稀有血型庫(kù)和血小板供者資料庫(kù)的研究進(jìn)展

杜飛嫦，洪文旭，吳 凡 綜述，劉宜仲△審校

1.廣東省深圳市寶安區(qū)中心血站檢驗(yàn)科，廣東深圳 518100；2.廣東省深圳市血液中心輸血醫(yī)學(xué)研究所，廣東深圳 518001

紅細(xì)胞稀有血型抗體可引起急性或遲發(fā)性輸血反應(yīng)，當(dāng)患者產(chǎn)生此類抗體時(shí)如不能及時(shí)得到相應(yīng)抗原陰性的血液，將危及生命健康。當(dāng)臨床上患者危急需要輸注人類白細(xì)胞抗原(HLA)、血小板特異性抗原(HPA)配型相合的血小板時(shí)，無(wú)法及時(shí)找到血源庫(kù)存或供者，可能會(huì)耽誤臨床輸血和治療，甚至造成血液輸注無(wú)效或者患者死亡等嚴(yán)重后果。血小板輸注無(wú)效(PTR)的臨床標(biāo)準(zhǔn)是指患者兩次連續(xù)輸注足量隨機(jī)ABO同型血小板或者在兩周內(nèi)3次輸用血小板都沒(méi)有達(dá)到預(yù)期治療效果。我國(guó)目前是在ABO血型相合的前提下隨機(jī)輸注血小板，即所謂的“盲輸”，多次“盲輸”會(huì)使患者產(chǎn)生血小板抗體從而導(dǎo)致PTR。在這種情況下，只能在每次輸血前對(duì)該患者進(jìn)行交叉配合試驗(yàn)來(lái)選擇相合的血小板進(jìn)行輸注，這不僅極大地增加了患者的負(fù)擔(dān)，同時(shí)仍無(wú)法徹底避免免疫性血小板輸血反應(yīng)的發(fā)生。隨著醫(yī)療水平的提升，臨床對(duì)稀有血型和血小板HLA和HPA配型的需求顯著增加，越來(lái)越多血站及臨床輸血機(jī)構(gòu)也開(kāi)始關(guān)注和建立稀有血型庫(kù)和血小板供者資料庫(kù)。本文就稀有血型庫(kù)和血小板供者資料庫(kù)的概念、意義、檢測(cè)鑒定技術(shù)進(jìn)展及國(guó)內(nèi)外建庫(kù)現(xiàn)狀進(jìn)行綜述，以便提高認(rèn)識(shí)。

1 概念及意義

稀有血型是人體紅細(xì)胞缺少常見(jiàn)的血型抗原、檢出抗原的頻率比較低或其配合性血液的獲得非常困難的血型的總稱，常在血型抗原檢測(cè)中被發(fā)現(xiàn)或常見(jiàn)于不規(guī)則抗體陽(yáng)性的被檢測(cè)者[1-2]。常見(jiàn)的稀有血型系統(tǒng)包括Rh、MNS、Lewis、Diego、P、Kell、Kidd和Duffy系統(tǒng)，Rh系統(tǒng)抗原最常見(jiàn)。能引起輸血不良反應(yīng)的Rh抗原主要有5個(gè)(C、c、D、E、e)，其中免疫原性最強(qiáng)的是D抗原，臨床上將具有D抗原的血型稱為Rh陽(yáng)性，不帶D抗原者稱為Rh陰性，在我國(guó)Rh陰性血型者不足1%，在漢族中僅占0.2%～0.5%，是最常見(jiàn)的稀有血型血液[3-5]。不規(guī)則抗體是指抗-A、抗-B、抗-AB以外的紅細(xì)胞血型抗體，多數(shù)為IgG免疫性抗體。如針對(duì)稀有Rh、MNS、P、Kidd、Kell、Duffy血型系統(tǒng)等產(chǎn)生的抗體，其中針對(duì)Rh系統(tǒng)的抗體占了70%以上，雖然抗-D的免疫原性要強(qiáng)于抗-E，但是抗-E、抗-c的產(chǎn)生頻率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于抗-D。中國(guó)漢族人群中較常見(jiàn)的Rh不規(guī)則抗體是抗-E(52.12%)，東方人Rh血型系統(tǒng)中Ce基因型占72%[6]。稀有血型患者常因血型抗原陰性經(jīng)輸血或妊娠會(huì)產(chǎn)生不規(guī)則抗體，所以在血型抗原檢測(cè)或不規(guī)則抗體檢測(cè)陽(yáng)性時(shí)可發(fā)現(xiàn)稀有血型血液。當(dāng)稀有血型患者需緊急輸血時(shí)常因無(wú)法及時(shí)找到血型相匹配的血液而耽誤臨床輸血及治療，最常見(jiàn)的稀有血型引起的輸血不良反應(yīng)即由Rh血型抗體導(dǎo)致，Rh血型同種抗體是造成疑難配血的主要原因[7]，是臨床最常檢測(cè)的不規(guī)則抗體。

