福建省規(guī)?；u場禽偏肺病毒感染情況的血清學(xué)調(diào)查

陳秀琴，鄭 敏，黃梅清，陳少鶯，吳南洋

(福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心，福建福州 350013)

禽偏肺病毒(Avian metapneumovirus,aMPV)首次于20世紀(jì)70年代末在南非被分離到[1]，屬于副黏病毒科肺病毒亞科肺病毒屬[2]。aMPV主要感染火雞和雞，鴨[3]、鴕鳥[4]和野禽[5]也可感染?；痣u感染后表現(xiàn)為打噴嚏，鼻漏，眶下竇腫脹和下頜水腫[6]。aMPV可感染任何日齡的雞群[2]，是導(dǎo)致雞腫頭綜合征(Swollen head syndrome,SHS)的重要發(fā)病誘因，感染雞主要臨床癥狀為眶周圍竇和眶下竇腫，斜頸[7]，病死率2%～5%，若繼發(fā)其他病毒或細(xì)菌感染，易導(dǎo)致病死率升高[8]。aMPV能夠在輸卵管定植，蛋雞和種母雞感染aMPV可導(dǎo)致產(chǎn)蛋率和孵化率下降，對于火雞，產(chǎn)蛋率下降大于50%[6]，且影響蛋品質(zhì)，感染雞出現(xiàn)短暫的呼吸道癥狀。根據(jù)aMPV基因和抗原的不同，可將其分為A、B、C、D等4個亞型[8]。這4個亞型在世界各地均有報道[9-10]，其中，A和B亞型最早被報道，且流行范圍最廣，D亞型很罕見，于2000年首次在法國被報道[10-11]。1998年,我國首次在黑龍江某肉雞場分離到aMPV[12]，福建還未分離到該病毒。目前，我國流行的aMPV以B亞型為主[13-14]。aMPV疫苗已經(jīng)研發(fā)出來，包括滅活疫苗和弱毒疫苗，并已經(jīng)在歐洲的養(yǎng)殖場使用[11]。

目前尚未有關(guān)于福建省規(guī)模化雞場aMPV感染情況的報道，本研究旨在用血清學(xué)方法調(diào)查福建省雞群感染aMPV的現(xiàn)狀，為今后深入開展aMPV的流行病學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血樣來源及處理 共采集1 020份血樣，分別采自福州市、莆田市、泉州市、漳州市、龍巖市和南平市的規(guī)模化雞場，且均未免疫接種aMPV疫苗，其中蛋雞血樣716份，肉雞血樣232份；父母代種雞血樣613份，商品代雞血樣335份。血樣詳細(xì)信息見表1。

表1 福建省規(guī)?；u場血樣采集詳細(xì)信息

每個雞場隨機(jī)抽取一定數(shù)量的健康雞進(jìn)行翅下靜脈采血，5 000 r/min離心10 min分離血清，置于-20 ℃保存待用。

1.1.2 種雞信息 種雞包括5個品種，分別為京紅蛋雞、海蘭蛋雞、本地雞1、本地雞2和本地雞3。海蘭蛋雞的采血時間為3月份、4月份和8月份，其他4個品種雞的采血時間均為11月份和12月份。本地雞1的日齡為366日齡，其他4個品種均為100多日齡。

1.1.3 主要儀器和試劑盒 ELx800光吸收酶標(biāo)儀和洗板機(jī)，美國伯騰儀器有限公司(BioTek)產(chǎn)品；酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)禽偏肺病毒抗體檢測試劑盒，美國Idexx公司產(chǎn)品，該試劑盒可檢測A、B和/或C亞型aMPV抗體。

1.2 方法

1.2.1 操作步驟及結(jié)果判定 加100 μL陰性和陽性對照血清至相應(yīng)的孔中，加100 μL已稀釋500倍的血清樣品至相應(yīng)的孔，在室溫孵育30 min;用350 μL蒸餾水洗滌每個孔3次;每孔加入100 μL抗雞/抗火雞的酶標(biāo)抗體，在室溫孵育30 min;用350 μL蒸餾水洗滌每個孔3次;每孔加100 μL TMB底物溶液，在室溫孵育15 min;每孔加100 μL終止液終止反應(yīng);在650 nm測量吸光度值(OD值)。

終點(diǎn)抗體滴度(1∶500)與S/P的關(guān)系式如下所示：

log10滴度=1.09(log10S/P)+ 3.36

2 結(jié)果

2.1 不同地區(qū)aMPV抗體陽性率比較

共檢測福建省福州、莆田、泉州、漳州、龍巖、南平6個地區(qū)的雞群血清樣品1 020份，aMPV抗體陽性數(shù)為634份，平均陽性率為62.2%(634/1 020)，6個地區(qū)的雞群均已感染aMPV，抗體陽性率最高為100%，最低為32.0%(表2)。

