可靠性，確認(rèn)相關(guān)產(chǎn)品在監(jiān)督機(jī)構(gòu)的快檢篩查中的適用應(yīng)性。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[20]作為食品快檢的綱領(lǐng)性文件，對(duì)食品快速檢測(cè)方法的目的、適用范圍、評(píng)價(jià)指標(biāo)、評(píng)價(jià)方法、評(píng)價(jià)步驟、 評(píng)價(jià)結(jié)果及報(bào)告出具等列出了指導(dǎo)性要求?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】國(guó)內(nèi)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)涉及氟氯氰菊酯農(nóng)藥殘留的檢測(cè)主要依照NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》、GB/T 5009.146-2008《植物性食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留量的測(cè)定》進(jìn)行檢測(cè)，然而，在食用農(nóng)產(chǎn)品安全抽檢工作時(shí)，按照抽檢流程和檢測(cè)要求，耗時(shí)較長(zhǎng)，當(dāng)氟氯氰菊酯殘留不合格時(shí)，食品安全預(yù)警和產(chǎn)品召回往往效果不理想。研究菊酯快檢試劑盒在大白菜氟氯氰菊酯農(nóng)藥殘留中適用性評(píng)價(jià)。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】以NY/T 761-2003《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》方法作為參比方法，檢測(cè)阿克蘇市面大白菜中的氟氯氰菊酯殘留，進(jìn)行快檢菊酯快檢試劑盒的靈敏度、特異性、假陽(yáng)性率和假陰性率等指標(biāo)的評(píng)價(jià)，為大白菜中的氟氯氰菊酯快速篩查工作提供技術(shù)借鑒。

1 材料與方法

1.1 材 料

大白菜分別隨機(jī)購(gòu)自阿克蘇市主要菜市場(chǎng)及周邊菜店，均為地產(chǎn)大白菜。

氟氯氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品(濃度為100 mg/mL，有效期至202008)，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司；丙酮(色譜純)、正己烷(色譜純)，均來(lái)自sigma公司。

Agilent 7890B氣相色譜儀(配電子捕獲檢測(cè)器)，石英毛細(xì)管色譜柱DB-1(30 m×0.32 mm×0.25 μm)，美國(guó)安捷倫公司；NNW弗羅里矽柱, 上海納諾微新材料科技有限公司； IKA T18 digital高速勻漿機(jī),IKA MS3 basic渦旋儀, 艾卡(廣州)儀器設(shè)備有限公司；EFAA-DC-24-RT氮吹儀, 上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；菊酯快檢試劑盒，廣東達(dá)元綠洲食品安全科技股份有限公司。

1.2 方 法

1.2.1 樣品預(yù)處理

取大白菜樣品2 kg，切取可食部分，用干凈紗布輕輕擦去表面泥土及附作物，采用對(duì)角分割法，取對(duì)角部分，將其勻漿均勻，制成待測(cè)樣，放入容器中，備用。

1.2.2 氣相色譜

按照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的測(cè)定》所要求方法，采用氣相色譜測(cè)定氟氯氰菊酯。

工作條件：載氣氮?dú)饬髁?.00 mL/min，尾吹氣流量 30.0 mL/min；初始柱溫70℃，保持1.0 min，隨后以20℃/min升至270℃，保持15 min；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度300℃；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1 μL。

1.2.3 快檢

按照試劑盒說(shuō)明書要求進(jìn)行操作，取預(yù)處理樣品5 g，加入10 mL提取液，上下翻轉(zhuǎn)50次，過(guò)層析柱，棄去提取液，用1 mL洗脫液洗層析柱，收集洗脫液，加顯色液A、顯色液B，上下翻轉(zhuǎn)10次，反應(yīng)1 min，觀察顏色變化。

