HPLC-MS/MS 測定復(fù)合包裝材料中2,4-二氨基甲苯

張延超，劉 帥，張玉婷，吳 燕

（天津市藥品檢驗(yàn)研究院，天津 300070）

藥品包裝材料與結(jié)構(gòu)形式，尤其是直接接觸藥品的包裝材料，對(duì)保證藥品穩(wěn)定性起重要作用。由于藥包材與藥品的接觸時(shí)間可長達(dá)整個(gè)藥品的有效期，因此對(duì)藥包材生物安全性的重視應(yīng)等同于對(duì)藥品本身安全性的重視［1，2］。復(fù)合包裝材料由于具有良好阻氧性、阻水性與高阻滲性，更好地滿足藥品包裝的特定需求，因而廣泛用于藥用包裝［3，4］。由于這種材料的工藝特點(diǎn)，需要在幾層之間添加膠粘劑，形成穩(wěn)定的復(fù)合材料。膠粘劑的主要成分為芳香族聚氨酯膠粘劑，通常會(huì)殘留一些游離的芳香族異氰酸酯。當(dāng)這種游離的芳香族異氰酸酯接觸空氣中的水時(shí)，就會(huì)水解而生成2，4-二氨基甲苯［5，6］。2，4- 二氨基甲苯具有較強(qiáng)的致癌性，與內(nèi)容物接觸之后，容易遷移到內(nèi)容物中［7］。人體服用后可能會(huì)出現(xiàn)惡心、嘔吐、頭痛、失眠、溶血性貧血等癥狀，嚴(yán)重者可致癌，對(duì)人體健康造成危害［5］。

現(xiàn)有國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)主要通過使用氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法兩種方法測定2，4-二氨基甲苯含量。但這類方法需要衍生化前處理，操作繁瑣、檢驗(yàn)周期長、檢驗(yàn)成本高，同時(shí)有毒有害試劑的使用對(duì)實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境都會(huì)造成傷害［7,8］。因此，有必要開發(fā)出更加快速、簡便、環(huán)保的方法檢測復(fù)合包裝材料中2，4-二氨基甲苯的含量。

本文建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定復(fù)合包裝材料中的2，4-二氨基甲苯，既能降低基質(zhì)的干擾，又能提供高選擇性、高靈敏度和高精確度的分析。同時(shí)此方法無需衍生化前處理，從而簡化試驗(yàn)前處理過程，縮短檢驗(yàn)周期，降低檢驗(yàn)成本，避免有毒有害試劑對(duì)檢驗(yàn)人員和環(huán)境的傷害。

1 儀器、試劑與材料

儀器：島津LC/MS-8050 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，Solution 色譜工作站；HHS 型電熱恒溫水浴鍋HBYQ；Mill Advantage A10 純水儀。試劑：乙腈（MERK，色譜純）、甲酸（SIGMA，色譜純）、超純水。對(duì)照品：2，4-二氨基甲苯（Dr Ehrenstorfer，純度：99.8%，批號(hào)G150549）。材料：移液器、量瓶、2 ml 樣品瓶、濾膜（0.22 μm）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18（50 mm×2.1 mm，1.8 μm），PN 959757-902；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液（60%）-乙腈（40%）；進(jìn)樣量：2 μl ；柱溫：35 ℃；流速：0.25 ml/min。離子源：ESI+，正離子掃描；離子源接口電壓：4.5 kV；霧化氣：氮?dú)?.0 L/min；干燥氣：空氣10 L/min；碰撞氣：氬氣；脫溶劑管溫度：250 ℃；加熱模塊溫度：400 ℃；掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；MRM 參數(shù)見表1。

表1 2,4-二氨基甲苯MRM 參數(shù)

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取2，4-二氨基甲苯對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置10 ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為2，4-二氨基甲苯儲(chǔ)備液，濃度約為1 mg/ml。用水逐級(jí)稀釋配制濃度為1.0、2.0、5.0、20、50和100 ng/ml 的系列對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 將樣品剪碎，取2 g，精密稱定，至250 ml 磨口硼硅玻璃燒瓶中，精密加入100 ml 水，煮沸回流1 h，冷卻后加水補(bǔ)足重量，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取對(duì)照品和供試品溶液按色譜條件測定。色譜圖見圖1。

圖1 對(duì)照品（A）供試品（B）色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 取“2.2.1”項(xiàng)下系列對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)（X），以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），得標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程為Y=11 466.523 7X-3 486.934 1（r=0.999 9），結(jié)果表明，2，4-二氨基甲苯在1.0～100.0 ng/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 取2，4-二氨基甲苯對(duì)照品濃度為5 和20 ng/ml 的溶液，分別重復(fù)測定6 次。結(jié)果峰面積的RSD 分別為0.86%和0.59%（n=6）。表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2，4-二氨基甲苯對(duì)照品濃度為5 和20 ng/ml 的溶液，分別在室溫放置0、12 和24 h，進(jìn)行測定。結(jié)果峰面積RSD 分別為0.63%和0.85%（n=3）。表明對(duì)照品溶液室溫放置24 h 穩(wěn)定。

2.7 檢出限 取2，4-二氨基甲苯儲(chǔ)備液用水逐級(jí)稀釋，經(jīng)測定，信噪比（S/N）為2 ～3 時(shí)，溶液濃度為0.2 ng/ml，確定2，4-二氨基甲苯檢出限（LOD）為10 ng/g。

2.8 定量限 取2，4-二氨基甲苯儲(chǔ)備液用水逐級(jí)稀釋，經(jīng)測定，信噪比（S/N）為10 時(shí)，溶液濃度為0.5 ng/ml，確定2，4-二氨基甲苯定量限（LOQ）為25 ng/g。

2.9 回收率試驗(yàn) 將樣品剪碎，取2 g，精密稱定，置250 ml 磨口硼硅玻璃燒瓶中，分別加入標(biāo)準(zhǔn)中間液（10 μg/ml）200 μl，精密加入100 ml 水，煮沸回流1 h，冷卻后加水補(bǔ)足重量，經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，同一濃度平行制備6 份，計(jì)算回收率。結(jié)果2，4-二氨基甲苯平均回收率為84.11%，RSD 為1.68%（n=6）。見表2。

表2 2,4-二氨基甲苯回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.10 重復(fù)性試驗(yàn) 取回收率試驗(yàn)制備溶液，平行制備6 份，結(jié)果顯示RSD 為0.59%（n=6）。

2.11 樣品提取試驗(yàn) 將供試品溶液測得峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果4 批樣品均未檢出2,4-二氨基甲苯，見表3。

表3 復(fù)合包裝材料2，4-二氨基甲苯提取試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

本研究建立了用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)復(fù)合包裝材料中2，4- 二氨基甲苯的含量的檢測方法。試驗(yàn)的線性系數(shù)、精密度、穩(wěn)定性、回收率、重復(fù)性等技術(shù)指標(biāo)滿足相關(guān)分析檢測要求。本方法具有高靈敏度、高精確度的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)此方法無需衍生化前處理，從而簡化試驗(yàn)前處理過程。便于市場監(jiān)管，保障人民健康。