目前，全國(guó)大部分血站開(kāi)展了Rh血型系統(tǒng)的鑒定，對(duì)其他常見(jiàn)稀有血型系統(tǒng)鑒定的開(kāi)展各有不同，而對(duì)罕見(jiàn)的稀有血型系統(tǒng)極少血站有開(kāi)展。稀有血型庫(kù)是把稀有血型獻(xiàn)血者或患者的基本信息、血型信息或其血液保存起來(lái)，在有緊急需求時(shí)，可迅速定向找到血型相匹配的血液或招募到合適的獻(xiàn)血者實(shí)行獻(xiàn)血救助。如2020年5月22日深圳1例患者發(fā)生反復(fù)上消化道出血需手術(shù)治療，但因曾多次輸血產(chǎn)生了抗-Fya、抗-E和抗-c，若需要繼續(xù)用血，在中國(guó)漢族人群中找到這3個(gè)抗原均為陰性的獻(xiàn)血者的概率僅為1/1 000，在這種病情緊急同時(shí)患者屬于稀有血型的情況下，啟動(dòng)深圳市血液中心稀有血型庫(kù)，從中成功檢索出與之相符合的、僅有的兩袋冰凍紅細(xì)胞，關(guān)鍵時(shí)刻及時(shí)有效地保障臨床用血[8]。從而也驗(yàn)證了稀有血型庫(kù)篩選及建立可在關(guān)鍵時(shí)刻解決臨床稀有血型輸注困難的問(wèn)題，為突發(fā)公共事件下血液應(yīng)急提供保障，提高了醫(yī)療診治水平，保障了臨床用血安全。

人類血小板抗原是血小板表面的膜蛋白質(zhì)及糖分子，包括HLA、HPA和CD36抗原等，臨床患者多次輸注血小板可被免疫產(chǎn)生血小板同種抗體，導(dǎo)致PTR的發(fā)生，嚴(yán)重影響臨床治療效果，同時(shí)也造成寶貴的血小板資源浪費(fèi)[9-11]。血小板HLA和HPA配合性輸注或相應(yīng)抗原陰性的配合血小板輸注可有效避免PTR的發(fā)生，同時(shí)可明顯改善臨床已出現(xiàn)PTR患者的療效。缺少CD36抗原的患者在輸入CD36抗原表達(dá)正常的血液成分后，機(jī)體默認(rèn)有外來(lái)抗原的入侵，免疫產(chǎn)生抗體，也會(huì)引起PTR[12]，所以也要重視CD36的檢測(cè)。建立血小板供者資料庫(kù)，可為血小板配合性輸注提供基礎(chǔ)，減少或避免PTR的發(fā)生，提高血小板輸注療效，同時(shí)可節(jié)約血小板資源，保障臨床用血安全[13-14]。

2 檢測(cè)技術(shù)

