血紅蛋白電泳聯(lián)合地貧基因檢測在地中海貧血診斷中的應(yīng)用

李愛麗，陳瑞芬，吳麗娜，黃麗芳

廣東省韶關(guān)市第一人民醫(yī)院檢驗科，廣東 韶關(guān) 512000

地中海貧血是東南亞地區(qū)及我國南方地區(qū)最常見、危害最大的遺傳病，常以易疲勞和輕度貧血為主要臨床表現(xiàn)，極易誤診或漏診［1］?，F(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)尚缺乏特效診斷技術(shù)，并且預(yù)后效果不理想。由于珠蛋白生成障礙性貧血多導(dǎo)致甲狀腺、腎上腺等功能下降，嚴(yán)重者多因繼發(fā)感染、心力衰竭而死亡。因此，及早進(jìn)行地中海貧血篩查，并且融合一系列的有效方式進(jìn)行診斷，以此控制地中海貧血新生兒發(fā)生率是目前臨床上研究的重點(diǎn)［2］。但關(guān)于血紅蛋白電泳聯(lián)合地貧基因檢測在地中海貧血診斷中的應(yīng)用研究鮮見相關(guān)報道。本研究旨在深入探討血紅蛋白電泳聯(lián)合地貧基因檢測在地中海貧血診斷中的應(yīng)用療效，進(jìn)一步為地中海貧血患者提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象

隨機(jī)收集2017年3月—2019年2月在韶關(guān)市第一人民醫(yī)院診治的210例地中海貧血，按隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組，每組為105例，同期入院體檢患者210例為（陰性對照組）。其中觀察組：男63例，女42例；年齡22～58歲，平均年齡（32.93±8.11）歲；病程1～53年，平均病程（27.32±8.57）年。對照組：男63例，女43例；年齡25～58歲，平均年齡（31.23±8.43）歲；病程1～51年，平均病程（26.64±8.29）年。兩組患者的基本情況相較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），有可比性。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）結(jié)合臨床特點(diǎn)及實驗室檢查（血常規(guī)檢查、血涂片檢查、地貧基因診斷等）已被證實為地中海貧血［3］；（2）年齡20～59歲，性別不限；（3）經(jīng)院倫理委員會審核同意研究，所有患者均知曉，愿意積極配合檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）患有精神意識障礙疾病；（2）伴有語言意識障礙及惡性腫瘤者（3）臨床資料不完整者。

1.3 治療方法

（1）對照組：只采用血紅蛋白電泳方法，在患者早晨空腹的狀態(tài)下抽取其外周靜脈血2 ml，作為檢測標(biāo)本，添加至EDTA抗凝管中。采用離心機(jī)（白洋）按照4 000 r/min的速度離心5 min，去除上層血漿采取0.9%氯化納注射液對10μL紅細(xì)胞洗滌3次，將洗滌的紅細(xì)胞取出后與130 μL溶血液混合均勻。在室溫環(huán)境下予以培育5 min待測，用全自動血紅蛋白血泳儀（海倫娜Spife-3000）相關(guān)技術(shù)檢測HbA2、HbA及HbF的血紅蛋白指標(biāo)。（2）觀察組：則在血紅蛋白電泳基礎(chǔ)上加用地貧基因檢測治療，抽取外周血2～3 ml，添加至EDTA抗凝管中。對全血標(biāo)本中的DNA主要使用多重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)予以檢測，主要檢測α-地中海貧血缺失型基因（3種）和β-地中海貧血基因突變點(diǎn)（17種）。

1.4 試劑及儀器

全血DNA提取和地中海貧血基因檢測選取深圳亞能生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒，操作嚴(yán)格按照說明書。PCR擴(kuò)增儀（廣東珠海黑馬，Hema9600）,恒溫雜交儀（深圳亞能生物技術(shù)有限公司，型號：YN-H16)。

1.5 觀察指標(biāo)

（1）觀察α-地中海貧血、β-地中海貧血患者的總有效檢測率；（2）比較三組不同標(biāo)本中血紅蛋白指標(biāo)HbA2、HbA及HbF。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

通過SPSS 23.0對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，其血紅蛋白指標(biāo)等以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示計量資料，行t檢驗，α-地中海貧血、β-地中海貧血等以例數(shù)和百分比（%）表示計數(shù)資料，行χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組不同地貧基因診斷

觀察組α-地中海貧血、β-地中海貧血的總有效檢測率（96.19%）明顯高于對照組（47.61%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=61.310,P＜0.001）。

2.2 不同標(biāo)本中血紅蛋白指標(biāo)

α-地中海貧血組和β-地中海貧血組HbF的含量明顯高于陰性對照組（P＜0.05）；β-地中海貧血組HbA2的含量高于陰性對照組（P＜0.05），并且陰性對照組HbA的含量均明顯高于α-地中海貧血組和β-地中海貧血組（P＜0.05），見表1。

3 討論

地中海貧血廣泛分布于我國南方地區(qū)，人群發(fā)生率高達(dá)10%以上，以廣東、廣西為主。地貧主要分為α-地中海貧血和β-地中海貧血兩種，以α-地中海貧血較常見。本病的發(fā)生是由于某一種或幾種珠蛋白肽鏈合成障礙，以致珠蛋白肽鏈合成失平衡而導(dǎo)致的溶血性貧血，本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示，地貧在我國南方具有較高的發(fā)病率，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，甚至危及生命安全［4］。因此，找尋合適的檢測方法對疾病診斷十分關(guān)鍵。

表1 各組不同標(biāo)本中血紅蛋白指標(biāo)的對比（±s） %

表1 各組不同標(biāo)本中血紅蛋白指標(biāo)的對比（±s） %

注：與陰性對照組比較，a P＜0.05

組別α-地中海貧血組(n=105)β-地中海貧血組(n=105)陰性對照組(n=105)HbA2 2.56±0.42 6.55±1.29a 3.75±0.76 HbA 95.04±25.48a 92.49±22.15a 97.15±23.15 HbF 2.45±0.42a 6.89±1.58a 2.15±0.29

隨著醫(yī)療水平的提高及醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，地中海貧血的檢測技術(shù)不斷完善，使用簡單、方便的血液學(xué)方法中的血紅蛋白電泳進(jìn)行地中海貧血的篩查，但單獨(dú)使用對于輕度地中海貧血會出現(xiàn)漏診的情況。隨著多重PCR技術(shù)逐漸走向成熟，所以采用聯(lián)合地貧基因明確診斷，其效率較高，且準(zhǔn)確率高，篩查范圍廣，有利于臨床中地中海貧血基因的篩查，國內(nèi)外現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于各級醫(yī)院。眾多研究指出［5］，在篩查實施過程中，血紅蛋白電泳聯(lián)合地貧基因檢測在地中海貧血診斷中至關(guān)重要。故本次研究筆者選取血紅蛋白電泳聯(lián)合地貧基因檢測治療結(jié)果中顯示，觀察組患者的α-地中海貧血、β-地中海貧血的總有效檢測率比對照組更顯著，并且α-地中海貧血者、β-地中海貧血者及陰性對照組患者的HbA2、HbF及HbA濃度差異均具有顯著性差異，由此可知，使用血紅蛋白電泳聯(lián)合地貧基因檢測對地中海貧血患者檢出率作用顯著，與夏六和等［6］研究結(jié)果一致。

綜上所述，地中海貧血患者診斷中，實施血紅蛋白電泳聯(lián)合地貧基因檢測診斷效果確切，特別是早期診斷地貧具有重大臨床意義，具有一定的臨床應(yīng)用推廣價值。