非酒精性脂肪肝病小鼠模型的研究進(jìn)展

蔡宗余,李 政

(廣東藥科大學(xué) 藥學(xué)院,廣東 廣州 510006)

0 引言

非酒精性脂肪肝病(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一種嚴(yán)重危害人類健康的慢性代謝性疾病。據(jù)流行病學(xué)研究表明，目前全球已有超過25%的成年人患有NAFLD[1]。近年來，隨著人們生活方式和飲食習(xí)慣的改變，肥胖和2型糖尿病的發(fā)生率隨之升高，二者與NAFLD發(fā)生密切相關(guān)。NAFLD的發(fā)病率呈持續(xù)增高趨勢(shì)，成為許多國家和地區(qū)常見的慢性肝臟疾病之一[2]。NAFLD是出現(xiàn)于非嗜酒的患者一種綜合征，其主要特點(diǎn)表現(xiàn)為肝細(xì)胞內(nèi)脂肪過度堆積，導(dǎo)致肝細(xì)胞大泡性脂肪性變，帶來一系列惡化，包括脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化，甚至死亡的發(fā)生等[3]。NAFLD 是由單純的肝脂肪性變性(Nonalcoholic fatty liver，NAFL)發(fā)展為非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis，NASH)，嚴(yán)重時(shí)可發(fā)展為肝纖維化，肝硬化，甚至肝細(xì)胞癌的連續(xù)疾病譜[4]。目前，對(duì)NAFLD的治療仍是一個(gè)全球性的嚴(yán)峻課題，由于其病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，仍未完全闡明。而NAFLD的發(fā)病機(jī)制的研究與治療藥物的篩選，在很大程度上依賴于人類NAFLD病理機(jī)制相似模型的建立和應(yīng)用。截至目前，雖有幾篇關(guān)于NAFLD小鼠模型的綜述[5-7]，但仍缺乏對(duì)NAFLD小鼠模型較為全面系統(tǒng)的綜述，且對(duì)小鼠在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)的病理特征鮮有涉及。此外，隨著近兩年大量的NAFLD臨床研究陸續(xù)開展，國內(nèi)外迅速掀起了研究熱潮，也不斷構(gòu)建出能更好地模擬人類NAFLD病理特征的小鼠模型，這些新構(gòu)建的小鼠模型將極大促進(jìn)NAFLD相關(guān)研究的開展，亟需予以綜述以便研究人員運(yùn)用推廣。因此，本文對(duì)近年來各研究機(jī)構(gòu)報(bào)道的NAFLD小鼠模型研究進(jìn)展進(jìn)行全面總結(jié)綜述。

1 營(yíng)養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝模型

1.1 高脂飲食(High fat diet，HFD)模型

高脂飲食模型是一種常見擾亂脂質(zhì)代謝，導(dǎo)致脂肪肝變性，誘導(dǎo)NAFLD發(fā)生的造模方法。高脂飲食通常選用含有60%脂肪的高脂飼料，C57BL/6小鼠由于對(duì)高脂飼料比較敏感，容易形成高脂血癥，故而是常用的復(fù)制NASH模型的動(dòng)物。C57BL/6小鼠用高脂飲食喂養(yǎng)10-12 w后，出現(xiàn)高脂血癥、高胰島素血癥和葡萄糖耐量異常的變化。長(zhǎng)期喂養(yǎng)高脂飲食34-36 w后，Makoto Ito等[8]觀察到小鼠血漿肝酶水平異常，即丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)水平升高。長(zhǎng)期喂養(yǎng)80 w后，出現(xiàn)典型的脂肪變性、肝細(xì)胞損傷、肝小葉炎癥和纖維化[9]。與其他小鼠模型不同，喂食高脂飲食的小鼠模型模擬了人類NAFLD的組織病理學(xué)和發(fā)病機(jī)制，因?yàn)樗哂蠳AFLD患者中觀察到的主要特征，包括肥胖和胰島素抵抗。因此，該模型適于評(píng)估減重、低脂飲食及改善胰島素抵抗的治療藥物。高脂飲食模型也有一定的局限性，如造模耗時(shí)較長(zhǎng)(通常需要12-16 w)，而且隨著動(dòng)物種系和飲食配方的不同呈現(xiàn)出多樣性。