表2 不同地區(qū)雞群aMPV感染狀況的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果

2.2 蛋雞和肉雞aMPV抗體陽性率比較

采集的蛋雞血樣中，aMPV抗體陽性數(shù)為422份，陽性率為58.9%(422/716)。肉雞血樣中aMPV抗體陽性數(shù)為140份，陽性率為60.3%(140/232)，蛋雞的aMPV抗體陽性率比肉雞略低。

2.3 不同類型雞群aMPV抗體陽性率比較

采集的父母代雞群血樣中，陽性319份，陽性率為52.0 %(319/613)，商品代雞群陽性243份，陽性率為72.5%(243/335)(圖1)。結(jié)果表明，父母代雞群的抗體陽性率更低。

圖1 不同類型雞群aMPV抗體陽性率

2.4 不同種雞的抗體滴度比較

分別對京紅種雞、海蘭種雞和本地種雞共5個品種進(jìn)行aMPV抗體陽性率比較(圖2)。由圖2可知，本地雞1的抗體滴度最高，log10滴度明顯高于京紅、海蘭和本地雞2(P<0.05)。

圖2 不同種雞的抗體滴度

2.5 不同周齡的種/蛋雞的血清檢測結(jié)果

將種雞和蛋雞按照周齡的不同分為1～6周齡、7～21周齡和22～79周齡三個階段進(jìn)行aMPV抗體滴度和抗體陽性率比較(表3)。由表3可知，隨著雞群周齡的增長， aMPV的log10滴度和抗體陽性率逐漸升高。

表3 不同周齡雞群aMPV的抗體滴度和陽性率比較

3 討論

由于雞感染aMPV后無明星臨床癥狀，且病毒在靶器官的存在時間很短，因此分離aMPV很困難[2]。aMPV感染不易通過臨床確診，通常是采用ELISA等血清學(xué)方法來診斷[6]。本研究對福建地區(qū)的規(guī)?；u場進(jìn)行aMPV血清學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)部分地區(qū)的抗體陽性率高達(dá)100%，最低也有32.0%。郭龍宗等[15]對膠東地區(qū)不同日齡的種雞進(jìn)行aMPV抗體檢測，發(fā)現(xiàn)多個雞群的抗體陽性率達(dá)到100%；贠炳嶺等[16]對黑龍江、吉林、河北、山東等地區(qū)的種雞群進(jìn)行aMPV血清學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)調(diào)查的4個祖代種雞場中，有3個的抗體陽性率達(dá)到100%，9個父母代肉種雞場均不同程度地感染aMPV。國外的文獻(xiàn)也報道，青年母雞和種雞普遍感染aMPV，總抗體陽性率高達(dá)96%[3]。

本研究發(fā)現(xiàn)，父母代和商品代雞群及多個品種的種雞群均可感染aMPV，說明aMPV感染雞群不具有品種差異性。張麗華等[17]也報道，靈山土雞等6個品種的種雞群均存在aMPV感染。本研究中，不同父母代雞群aMPV抗體陽性率低于商品代雞群。這可能與雞場的養(yǎng)殖模式密切相關(guān)。種雞采用籠養(yǎng)模式，而商品代雞群中的肉雞采用平養(yǎng)模式，籠養(yǎng)模式不易滋生微生物，有利于防疫[18]。本地雞1 aMPV抗體的log10滴度明顯高于其他3個品種，可能是由于本地雞1的日齡最大(366日齡),而其他3個品種均為100多日齡，也有可能與養(yǎng)殖場的飼養(yǎng)管理相關(guān)。

aMPV可感染不同日齡的雞群[16]。本研究同時發(fā)現(xiàn)，隨著雞群日齡的增長， aMPV抗體的log10滴度和抗體陽性率逐漸升高。據(jù)報道，aMPV抗體隨著雞周齡的增長，出現(xiàn)增長、衰減后又增長的現(xiàn)象[17]。這與本研究不一致，可能是由于他們共檢測了5～7周齡 、12～18周齡 、21～27周齡 、29～30周齡 、35～40周齡 和43～50周齡6個時間段的雞群抗體，發(fā)現(xiàn)雞群的平均抗體滴度在21～27周齡達(dá)到最大值，而本研究對22～79周齡的雞群沒有再分階段檢測抗體。

近年來，國內(nèi)越來越多地區(qū)的雞群均已感染aMPV，表明我國雞群已經(jīng)普遍感染aMPV。雖然aMPV感染雞群直接導(dǎo)致的死亡率低，但是繼發(fā)大腸埃希氏菌、支原體等感染導(dǎo)致的死亡率增高不容忽視。關(guān)于aMPV的傳播途徑報道較少，但早期的研究發(fā)現(xiàn)，從雛火雞可分離到aMPV，且在感染aMPV的產(chǎn)蛋火雞的輸卵管檢測到大量的aMPV，說明aMPV可通過蛋傳播[11]。養(yǎng)殖場需要進(jìn)一步加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，采取嚴(yán)格的生物安全措施，對青年雞、產(chǎn)蛋雞和種雞進(jìn)行疫苗免疫，通過多途徑有效預(yù)防aMPV感染。