1.3 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[20]要求評(píng)價(jià)試劑盒的顯著性差異、靈敏度、特異性、假陰性率、假陽(yáng)性率、相對(duì)準(zhǔn)確度，其結(jié)果計(jì)算，使用Mcirosoft Excel 2010，性能指標(biāo)計(jì)算方法。表1

表1 快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算Table 1 The calculation of properties indexes of the rapid detection method

2 結(jié)果與分析

2.1 市面大白菜氟氯氰菊酯殘留

研究表明，采用快檢方法檢測(cè)隨機(jī)購(gòu)自阿克蘇主要菜市場(chǎng)及周邊菜店中的大白菜，未檢出氟氯氰菊酯殘留。表2

按照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法NY/T 761-2003《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》進(jìn)行大白菜樣品中氟氯氰菊酯殘留檢驗(yàn)。此次隨機(jī)購(gòu)自阿克蘇市主要菜市場(chǎng)及周邊菜店中的大白菜也未檢出氟氯氰菊酯殘留。表3

表2 快檢方法檢測(cè)大白菜中氟氯氰菊酯Table 2 Results of cynuthrin in Chinese cabbage by the rapid detection method

表3 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)大白菜中氟氯氰菊酯Table 3 Results of cynuthrin in Chinese cabbage by the standard method

2.2 氟氯氰菊酯加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

將實(shí)驗(yàn)樣品加標(biāo)不同濃度的氟氯氰菊酯，按照NY/T 761-2003《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》檢測(cè)樣品中氟氯氰菊酯濃度，計(jì)算氟氯氰菊酯的加標(biāo)回收率。研究表明，在試驗(yàn)中，大白菜樣品中加標(biāo)的回收率在80%～102%，尤其當(dāng)加標(biāo)濃度高于0.1 mg/kg，其回收率均高于90%以上，符合檢測(cè)分析要求。表4

表4 不同氟氯氰菊酯加標(biāo)水平的回收率Table 4 Average recovery in different spiked levels for cynuthrin by the standard method

2.3 快檢試劑盒檢驗(yàn)氟氯氰菊酯的評(píng)估

將實(shí)驗(yàn)樣品加標(biāo)不同濃度的氟氯氰菊酯，并利用快檢試劑盒進(jìn)行樣品檢測(cè)，重復(fù)3次，試驗(yàn)結(jié)果與快檢實(shí)驗(yàn)比色卡進(jìn)行濃度判斷。分析試劑盒在不同濃度氟氯氰菊酯時(shí)靈敏性和準(zhǔn)確性。表4，表5，圖1

加標(biāo)樣品按照菊酯處理，添加顯色劑測(cè)定時(shí)，當(dāng)氟氯氰菊酯濃度為0.4 mg/kg時(shí)開始顯色，加標(biāo)濃度與菊酯快檢試劑盒檢驗(yàn)結(jié)果。 表6

表5 不同氟氯氰菊酯添加標(biāo)水平的快檢結(jié)果Table 5 Test results in different spiked levels for cynuthrin by the rapid detection method

通過(guò)使用菊酯速測(cè)盒測(cè)定大白菜中的氟氯氰菊酯，根據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》對(duì)此試劑盒進(jìn)行評(píng)估，并對(duì)其檢測(cè)結(jié)果與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法統(tǒng)計(jì)進(jìn)行分析，研究表明，此快檢試劑盒的靈敏度為75%，特異性為100%、假陰性率25%，假陽(yáng)性率為0，顯著性差異為58.01，相對(duì)準(zhǔn)確度77.78%。表6

表6 菊酯快檢試劑盒測(cè)定氟氯氰菊酯的評(píng)估分析Table 6 Estimation and analysis of rapid detection method for cynuthrin determination