1.2 致動(dòng)脈粥樣硬化飲食(Atherogenic diet，ATH)模型

ATH含有0.5%膽酸鹽和1.25%的膽固醇，通常應(yīng)用于小鼠以構(gòu)建粥樣硬化斑塊模型。Naoto Matsuzawa 等[10]研究發(fā)現(xiàn)，ATH可致C57BL/6小鼠出現(xiàn)血脂異常。與此同時(shí)，在6-24 w內(nèi)，ATH還引發(fā)了NASH，且造模時(shí)間越長(zhǎng)，病理狀態(tài)越嚴(yán)重，如出現(xiàn)肝細(xì)胞大泡性脂肪性變，炎癥以及肝纖維化等。此外，小鼠在6 w后也表現(xiàn)出丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總膽固醇和甘油三酯水平升高[10,11]。然而，ATH并不致體重增加，也沒有明顯的胰島素抵抗現(xiàn)象，因此，與人類NASH病理機(jī)制有一定區(qū)別，成為該模型的缺陷。

1.3 高脂+致動(dòng)脈粥樣硬化飲食(High fat +Atherogenic diet，HFD+ATH)模型

HFD+ATH是在高脂飲食的基礎(chǔ)上，添加0.5%的膽酸鹽和1.25%的膽固醇。該模型結(jié)合了高脂模型及ATH模型的優(yōu)點(diǎn)，可有效地促進(jìn)非酒精性脂肪肝炎的進(jìn)一步發(fā)展，主要病理特征為胰島素抵抗、氧化應(yīng)激、肝星狀細(xì)胞激活[10]。Sophie A Montandon等[12]將HFD+ATH(60%脂肪+1.25%膽固醇+0.5%膽酸鹽)與膽堿-蛋氨酸缺乏飲食進(jìn)行分析比較，兩者具有類似的NASH病理特征，HFD+ATH誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠表現(xiàn)出肝膽固醇和游離脂肪酸增加，而膽堿-蛋氨酸缺乏飲食的小鼠為肝臟的甘油三酯水平升高為主。

1.4 高脂+膽固醇飲食模型

高脂+膽固醇飲食是在高脂飲食的基礎(chǔ)上，添加21%的黃油和0.2%的膽固醇。短期喂養(yǎng)高脂+膽固醇飲食后，C57BL/6J小鼠僅發(fā)生肝臟脂肪變性。而雌性ldlr-/-和 APOE2ki小鼠會(huì)表現(xiàn)出嚴(yán)重的炎癥和脂肪變性，其特征為巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和NF-kappaB介導(dǎo)的信號(hào)增強(qiáng)。有趣的是，雄性ldlr-/-和 APOE2ki小鼠也出現(xiàn)嚴(yán)重的肝臟炎癥，但未有脂肪變性[13]。此外，一種西方飲食，其中有富含n-6-PUFA大豆油(100g大豆油含有25g的n-6-多不飽和脂肪酸)和0.75%膽固醇。C57BL/6小鼠被給予該飲食20 w后，小鼠表現(xiàn)出肝脂肪變性呈氣球樣變、氧化應(yīng)激、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、Kupffer激活和肝纖維化，伴有體重增加、胰島素抵抗的NAFLD特征[14]。

1.5 高脂+高糖飲食(American lifestyle induced obesity syndrome，ALIOS)模型

ALIOS是一種高脂與高糖飲食協(xié)同誘導(dǎo)的小鼠模型，ALIOS造模方法是高脂飼料(含30%的反式脂肪酸)及果葡糖漿喂養(yǎng)，16 w后，C57BL/6小鼠有明顯的脂肪變性，伴有壞死性炎癥，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶水平升高[15]。與僅高脂飼料(含30%的反式脂肪酸)喂養(yǎng)相比，ALIOS組動(dòng)物體重明顯增加，食物攝入量增加，胰島素抵抗增強(qiáng)，但脂肪變性程度和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶水平幾乎無變化。有文獻(xiàn)報(bào)道，Takuma Tsuchida等[16]使用西方飲食(Teklad diets，TD.120528)飼料，輔以高果糖的飲用水，兩周一次腹腔注射小劑量的CCl4時(shí)，發(fā)現(xiàn)C57BL/6小鼠可快速地從單純性脂肪肝到脂肪性肝炎，肝纖維和肝細(xì)胞癌的演進(jìn)，幾乎符合人類NAFLD的病理過程。