稀有血型鑒定的傳統(tǒng)檢測(cè)方法是血清學(xué)技術(shù)，包括抗球蛋白試驗(yàn)、酶處理法、聚凝胺法、微柱凝膠法和改良的微量法，抗球蛋白試驗(yàn)與聚凝胺法操作簡(jiǎn)單、成本低，非常適用于基層血液機(jī)構(gòu)的推廣；微柱凝膠法雖成本較高但便捷且可自動(dòng)化又有較高的靈敏度和特異度，是推薦的臨床血型鑒定技術(shù)；微量法的靈敏度很高，成本比較低，也可廣泛應(yīng)用于基層醫(yī)療單位[15-16]。目前由于很多稀有血型抗體試劑沒(méi)有商業(yè)化，限制了血清學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，隨著基因組學(xué)的發(fā)展，多種基因分型技術(shù)得以開(kāi)發(fā)，包括多重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(MPCR)技術(shù)、序列特異性引物-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(SSP-PCR)技術(shù)、降落式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(TD PCR)、二代測(cè)序(NGS)技術(shù)和基因芯片技術(shù)等。此外還有針對(duì)稀有血型系統(tǒng)特有性質(zhì)的檢測(cè)方法，如Kidd血型系統(tǒng)Jk(a-b-)血型的紅細(xì)胞在2 mol/L的尿素溶液中可保持其細(xì)胞膜在6 h以上的完整性，因此可用尿素溶血試驗(yàn)對(duì)Jk(a-b-)表型進(jìn)行篩選[17]。

HLA、HPA檢測(cè)最初采用血清學(xué)和細(xì)胞學(xué)方法，包括微量淋巴細(xì)胞毒性試驗(yàn)檢測(cè)HLA-A、B、C、D抗原等和ELISA法檢測(cè)HPA，但由于HLA等位基因序列高度同源，血清學(xué)檢測(cè)會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)，限制特異性高的抗體的獲得，影響分型結(jié)果準(zhǔn)確性，現(xiàn)已不再作為常規(guī)方法；細(xì)胞學(xué)方法操作復(fù)雜、來(lái)源困難，使得HLA、HPA細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)受限。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，已從DNA水平建立了HLA、HPA分型檢測(cè)技術(shù)，包括SSP-PCR、序列特異性寡核苷酸探針PCR技術(shù)(SSOP-PCR)、單核苷酸多態(tài)性PCR技術(shù)(SNP-PCR)、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性PCR技術(shù)(RFLP-PCR)、直接測(cè)序分型(SBT)、核酸反向雜交熒光磁珠流式分型技術(shù)(Luminex SSO)和基因芯片等[18]，其中以SSOP-PCR、SSP-PCR和Luminex SSO技術(shù)應(yīng)用最為常見(jiàn)。國(guó)內(nèi)許多研究采用SSOP-PCR和SSP-PCR方法對(duì)單采血小板供者血液標(biāo)本進(jìn)行HLA-A、B和 HPA-1～17系統(tǒng)基因分型[19-22]。CD36抗體通用的檢測(cè)方法包括血小板抗原單克隆抗體特異性免疫固定檢測(cè)(MAIPA)、ELISA、流式細(xì)胞術(shù)及基因芯片等，其中MAIPA廣泛應(yīng)用于CD36抗體檢測(cè)，是CD36抗體檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”[11]；流式細(xì)胞術(shù)耗血少、速度快、操作簡(jiǎn)單、可檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞、可標(biāo)準(zhǔn)化，常用于臨床檢測(cè)；抗原捕獲ELISA檢測(cè)方便、快捷，但價(jià)格較高[23-24]。

