血清miR-126在妊娠期糖尿病孕婦中的表達(dá)及意義

王紅日 繆雪欽 高美云 盧坤斌 吳小梅

（福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建 福州 350003）

妊娠期糖尿病為女性在妊娠期間，受糖代謝異常因素的影響而出現(xiàn)的一種疾病，胰島素抵抗以及胰島β細(xì)胞功能異常同疾病的發(fā)生之間有密切關(guān)聯(lián)。臨床相關(guān)研究指出，部分微小核糖核酸（miR-126）與胰島素生成和分泌之間有密切關(guān)聯(lián)，且對(duì)疾病發(fā)生和發(fā)展存在重要作用[1]。目前臨床針對(duì)妊娠期糖尿病孕婦血清miR-126表達(dá)水平的相關(guān)研究較少。我們觀察了妊娠期糖尿病孕婦的miR-126、血糖和血脂水平變化，并與糖耐量正常的孕婦進(jìn)行比較，分析妊娠期糖尿病孕婦發(fā)生胰島抵抗的相關(guān)危險(xiǎn)因素，旨在明確血清miR-126表達(dá)水平同妊娠期糖尿病孕婦胰島素抵抗之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 病例納入和排除標(biāo)準(zhǔn) ①納入標(biāo)準(zhǔn)：妊娠前無糖尿病，與妊娠期糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]相符；單活胎孕婦；存在巨大兒、胎盤功能不良等指征；對(duì)研究知情同意并且自愿納入研究的孕婦。②排除標(biāo)準(zhǔn)：孕前有心臟病以及高血壓；合并宮內(nèi)感染或其他感染性疾病；肝腎功能異常；合并惡性腫瘤；未在本院分娩或者中途失訪。

1.2 病例 于2018年5月—2019年5月在福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院就診、符合病例入選和排除標(biāo)準(zhǔn)的妊娠期糖尿病孕婦中隨機(jī)抽選35例作為觀察組，另隨機(jī)選取同期在本院接受孕檢、顯示糖耐量正常的孕婦35例作為對(duì)照組。本次研究中的相關(guān)資料均上交至醫(yī)院倫理委員會(huì)審核，且經(jīng)過批準(zhǔn)。觀察組孕婦年齡23～36歲，平均（29.50±4.72）歲；體質(zhì)量指數(shù)21～30 kg/m2，平均（26.81±1.29）kg/m2。對(duì)照組年齡24～35歲，平均（29.42±4.69）歲；體質(zhì)量指數(shù)22～31 kg/m2，平均（26.96±1.35）kg/m2。兩組一般資料比較，差異無顯著性（P＞0.05），有可比性。所有孕婦在檢查之前均未接受降糖藥物治療，僅通過嚴(yán)格飲食管控的方式控制血糖水平。兩組孕婦均于本院接受剖宮產(chǎn)手術(shù)，術(shù)前24 h之內(nèi)采集晨空腹靜脈血用于檢測相關(guān)指標(biāo)。

1.3 檢測指標(biāo)與方法

1.3.1 血清miR-126水平測定 采集的空腹靜脈血離心后取血清，于-80 ℃保存待檢。血清miR-126水平測定采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)方法：依據(jù)Trizol試劑盒說明書進(jìn)行RNA提取，依據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，最后依據(jù)相關(guān)試劑說明配制反應(yīng)體系并加樣；程序設(shè)定為56 ℃、72 ℃及95 ℃各30 s，92 ℃ 1 min;miR-126的內(nèi)參基因?yàn)閁6，使用北京豪邁生物工程股份有限公司設(shè)計(jì)合成的引物，結(jié)束反應(yīng)后收集相關(guān)數(shù)據(jù)，以循環(huán)閾值（Ct）分析所獲得的數(shù)據(jù)，miR-126相對(duì)表達(dá)量以2-△△Ct相對(duì)定量法進(jìn)行計(jì)算。