1.6 高脂+高果糖+高膽固醇飲食(Amylin liver NASH diet，AMLN；Gubra Amylin NASH diet，GAN)模型

為了彌補(bǔ)先前報(bào)道的ALIOS小鼠模型的缺陷，更加客觀評(píng)估動(dòng)物肝臟病理進(jìn)程，Jason R Clapper等[17]改良了ALIOS誘導(dǎo)模型，并提出了高脂+高果糖+高膽固醇(AMLN)飲食模型，其含40%的脂肪(其中約18%的反式脂肪酸)，22%的果糖和2%的膽固醇。C57BL/6和ob/ob小鼠同時(shí)喂養(yǎng)AMLN(26-30 w)后，均出現(xiàn)明顯的肝脂肪變性、肝小葉炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和肝細(xì)胞形態(tài)腫脹。值得注意的是，C57BL/6小鼠需喂養(yǎng)26-30 w后，才會(huì)出現(xiàn)上述病理特征。相比于C57BL/6小鼠，ob/ob小鼠喂養(yǎng)AMLN 12 w后，則可表現(xiàn)出甘油三酯和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平明顯升高[18]。另外一種含有41%的脂肪，30%的果糖和2%的膽固醇的高脂+高膽固醇+高果糖飲食可很好地模擬西方飲食中高脂高糖高膽固醇的習(xí)慣，該飲食模型適用性更為廣泛，已被用于建立多種基因型小鼠的非酒精性脂肪肝炎模型[19]。

2018年，F(xiàn)DA頒布了反式脂肪作為食物添加劑的禁令，因此，高脂+高膽固醇+高果糖飲食(AMLN)用于NAFLD小鼠模型的構(gòu)建較為受限。Michelle L Boland等提出了GAN飲食模型，配方含40%的脂肪(無反式脂肪酸)，22%的果糖，10%蔗糖和2%的膽固醇。ob/ob小鼠喂養(yǎng)GAN 8-16 w后，表現(xiàn)出明顯的體重增加，且與人類NASH的病理特征十分相似。此外，與AMLN飲食的ob/ob小鼠的病理特征也具有一致性，但GAN飲食的ob/ob小鼠的體重增加更為明顯。相比之下，C57BL/6小鼠則需要較長(zhǎng)的喂養(yǎng)時(shí)間(通常需要28 w后)才能誘導(dǎo)出與上述一致的NASH模型[20]。

1.7 膽堿-蛋氨酸缺乏飲食(Methionine-Choline Deficiency，MCD)模型

膽堿-蛋氨酸缺乏飲食含40% 的蔗糖和10%的脂肪，但是不含有蛋氨酸和膽堿。最初2-4 w內(nèi)小鼠就會(huì)出現(xiàn)NAFLD病理表型的主要特征，如小鼠的肝細(xì)胞大泡性脂肪性變，并隨后出現(xiàn)明顯的纖維化[21]。盡管MCD模型是研究NASH的重要工具，并用于早期藥物的篩選，但MCD 模型也有一定的局限性，如膽堿-蛋氨酸缺乏飲食配制繁瑣，不符合人類飲食規(guī)律，也與人類NASH患者的實(shí)際代謝狀況完全不同，缺乏人類NASH所具有的全身性胰島素抵抗特征。Mary E Rinella等[22]發(fā)現(xiàn)MCD模型呈現(xiàn)出低血清胰島素、空腹血糖、瘦素和甘油三酯水平。與NASH患者多有肥胖不同，MCD模型較正常對(duì)照組出現(xiàn)嚴(yán)重體重下降，呈惡病質(zhì)狀態(tài)[23]。

