第二代與第三代羅氏游離甲狀腺素試劑的可比性驗(yàn)證和偏倚評(píng)估

熊茂程，李良敏△，黃 芮，畢冬明，李 楊

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，四川成都 610000；2.四川省成都市華陽社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗(yàn)科，四川成都 610000

游離甲狀腺素(FT4)是甲狀腺功能體外試驗(yàn)的靈敏指標(biāo)，測(cè)定不受血清結(jié)合蛋白(主要是甲狀腺結(jié)合球蛋白)的影響，即使生理及病理情況引起血清甲狀腺結(jié)合球蛋白濃度和結(jié)合力改變時(shí)，其也能較準(zhǔn)確地反映甲狀腺的功能[1]。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)FT4的濃度可作為臨床用藥及療效監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)[2-3]。

本實(shí)驗(yàn)室對(duì)FT4的評(píng)估建立在原羅氏全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光第二代FT4(FT4Ⅱ)基礎(chǔ)上，廠商把FT4Ⅱ升級(jí)為FT4Ⅲ可能是由于降低臨床反應(yīng)的參考區(qū)間臨界值出現(xiàn)了假陽性的情況。由于兩種試劑使用時(shí)產(chǎn)生的偏倚會(huì)對(duì)臨床用藥及療效監(jiān)測(cè)產(chǎn)生影響，因此在將FT4Ⅱ試劑升級(jí)為FT4Ⅲ試劑前，需參考美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)文件EP9-A3《用患者樣本進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)及偏倚評(píng)估》對(duì)二者檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析[4]，預(yù)先對(duì)兩種試劑的偏倚進(jìn)行評(píng)估，通過與臨床進(jìn)行有效溝通、解釋說明，從而降低試劑換代對(duì)臨床診斷的影響?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 連續(xù)4 d，每天收集20例患者新鮮血清標(biāo)本，共80例，2～8 ℃低溫保存(羅氏試劑說明書標(biāo)本保存要求，2～8 ℃可穩(wěn)定保存7 d)。依據(jù)FT4Ⅱ的兩點(diǎn)定標(biāo)信號(hào)值對(duì)應(yīng)的濃度范圍(8～39 pmol/L)[5]和參考范圍(12～22 pmol/L)將收集的80例血清標(biāo)本分為3個(gè)水平：3～<12 pmol/L，12～<22 pmol/L，22～<39 pmol/L，分別為20、37、23例。納入標(biāo)準(zhǔn)：非心腦血管、肝、腎、肺等機(jī)體重要器官器質(zhì)性病變和功能障礙的患者；非妊娠期及哺乳期女性；年齡18～48歲；剔除溶血、脂血、黃疸標(biāo)本。

1.2儀器與試劑 羅氏全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)Cobas e601。使用的試劑包括：(1)FT4Ⅱ試劑盒及其配套的輔助試劑(校準(zhǔn)品，質(zhì)控品)。(2)FT4Ⅲ試劑盒及其配套的輔助試劑(校準(zhǔn)品，質(zhì)控品)。兩代試劑具體參數(shù)見表1。

表1 兩代試劑參數(shù)

1.3方法

1.3.1比對(duì)方案 參照 EP9-A3文件《用患者樣本進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)及偏倚評(píng)估》，以原FT4Ⅱ試劑盒作為比較方法，使用FT4Ⅱ試劑盒配套的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品及其輔助試劑；升級(jí)后的FT4Ⅲ試劑盒作為試驗(yàn)方法，使用FT4Ⅲ試劑盒配套的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品及其輔助試劑。

1.3.2標(biāo)本測(cè)定 收集的80例臨床標(biāo)本在羅氏全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)Cobas e601上分別用FT4Ⅱ試劑和FT4Ⅲ試劑檢測(cè)，每份標(biāo)本平均平行測(cè)定兩次。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS23.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。(1)設(shè)比較方法FT4Ⅱ試劑檢測(cè)的結(jié)果為X值，試驗(yàn)方法FT4Ⅲ試劑檢測(cè)的結(jié)果為Y值，數(shù)據(jù)以線性回歸式Y(jié)=bX+a表示，b和a分別表示兩方法間的比例偏倚和系統(tǒng)偏倚[6-8]。(2)計(jì)算每份標(biāo)本兩次測(cè)定差值絕對(duì)值DXi、DYi(i為測(cè)定標(biāo)本序號(hào))，剔除離群值[9]。(3)3個(gè)水平數(shù)據(jù)分別以FT4Ⅱ試劑盒檢測(cè)的平均值Xi對(duì)應(yīng)FT4Ⅲ試劑盒檢測(cè)的平均值Yi得出3組數(shù)據(jù)作3組散點(diǎn)圖，并以全部數(shù)據(jù)作總體數(shù)據(jù)散點(diǎn)圖。(4)計(jì)算兩種檢測(cè)方法平均值的百分偏倚，(Yi-Xi)÷Xi×100(Y值)對(duì)應(yīng)比較方法測(cè)定的平均水平值(X值)作散點(diǎn)圖，得出百分比偏倚圖。