3 討 論

試劑盒可以較快的完成大白菜中氟氯氰菊酯的現(xiàn)場(chǎng)檢查。根據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》要求，快速檢測(cè)方法應(yīng)與方法中規(guī)定的參比方法進(jìn)行一致性比較。與參比方法一致性分析統(tǒng)計(jì)，以卡方表示。當(dāng)顯著性差異>3.84表示參比方法與快檢方法的陽(yáng)性確認(rèn)比率在95%的置信區(qū)間內(nèi)有顯著性差異。試劑盒根據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》附表計(jì)算此試劑盒的顯著性差異為58.01，表示2種方法的陽(yáng)性確認(rèn)比率在95%的置信區(qū)間內(nèi)有顯著性差異，相對(duì)準(zhǔn)確度即菊酯快檢方法與參比方法的一致性分析和濃度檢測(cè)趨勢(shì)情況綜合評(píng)價(jià)77.78%。

目前，對(duì)于快檢試劑盒評(píng)估過(guò)中濃度的水平設(shè)置沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。研究發(fā)現(xiàn)濃度水平的不同設(shè)定，評(píng)價(jià)結(jié)果也存在差異。謝俊平等[21]測(cè)得菊酯的陽(yáng)性符合率為 85.7%，陰性符合率為 97.8%，張威等[22]評(píng)價(jià)嘔吐毒素試劑盒4個(gè)水平4種試劑盒，假陽(yáng)性率都在33%～38%，而賈麗華等[23]設(shè)置3個(gè)水平評(píng)估17個(gè)嘔吐毒素試劑盒，試劑盒的假陽(yáng)性率基本為0，所以不同的檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)設(shè)置的濃度水平不一樣。

所用菊酯快檢試劑盒為半定量試劑盒，在配備顯色卡的同時(shí)，可配有專用儀器。由于專用儀器較為昂貴，在實(shí)際操作中僅用顯色卡進(jìn)行了判讀。在此次所用菊酯快檢試劑盒測(cè)定氟氯氰菊酯時(shí)，氟氯氰菊酯最低顯色濃度為0.2 mg/kg，而在實(shí)際檢測(cè)中氟氯氰菊酯濃度為0.4 mg/kg樣品方顯色，一方面可能肉眼判斷存在判讀不準(zhǔn)確，部分試劑盒說(shuō)明書和實(shí)際測(cè)定存在出入。在使用通過(guò)評(píng)估分析，該試劑盒可用于測(cè)定氟氯氰菊酯限度大于0.4 mg/kg的蔬菜，如大白菜、韭菜、結(jié)球甘藍(lán)等蔬菜，而不適合花椰菜、番茄等蔬菜，具體適用性可參考國(guó)標(biāo)GB 2763-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》。表7

表7 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中不同蔬菜中氟氯氰菊酯最大殘留限量Table 7 Maximum residue limits for cynuthrin of vegetables in the national standards

4 結(jié) 論

根據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761-2003《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》規(guī)定，采用氣相色譜儀法對(duì)隨機(jī)購(gòu)自阿克蘇市主要菜市場(chǎng)及周邊菜店地產(chǎn)大白菜中均未檢出氟氯氰菊酯。

通過(guò)樣品加標(biāo)，以行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)為參比方法，對(duì)此次試驗(yàn)所用菊酯快檢試劑盒進(jìn)行了評(píng)估，發(fā)現(xiàn)該快檢試劑盒的最低檢出限為0.4 mg/kg，靈敏度75%、假陽(yáng)性率0，假陰性率25%，特異性100%，顯著性差異58.01,2種方法的陽(yáng)性確認(rèn)比率在95%的置信區(qū)間內(nèi)有顯著性差異，此菊酯快檢試劑盒與參比方法的一致性分析和濃度檢測(cè)趨勢(shì)情況為77.78%。

大白菜中最大殘留限量為0.5 mg/kg，試劑盒滿足大白菜中氟氯氰菊酯的殘留限量要求，作為大白菜中氟氯氰菊酯殘留的快速篩查，也可以作為韭菜、結(jié)球甘藍(lán)等蔬菜，操作簡(jiǎn)單，快速。