1.8 膽堿缺乏L-氨基酸飲食(Choline deficient L-amino defined diet，CDAA)模型

CDAA飲食含有68.5%的碳水化合物、17.4%的蛋白質(zhì)和14%的脂肪。CDAA飲食誘導(dǎo)模型與MCD小鼠模型類似，它可以抑制肝細(xì)胞的脂肪酸氧化，增加脂質(zhì)合成，氧化應(yīng)激和炎癥，最終導(dǎo)致纖維化。長(zhǎng)期喂食CDAA的小鼠也可出現(xiàn)體重增加、胰島素抵抗和血脂水平顯著升高[24]。另外，CDAA喂養(yǎng)小鼠出現(xiàn)代謝相關(guān)癥狀的時(shí)間長(zhǎng)，目前僅限于肝臟疾病研究，不宜單獨(dú)應(yīng)用于NASH相關(guān)研究。以上模型的病理特征，造模時(shí)長(zhǎng)，優(yōu)缺點(diǎn)等內(nèi)容歸納總結(jié)如表1所示。

表1 非酒精性脂肪肝病營(yíng)養(yǎng)失調(diào)性C57BL/6小鼠模型

2 藥物毒性誘導(dǎo)脂肪肝模型

2.1 鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)誘導(dǎo)模型

鏈脲佐菌素誘導(dǎo)模型常見于誘導(dǎo)2型糖尿病的實(shí)驗(yàn)性模型，C57BL/6小鼠在出生2 d后，給予200 μg/L劑量，并結(jié)合高脂飲食喂養(yǎng)，大約20 w內(nèi)出現(xiàn)脂肪性肝炎、纖維化甚至肝癌，可以作為NAFLD的小鼠模型[25]。STZ誘導(dǎo)模型小鼠6周齡出現(xiàn)單純性肝臟脂肪變性，8 w時(shí)出現(xiàn)小葉炎癥和肝細(xì)胞廣泛氣球樣變，8-12 w時(shí)肝臟脂肪沉積向纖維化發(fā)展，20 w時(shí)小鼠高發(fā)肝細(xì)胞癌。造模期間，小鼠的轉(zhuǎn)氨酶和血糖濃度一直呈現(xiàn)升高趨勢(shì)[25]。該模型可以誘發(fā)氧化應(yīng)激、炎癥、纖維化和肝細(xì)胞凋亡，符合NAFLD的組織病理學(xué)。但與人類NAFLD的胰島素抵抗不同的是，鏈脲佐菌素會(huì)破壞胰島β細(xì)胞功能，而不會(huì)導(dǎo)致全身性的胰島素抵抗。因此，這也限制該模型在臨床前藥物研究中的使用。

2.2 四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)模型

CCl4是最早采用的試驗(yàn)性脂肪肝模型誘導(dǎo)劑，可以誘導(dǎo)肝纖維化小鼠模型。CCl4誘導(dǎo)肝臟發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致有毒脂質(zhì)和蛋白質(zhì)過氧化產(chǎn)物的積累，并發(fā)生嚴(yán)重的壞死反應(yīng)。小鼠進(jìn)行兩周一次，腹腔注射CCl4會(huì)造成廣泛性肝損傷，肝細(xì)胞變性壞死，單核細(xì)胞輕度浸潤(rùn)以及大、小泡混合性肝臟脂肪變性等特征。此外，轉(zhuǎn)氨酶和甘油三酯的水平也明顯高于正常對(duì)照組[26]。CCl4單獨(dú)誘導(dǎo)模型僅出現(xiàn)肝纖維化，而不發(fā)生肥胖和胰島素抵抗等病變，因此不屬于NAFLD模型。因此，CCl4通常需要與飲食誘導(dǎo)模型相結(jié)合制備NASH模型，如CCl4可以促進(jìn)高脂飲食對(duì)非酒精性脂肪肝炎和肝纖維化的發(fā)展[27]。以上模型的病理特征，造模時(shí)長(zhǎng)，優(yōu)缺點(diǎn)等內(nèi)容歸納總結(jié)如表2所示。

3 基因缺陷模型

3.1 遺傳性瘦素缺乏和瘦素抵抗小鼠模型(ob/ob小鼠、db/db小鼠)

