RNAH19在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及對侵襲的影響

李新秋，舍 勇，陳 軍

（仁懷市人民醫(yī)院肝膽外科，貴州 仁懷 564500）

甲狀腺乳頭狀癌（PTC）具有惡性程度低、生長緩慢的特征，經(jīng)手術(shù)治療后預(yù)后較好，但仍有部分患者因癌細(xì)胞侵襲而導(dǎo)致預(yù)后較差。因此，尋求PTC腫瘤標(biāo)志物對于該疾病的早期診斷和治療具有重要價值。長鏈非編碼RNA(lncRNA)具有穩(wěn)定性高、組織及疾病特異性，可在腫瘤患者外周循環(huán)中檢測出該物質(zhì)[1]。目前，lncRNA逐漸用于PTC診斷中，研究發(fā)現(xiàn)H19在甲狀腺腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)，與患者預(yù)后密切相關(guān)，但對于lncRNA H19與PTC的關(guān)系仍處于探究階段。為進(jìn)一步尋求更準(zhǔn)確的PTC診斷方式，本研究旨在探究lncRNA H19在PTC中的表達(dá)及對侵襲的影響。具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019年1月～2019年12月于我院行手術(shù)治療的50例發(fā)生腫瘤侵犯周圍組織PTC患者資料，納入觀察組，并選同期50例腫瘤未侵犯周圍組織的PTC患者資料作為對照組。對照組男16例，女34例；年齡23～55歲，平均（35.24±5.80）歲。觀察組男17例，女33例；年齡24～56歲，平均（35.60±5.85）歲。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），研究有可對比性。

1.2 方法

（1）標(biāo)本采集：空腹無菌采取5mLEDTA抗凝血，靜置30min后1200g離心10 min，取上清液于4℃下1200 g再離心10 min，取250 μl血漿加入750 μl TRIzol? LS試劑后-80℃保存。收集患者手術(shù)時新鮮腫瘤組織，于-80 ℃下凍存直至RNA提取。（2）總RNA提?。簢?yán)格按TRIzol? LS試劑（美國Invitrogen公司）說明書進(jìn)行總RNA、腫瘤組織提取，溶于DEPC處理的水中。（3）實時定量PCR檢測：根據(jù)Genebank中H19及內(nèi)參GAPDH的序列，利用Primer 5.0軟件設(shè)計引物，由上海生工生物技術(shù)科技有限公司合成引物。利用SYBR? Advantage? qPCR Premix（大連TaKaRa公司）進(jìn)行PCR擴增擴增結(jié)束后得到Ct值，采用 2-△△Ct法計算H19的表達(dá)水平。

1.3 評價指標(biāo)

比較兩組患者的lncRNA H19表達(dá)水平，并繪制受試工作者曲線（ROC）檢驗lncRNA H19表達(dá)水平預(yù)測PTC預(yù)后的價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以“±s”表示計量資料，組間用獨立樣本t檢驗，繪制ROC曲線得到lncRNA H19表達(dá)水平預(yù)測PTC預(yù)后的曲線下面積（AUC），AUC＞0.7預(yù)測價值高，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 lncRNA H19表達(dá)水平

觀察組的lncRNA H19表達(dá)水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者lncRNA H19表達(dá)水平對比（±s）

表1 兩組患者lncRNA H19表達(dá)水平對比（±s）

組別 lncRNA H19對照組(n=50) 3.05±0.61觀察組(n=50) 4.03±0.82 t 6.780 P 0.000

2.2 lncRNA H19表達(dá)水平預(yù)測PTC預(yù)后的價值分析

將lnc RNA H19表達(dá)水平作為檢驗變量，將PTC預(yù)后狀態(tài)作為狀態(tài)變量，將預(yù)后良好設(shè)為1，將預(yù)后不良設(shè)為2，繪制ROC曲線（見圖1）得到lnc RNA H19表達(dá)預(yù)測PTC預(yù)后的AUC為0.910，最佳截斷值為3.59，95%置信區(qū)間0.854-0.966，P＜0.001，敏感度為83.3%，特異度為62.50%。提示ncRNA H19表達(dá)水平預(yù)測PTC預(yù)后的價值較理想。

圖1 lncRNA H19表達(dá)水平預(yù)測PTC預(yù)后的ROC曲線分析

3 討 論

PCT患者經(jīng)甲狀腺切除術(shù)治療后病死率較低。但PTC腫瘤細(xì)胞侵襲會影響預(yù)后，需對PTC患者進(jìn)行早期準(zhǔn)確的診斷。而選擇有效的腫瘤標(biāo)志物對于提高早期診斷準(zhǔn)確性具有重要價值。目前，已有報道顯示lncRNA H19在膀胱癌、乳腺癌中有促進(jìn)腫瘤增殖作用，但有關(guān)其在PTC中的作用報道較少，因此，本研究探究lncRNA H19與PTC的侵襲的關(guān)系。

本研究結(jié)果顯示，觀察組的lncRNA H19表達(dá)水平高于對照組，說明lncRNA H19在侵襲性PTC癌組織中呈高表達(dá)。繪制ROC曲線得到lnc RNA H19表達(dá)診斷PTC的AUC為0.910，敏感度較高，提示ncRNA H19表達(dá)水平預(yù)測PTC預(yù)后的價值較理想。分析原因在于，lncRNA為轉(zhuǎn)錄本長度常規(guī)200nt的RNA分子，以RNA的形式對基因表達(dá)水平進(jìn)行調(diào)控，其存在于轉(zhuǎn)錄調(diào)控、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控、表觀遺傳調(diào)控等多種層面上，在胚胎發(fā)育調(diào)節(jié)、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分布、干細(xì)胞定向分化等方面具有重要作用[2]。因此，lncRNA表達(dá)異常會導(dǎo)致疾病發(fā)生。而H19長度為2300bp，位于染色體11p15.5上，可與胰島素樣生在因子2相互作用，對生長控制具有重要作用，且可在胚胎發(fā)育過程中表現(xiàn)父系印記的lncRNA分子。lncRNA H19在腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、侵襲過程中具有重要作用，其表達(dá)上調(diào)提示了致癌屬性。劉娜等[3]相關(guān)研究顯示lncRNA H19在甲狀腺癌中呈高表達(dá)，其表達(dá)水平會影響甲狀腺癌的預(yù)后，有望成為抗腫瘤治療的新靶點，與本研究結(jié)果相似。不同之處在于該研究也對miRNA let7表達(dá)與甲狀腺癌的病理特征關(guān)系進(jìn)行探究，而本研究主要分析lncRNA H19表達(dá)與PTC的關(guān)系。本研究因樣本量較少，研究結(jié)果可能存在誤差，不足之處有待未來擴大樣本量進(jìn)一步研究。

綜上所述，lncRNA H19在侵襲性PTC癌組織中呈高表達(dá)，可能與PTC細(xì)胞的增殖和侵襲密切相關(guān)，且預(yù)測PTC預(yù)后的價值較理想，可作為侵襲性腫瘤的標(biāo)記物。