HPLC法測(cè)定金盞銀盤(pán)中金絲桃苷的含量

姜啟娟，王冰冰，殷 丹

（通化市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林通化 134001）

1 儀器與試藥

儀器：高效液相色譜儀（型號(hào)：日本島津L C-2010AHT）、電子天平型號(hào)（BT25S 感量：0.1/0.01mg北京賽多利斯儀器天平有限公司）；對(duì)照品：金絲桃苷（111521-201507 、含量：以94.3%計(jì)；產(chǎn)地：中國(guó)食品藥品檢定研究院）；水（自制純化水）、乙腈（色譜純）、甲醇、乙醇（分析純）

2 色譜條件及溶液的制備

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18（直徑4.6 mm，長(zhǎng)度250mm，粒徑5μm），以乙腈-3%冰醋酸溶液（13：87）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

取金絲桃苷對(duì)照品，精密稱(chēng)定，置量瓶中，加60%乙醇溶液制成濃度為每1ml含20μg的溶液，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備

精密稱(chēng)取金盞銀盤(pán)粉末約1g(過(guò)四號(hào)篩)，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇溶液25ml，稱(chēng)定重量，加熱回流提取1小時(shí)，放置室溫，再稱(chēng)定重量，用60%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10ml，置分液漏斗中，用石油醚（60～90℃）40ml，分2次洗滌，棄去石油醚液，合并兩次乙醇液，回收溶劑至近干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

3 方法學(xué)驗(yàn)證與結(jié)果

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)母液的制備：取金絲桃苷對(duì)照品約10mg，精密稱(chēng)定，置25ml容量瓶中，用60%乙醇溶液溶解稀釋至刻度，搖勻，再精密量取12.5ml置50ml量瓶中，用60%乙醇溶液溶解稀釋至刻度，搖勻作為母液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液的制備：用刻度吸管吸取母液1.25、2.5、5、7.5、10ml，置25ml容量瓶中，加60%乙醇溶液至刻度。精密吸取上述溶液各10μl進(jìn)樣，結(jié)果以對(duì)照品量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算所得回歸方程及數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

3.2 進(jìn)樣重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按擬定的色譜條件連續(xù)測(cè)定6次。結(jié)果色譜峰面積數(shù)據(jù)和RSD值見(jiàn)表2。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)數(shù)據(jù)

表2 進(jìn)樣重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品6份，按所擬定方法獨(dú)立測(cè)定6次，結(jié)果金絲桃苷的平均含量數(shù)據(jù)和RSD值見(jiàn)表3。

3.4 耐用性試驗(yàn)（穩(wěn)定性考察）

精密吸取同一供試品溶液10μL，分別在0，3，6，12，16h進(jìn)樣，結(jié)果色譜峰面積值數(shù)據(jù)和RSD值見(jiàn)表4。

3.5 準(zhǔn)確度

取同一濃度的供試品（含量為0.04%）共6份，每份精密稱(chēng)取約0.5g,分別加入金絲桃苷對(duì)照品適量，按供試品溶液制備的方法制備，按擬定的方法測(cè)定，結(jié)果金盞銀盤(pán)中金絲桃苷回收率數(shù)據(jù)和RSD值見(jiàn)表5。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

表4 耐用性試驗(yàn) （穩(wěn)定性）結(jié)果

4 討 論

4.1 試驗(yàn)參數(shù)波長(zhǎng)的確定

取金絲桃苷對(duì)照品60%的乙醇溶液，經(jīng)UV-2450型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在200nm～400nm范圍內(nèi)測(cè)定，結(jié)果金絲桃苷最大吸收波長(zhǎng)在360.20nm和256.80nm處，同時(shí)參照《中國(guó)藥典》2015年版一部[1]高效液相色譜法測(cè)定菟絲子中金絲桃苷的含量，測(cè)定波長(zhǎng)為360nm， 故選擇了波長(zhǎng)為360nm。

4.2 流動(dòng)相的選擇

流動(dòng)相考察了乙腈-0.1%磷酸溶液（13:87）、乙腈-3%冰醋酸溶液（13:87）、乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸溶液（1:1:19.4:78.6）為流動(dòng)相，結(jié)果表明以乙腈-3%冰醋酸溶液（13:87）為流動(dòng)相峰形好，保留時(shí)間適度，分離度、拖尾因子均符合規(guī)定，供試品主峰能與雜質(zhì)峰得到基線(xiàn)分離。用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)色譜峰純度進(jìn)行檢測(cè)，供試品中金絲桃苷色譜峰在閾值范圍內(nèi)。故選用此流動(dòng)相為本試驗(yàn)的流動(dòng)相。

表5 準(zhǔn)確度測(cè)定結(jié)果（n=6）