3 建立現(xiàn)狀

1959年，美國(guó)血庫(kù)協(xié)會(huì)(AABB)最先進(jìn)行稀有血型獻(xiàn)血者信息檔案的記錄，國(guó)際輸血協(xié)會(huì)稀有血型委員會(huì)成立于1985年，該委員會(huì)于1998年與美國(guó)紅十字會(huì)稀有血型登記處合并為美國(guó)稀有血型庫(kù)。1965年法國(guó)開(kāi)始成立稀有血型獻(xiàn)血者的檢索系統(tǒng)，英國(guó)建立國(guó)際稀有血型供者庫(kù)(IDP)[25]。我國(guó)2008年開(kāi)展稀有血型檢測(cè)項(xiàng)目，從2009年開(kāi)始各省級(jí)血液中心在血液檢測(cè)中增加了稀有血型篩查項(xiàng)目及稀有血型獻(xiàn)血者血型資料的保存。2011年1月，中國(guó)擁有的稀有血型專業(yè)網(wǎng)站可進(jìn)行信息共享、在線咨詢、論壇交流和技術(shù)推廣[2]，目前已參加的血液中心共有13個(gè)，已篩查獻(xiàn)血者超過(guò)160萬(wàn)人次，同時(shí)越來(lái)越多的稀有血型逐漸被發(fā)現(xiàn)，庫(kù)存容量正在逐漸增加。但國(guó)內(nèi)大部分血站的稀有血型庫(kù)僅局限于RhD陰性的血液，僅有幾家大型血液機(jī)構(gòu)開(kāi)展了較多種類項(xiàng)目，例如北京、大連和南京等多個(gè)地區(qū)血液中心在檢測(cè)RhD血型的同時(shí)增加了Duffy血型的檢測(cè)，個(gè)別血站有開(kāi)展MNS、Lewis、Kidd、P和Diego等血型系統(tǒng)的檢測(cè)[26-29]。

目前，許多國(guó)家已建立了HLA和HPA基因型的血小板供者資料庫(kù)，加拿大和美國(guó)血液中心可以提供上萬(wàn)人的血小板供者資料庫(kù)[18]，為臨床血小板配合型輸注提供了保障。國(guó)內(nèi)最新研究顯示，調(diào)查的24個(gè)血站均有HLA-A、-B位點(diǎn)檢測(cè)，有18個(gè)建立了血小板供者HLA和HPA基因型資料庫(kù)，但每個(gè)血站對(duì)HPA的檢測(cè)范圍各有不同，有的血站只檢測(cè)HPA 1-17w系統(tǒng)，有的血站檢測(cè)HPA 1-6、15、21w系統(tǒng)，有的血站檢測(cè)HPA 1-21w系統(tǒng)或HPA 1-29w系統(tǒng)；還有部分血站開(kāi)展了CD36抗原陰性檢測(cè)、HPA抗體檢測(cè)或CD36抗體的檢測(cè)[30]。

4 展 望

歐美等國(guó)家建立發(fā)展稀有血型庫(kù)和血小板供者資料庫(kù)已有幾十年，檢測(cè)、建庫(kù)和運(yùn)用方面積累了豐富經(jīng)驗(yàn)，技術(shù)相對(duì)比較成熟。國(guó)際輸血協(xié)會(huì)總結(jié)提出[15]，各國(guó)的獻(xiàn)血招募方式各有特點(diǎn)、語(yǔ)言不同存在溝通障礙、資源信息共享不足及稀有血源的環(huán)境保障和全球互助存在不平衡影響了全球的輸血合作，協(xié)會(huì)呼吁各國(guó)需更緊密合作，建立稀有血型資料信息共享平臺(tái)。我國(guó)稀有血型庫(kù)和血小板供者資料庫(kù)的建立起步相對(duì)較晚，在數(shù)量和技術(shù)上仍有待發(fā)展，特別是除了RhD外其他稀有血型的項(xiàng)目開(kāi)展較少，HPA和CD36的檢測(cè)還未在國(guó)內(nèi)血站普及，我國(guó)的稀有血型庫(kù)和血小板供者資料庫(kù)數(shù)量有待擴(kuò)充，技術(shù)有待提高。因此，全球的稀有血型庫(kù)和血小板供者資料庫(kù)需要迎接更高的挑戰(zhàn)，加強(qiáng)國(guó)際間合作，互助共享，為全球的臨床用血提供咨詢、查詢和供血服務(wù)，從而防止輸血不良反應(yīng)的發(fā)生，以確保稀有血型和相匹配性血小板的供應(yīng)和輸血安全。醫(yī)務(wù)人員乃至整個(gè)社會(huì)也需加深對(duì)稀有血型庫(kù)和血小板供者資料庫(kù)的了解，支持稀有血型庫(kù)和血小板供者資料庫(kù)的建設(shè)，避免因稀有血型檢測(cè)導(dǎo)致用血不當(dāng)或關(guān)鍵時(shí)刻缺少同型血液、相匹配性血小板給患者帶來(lái)難以挽回的傷害情況發(fā)生。