瘦素是一種由白色脂肪組織產(chǎn)生的脂肪素，其通過下丘腦能使個(gè)體產(chǎn)生明顯的厭食效應(yīng)。ob/ob小鼠基因自然突變，造成瘦素缺失，表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)減少、貪食、極度肥胖、代謝減退和低體溫的特點(diǎn)[28]，在3-4周齡時(shí)表現(xiàn)為高血糖、胰島素抵抗和高胰島素血癥[29]。但是該小鼠雖有明顯的胰島素抵抗，卻不能自發(fā)地由單純性脂肪肝發(fā)展成脂肪性肝炎，需聯(lián)合膽堿-蛋氨酸缺乏飲食、高脂飲食、脂多糖等，才可演變?yōu)镹ASH[30]。由于瘦素缺乏，ob/ob小鼠肝纖維化的發(fā)生率極低。即使在CCl4干預(yù)下，也幾乎不會(huì)出現(xiàn)纖維化，甚至抵抗肝纖維化的產(chǎn)生，這說明瘦素在肝纖維化進(jìn)程中具有重要作用。人類極少出現(xiàn)瘦素缺乏的情況，因此該模型與人類NASH發(fā)病機(jī)制仍有差別。db/db小鼠瘦素受體基因的自然突變，使瘦素?zé)o法發(fā)揮作用，所以小鼠的表現(xiàn)類似ob/ob小鼠，但瘦素較正常水平升高[31]。db/db小鼠也不自發(fā)形成脂肪性肝炎的特性，需聯(lián)合膽堿-蛋氨酸缺乏飲食、高脂飲食等，如結(jié)合MCD飲食誘導(dǎo)會(huì)形成明顯的肝纖維化，可作為典型的NASH模型用于藥物篩選評(píng)估[30]。

表2 非酒精性脂肪肝病藥物毒性誘導(dǎo)C57BL/6小鼠模型

3.2 脂肪肝綜合征(Fatty liver Shionogi，F(xiàn)LS)小鼠

正常環(huán)境條件下，F(xiàn)LS小鼠是不貪食、無肥胖和可自發(fā)地形成胰島素抵抗、高脂血癥和脂肪性肝炎模型[32]。FLS小鼠模型的肝纖維化較輕，目前主要用于降脂化合物的篩選和評(píng)估。為更好模擬建立人類NAFLD的病理特征，Takaaki Sugihara等[33]通過FLS小鼠與ob/ob小鼠相結(jié)合，F(xiàn)LS-ob/ob小鼠的表型結(jié)合了這兩種模型的優(yōu)點(diǎn)，F(xiàn)LS-ob/ob小鼠相對(duì)于FLS小鼠更易發(fā)生嚴(yán)重的肝脂肪變性和肝纖維化。因此，F(xiàn)LS-ob/ob小鼠模型可以用于非肥胖伴有脂肪肝變性和進(jìn)行性肝纖維化的藥物篩選[34]。

3.3 黑皮質(zhì)素4受體敲除模型(Mc4r-/-小鼠)

黑皮質(zhì)素 4(Melanocortin receptor 4，MC4R)是參與調(diào)控食物攝入和動(dòng)物體重的一種重要因素[35]。Mc4r-/-小鼠表現(xiàn)為晚期肥胖、高胰島素血癥、高血糖癥。通過動(dòng)態(tài)增強(qiáng)磁共振成像的技術(shù)，Tomomi Yamada等發(fā)現(xiàn)Mc4r-/-小鼠喂食HFD(20 w)出現(xiàn)肥胖和NASH，并有明顯的纖維化。該模型具有研究NASH晚期肝功能障礙的潛力[36]。

3.4 脂肪酸轉(zhuǎn)位酶FAT/CD36缺陷小鼠模型

FAT/CD36是介導(dǎo)長(zhǎng)鏈脂肪酸跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)和營(yíng)養(yǎng)利用的重要蛋白。正常狀態(tài)下， FAT/CD36在肝臟中的表達(dá)量很低，然而NAFLD患者相關(guān)基因研究顯示肝細(xì)胞內(nèi)FAT/CD36的表達(dá)量明顯增加[37]。FAT/CD36缺陷小鼠的脂肪酸儲(chǔ)存和利用，與正常小鼠比較，減少>60%。脂肪酸和甘油三酯水平顯著性升高，過多的脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟，超過其氧化能力，引起脂質(zhì)代謝紊亂及胰島素抵抗，最終形成脂肪肝[38,39]。