2 結(jié) 果

以總的檢測(cè)數(shù)據(jù)繪制Yi對(duì)Xi的散點(diǎn)圖，(Yi-Xi)÷Xi×100對(duì)X的百分比偏倚圖見圖1～4，以FT4Ⅱ平均值Xi與FT4Ⅲ平均值Yi的差值分布圖見圖5。總體數(shù)據(jù)的線性方程為Y=0.946 5X-0.337 4，R2=0.992 5>0.95。此方程線性良好，則認(rèn)為X范圍合適，線性回歸的斜率和截距可靠，F(xiàn)T4Ⅲ試劑盒檢測(cè)結(jié)果與原FT4Ⅱ試劑盒檢測(cè)結(jié)果具有高度的一致性。從圖2～4的百分比偏倚圖可知整個(gè)數(shù)據(jù)呈單側(cè)偏倚，具有一致性，偏倚在1%～16%，平均偏倚為-7.56%，符合美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法規(guī)88(CLIA′88)能力比對(duì)檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求，但在各水平偏倚有所不同：3～<12 pmol/L水平，偏倚范圍較大，在1%～16%；12～<22 pmol/L水平，偏倚在4%～12%；22～<39 pmol/L水平，偏倚范圍較大，在1%～12%。從圖5的FT4Ⅱ均值Xi與FT4Ⅲ均值Yi的差值分布圖可得出差值基本分布在0～2.5。同時(shí)，各水平數(shù)據(jù)R2>0.95，X取值范圍合適，直線回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠。高于臨界水平20%(即>26.4 pmol/L)的樣品檢測(cè)結(jié)果為20次，低于臨界水平20%(即<9.6 pmol/L)的檢測(cè)結(jié)果為20次。臨界值驗(yàn)證通過，滿足要求。比較平均值Xi、平均值Yi兩組數(shù)據(jù)，以羅氏試劑說明書健康人群參考區(qū)間12～22 pmol/L為依據(jù)，大于參考區(qū)間(即>22 pmol/L)即為健康人群參考區(qū)間水平共9例，占所有標(biāo)本的11.25%，即為假陽性率。各水平回歸方程見表2。

表2 4組數(shù)據(jù)的回歸方程

圖1 3～<12 pmol/L的百分比偏倚圖

圖2 12～<22 pmol/L的百分比偏倚圖

圖3 22～<39 pmol/L的百分比偏倚圖

圖4 3～<39 pmol/L的百分比偏倚圖

圖5 FT4Ⅱ平均值Xi與FT4Ⅲ平均值Yi的差值分布圖

3 討 論

CLSI一直致力于制訂評(píng)價(jià)臨床試驗(yàn)方法的文件，于2013年8月修訂最新版EP9-A3文件[10]，為生產(chǎn)廠家和臨床實(shí)驗(yàn)室提供了最新的方法學(xué)比對(duì)和偏倚評(píng)估指南。臨床實(shí)驗(yàn)室常以此指南作為檢測(cè)系統(tǒng)之間可比性分析和偏倚評(píng)估的依據(jù)[11-12]。然而對(duì)于不同試劑，雖然檢測(cè)的是相同物質(zhì)，但是檢測(cè)中所用抗體親和力、特異度、檢測(cè)步驟、檢測(cè)時(shí)間可能有所改變[13]，檢測(cè)結(jié)果也會(huì)有所不同，所以需要參照指南EP9-A3文件進(jìn)行偏倚評(píng)估，降低FT4試劑換代對(duì)甲狀腺功能檢測(cè)和甲狀腺治療療效監(jiān)測(cè)的干擾。

FT4作為臨床用藥及療效監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)，其檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性極其重要[14]。試劑升級(jí)換代對(duì)檢測(cè)結(jié)果可能造成較大的影響，本研究對(duì)兩種試劑檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了比對(duì)，全部數(shù)據(jù)的線性方程為Y=0.946 5X-0.337 4，R2=0.992 5>0.95，線性良好，表明精密度達(dá)到要求。依據(jù)CLIA′88能力驗(yàn)證計(jì)劃的分析質(zhì)量要求(允許總誤差)，F(xiàn)T4的系統(tǒng)誤差在接受范圍靶值±3s[15]。本研究為臨床醫(yī)生評(píng)估試劑換代對(duì)診療造成的影響大小提供依據(jù)，并且通過試劑升級(jí)換代有效降低臨床和廠家提出的正常參考區(qū)間上限出現(xiàn)的假陽性的概率，為甲狀腺功能紊亂等甲狀腺疾病患者治療療效的監(jiān)測(cè)提供了更為準(zhǔn)確的檢測(cè)數(shù)據(jù)。