3.5 微粒體前列腺素E合酶1缺陷小鼠模型(Microsomal prostaglandin E synthase-1，mPGES-1)

一般來說，前列腺素E2是前列腺素家族的成員之一，已知在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎等疾病的炎癥過程中發(fā)揮重要作用。然而，Janin Henkel[40]等發(fā)現(xiàn)小鼠前列腺素E2合成的酶的表達(dá)不足，可引發(fā)肝臟依賴腫瘤壞死因子(TNF-α)的炎癥反應(yīng)，從而加重了飲食誘導(dǎo)的小鼠NASH的嚴(yán)重程度。

3.6 肝細(xì)胞特異性磷酸酶和緊張素同源缺陷小鼠模型(Hepatocyte-specific phosphatase and tensin homolog deficiency，Pten-/-)

最初，Pten為新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，其蛋白產(chǎn)物可能通過去磷酸化參與細(xì)胞調(diào)控。然而，作為調(diào)節(jié)細(xì)胞活動(dòng)的重要因素，它在肝臟中的表現(xiàn)也受到越多的學(xué)者關(guān)注[41]。40 w齡的Pten-/-小鼠肝臟出現(xiàn)脂肪變性、炎癥和纖維化。74-78 w后，83%的雄性小鼠和50%的雌性小鼠都出現(xiàn)肝癌[42]。Pten-/-小鼠表現(xiàn)與人類NAFLD病理進(jìn)展相似，有脂肪過度堆積，之后出現(xiàn)肝纖維化和肝癌[42,43]。以上模型的病理特征，造模時(shí)長(zhǎng)，優(yōu)缺點(diǎn)等內(nèi)容歸納總結(jié)如表3所示。

表3 非酒精性脂肪肝病基因缺陷模型

4 復(fù)合模型

國內(nèi)外的學(xué)者主要在基因缺陷模型基礎(chǔ)上結(jié)合營(yíng)養(yǎng)失調(diào)性模型，為構(gòu)建出能更好地模擬人類NAFLD病理特征的小鼠模型。個(gè)別的復(fù)合模型在前面的章節(jié)中已有介紹，這里不再贅述。

4.1 Alms1基因缺乏模型(foz/foz小鼠)

foz/foz小鼠有一個(gè)突變的Alms1基因，foz/foz小鼠表型上與ob/ob和db/db小鼠都相似，三者都不能自發(fā)地由單純性脂肪肝發(fā)展成脂肪性肝炎，都需聯(lián)合膽堿-蛋氨酸缺乏飲食、高脂飲食、脂多糖等。同樣foz/foz小鼠也表現(xiàn)出類似的代謝紊亂特征，foz/foz小鼠采用高脂肪致動(dòng)脈粥樣硬化飲食喂養(yǎng)24 w后，小鼠出現(xiàn)肝臟脂肪積聚和嚴(yán)重的脂肪性肝炎，并伴有明顯的肝纖維化[44]。

4.2 代謝綜合征-非酒精性脂肪肝炎小鼠模型(Metabolic syndrome-NASH，MS-NASH)

MS-NASH小鼠，舊稱為FATZO/Pco小鼠。該動(dòng)物種系是野生型C57BL/6J和易肥胖的AKR/J雜交的小鼠，表現(xiàn)自發(fā)地發(fā)生肥胖[45]。該小鼠模型喂食補(bǔ)充果糖的西方飲食，可快速產(chǎn)生進(jìn)行性的NAFLD和NASH的病理特征。

4.3 脂蛋白功能缺失模型(ApoE-/-小鼠、Ldlr-/-小鼠)

甘油三酯在肝臟內(nèi)主要代謝途徑是通過極低密度脂向組織細(xì)胞輸出。因此，如果血中低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白升高一般被認(rèn)為是NAFLD的危險(xiǎn)因素[46]。NASH發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，單一的基因缺陷動(dòng)物模型未能模擬人類NASH，脂蛋白功能受損的小鼠模型結(jié)合了飲食誘導(dǎo)可適用于NASH研究，包括ApoE-/-小鼠、Ldlr-/-小鼠等。Robert Schierwagen等[47]ApoE-/-小鼠+高脂/膽固醇飲食(1.25%膽固醇) 后，發(fā)現(xiàn)肝臟脂肪變性更加明顯，包括血中極低密度蛋白、高脂血癥等。Ldlr-/-小鼠+高脂/高碳水化合物/低膽固醇飲食(0.2%膽固醇)也可以表現(xiàn)出與ApoE-/-小鼠相似的NASH的病理特征[48]。

4.4 Gankyrin肝特異性基因敲除(Gankyrin liver specific knockout，GLKO)小鼠模型

Gankyrin(Gank)，是一種癌基因，通常會(huì)引起肝臟細(xì)胞增值。GLKO小鼠模型的動(dòng)物種系是Cre-Alb和LoxP-Gank回交的小鼠，與野生型小鼠相比，GLKO小鼠聯(lián)合高脂飲食(6-7 m)的肝臟脂肪變性程度加重，但停止肝纖維化的發(fā)展[49]。因此，該模型可作為治療NAFLD的一種策略，用于評(píng)估抑制肝細(xì)胞增殖潛力的藥物。

4.5 飲食誘導(dǎo)非酒精脂肪肝病模型(Diet induced animal model of NAFLD，DIAMOND)

DIAMOND模型的動(dòng)物種系是C57BL/6與S129S1/svlmJ雜交的小鼠，S129S1/svlmJ小鼠是常用于制作定點(diǎn)突變小鼠最廣泛的一個(gè)品系。DIAMOND飲食含有40%的脂肪，0.1%膽固醇，23.1 g/L果糖和18.9 g/L葡萄糖溶液，小鼠被給予DIAMOND飲食16 w后，出現(xiàn)肥胖、胰島素抵抗和血脂水平異常[50]。伴有肝脂肪變性，然后到非酒精性脂肪肝炎，繼而發(fā)展為肝纖維化，概括了人類NAFLD的代謝特征和主要病理特點(diǎn)。在NAFLD疾病發(fā)展的不同階段方面，與膽堿-蛋氨酸缺乏飲食、鏈脲佐菌素+高脂飲食比較之下，DIAMOND模型克服上述小鼠模型的局限性，其與人類NAFLD也具備很好的一致性。但是，DIAMOND模型與人類NAFLD其最大的區(qū)別是其抑制膽固醇合成和高發(fā)生率的肝細(xì)胞癌[50]。以上模型的病理特征，造模時(shí)長(zhǎng)，優(yōu)缺點(diǎn)等內(nèi)容歸納總結(jié)如表4所示。

表4 非酒精性脂肪肝病復(fù)合模型

5 結(jié)語

NAFLD作為當(dāng)前研究的熱門領(lǐng)域，亟需深入研究其發(fā)病機(jī)制，評(píng)估相關(guān)藥物療效及尋找潛在的治療靶標(biāo)，NAFLD小鼠模型貫穿研究全程，在抗NAFLD領(lǐng)域中扮演不可或缺的角色。近年來，隨著NAFLD領(lǐng)域大量的候選藥物相繼進(jìn)入臨床研究，一系列的NAFLD小鼠模型也相繼被報(bào)道。不同致病因素所致NAFLD小鼠模型的形成機(jī)制及病理改變各異，各有其優(yōu)點(diǎn)和缺陷，研究者需按照研究的目標(biāo)選擇適合的小鼠模型。隨著NAFLD小鼠模型被不斷優(yōu)化，也為今后的NAFLD研究奠定了良好的實(shí)驗(yàn)物質(zhì)基礎(chǔ)，此外，構(gòu)建能更好地模擬人類NAFLD病理特征的小鼠模型是近年來該領(lǐng)域的熱點(diǎn)研究方向，優(yōu)化為更理想的、能模仿NAFLD疾病譜的小鼠模型仍是今后亟待解決的關(guān)鍵問題。