1.3.2 血脂檢測 包括總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）以及低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。取空腹靜脈血4 ml，離心,上層血清轉(zhuǎn)移至新環(huán)氧樹脂管中，4℃下保存，以全自動(dòng)生化分析儀檢測各指標(biāo)水平。

1.3.3 血糖檢測 包括空腹血糖、糖化血紅蛋白。采集所有孕婦禁食10 h以后的空腹靜脈血，取血清，采用葡萄糖氧化酶法檢測空腹血糖水平，全自動(dòng)生化分析儀檢測糖化血紅蛋白水平。

1.3.4 胰島素抵抗指數(shù) 利用穩(wěn)態(tài)模型胰島抵抗指數(shù)評(píng)估胰島素抵抗程度，穩(wěn)態(tài)模型胰島抵抗指數(shù)=（空腹胰島素×空腹血漿葡萄糖）/22.5。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)以SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理和分析。計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)和百分比表示，計(jì)量資料以表示，t檢驗(yàn)。采用單因素分析和Logistic回歸分析，P＜0.05為差異具有顯著性。

2 結(jié) 果

2.1 兩組孕婦空腹血糖、空腹胰島素、糖化血紅蛋白、血脂以及胰島素抵抗指數(shù)的比較 觀察組孕婦的空腹血糖、空腹胰島素、糖化血紅蛋白和胰島素抵抗指數(shù)均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），LDL-C、TC、TG均明顯高于對(duì)照組，HDL-C和miR-126水平均明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）。見表1。

2.2 妊娠期糖尿病孕婦胰島素抵抗影響因素的多因素分析 以空腹血糖（≥5.1 mmol/L=1，＜5.1mmol/L=0）、空腹胰島素（＜10 mU/L=0、≥10 mU/L=1）、糖化血紅蛋白（≥6.0%=1，＜6.0%=0）、miR-126水平（＞1.0=1，≤1.0=0）為自變量，以胰島素抵抗為應(yīng)變量（Y）進(jìn)行Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，空腹胰島素水平與空腹血糖水平提升、miR-126水平下降為導(dǎo)致妊娠期糖尿病孕婦胰島素抵抗的重要危險(xiǎn)因素。見表2。

表1 兩組孕婦血糖相關(guān)指標(biāo)、血脂和血清miR-126水平的比較

表1 兩組孕婦血糖相關(guān)指標(biāo)、血脂和血清miR-126水平的比較

組別 空腹血糖（mmol/L） 空腹胰島素（mU/L） 糖化血紅蛋白（%） 胰島素抵抗指數(shù)對(duì)照組 3.69±0.31 6.98±0.49 5.46±0.33 1.79±0.28觀察組 4.39±0.40 11.98±1.16 7.75±0.62 3.31±0.64 t值 8.183 23.491 19.289 12.873 P值 0.001 0.001 0.001 0.001組別 miR-126水平 TC（mmol/L） TG（mmol/L） LDL-C（mmol/L） HDL-C（mmol/L）對(duì)照組 1.14±0.33 4.19±0.42 1.01±0.25 2.41±0.59 1.51±0.09觀察組 0.49±0.04 5.53±0.71 2.43±0.36 3.18±0.71 1.18±0.04 t值 11.568 9.610 19.167 4.935 19.823 P值 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001

表2 妊娠期糖尿病孕婦胰島素抵抗影響因素的多因素分析

3 討 論

妊娠期糖尿病孕婦的主要特征為糖代謝異常，血糖水平提高可提高游離脂肪酸和三酰甘油的濃度，對(duì)胰島素的分泌具有抑制作用[3]。該疾病具有較為復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制，臨床主要依據(jù)妊娠期糖尿病孕婦的胰島素抵抗與胰島素分泌下降情況掌握病情，且認(rèn)為疾病的發(fā)生是由于妊娠過程中性激素分泌量提高對(duì)胰島素敏感性存在不良影響，提高了發(fā)生胰島素抵抗的風(fēng)險(xiǎn)。

miR-126為參與細(xì)胞基因調(diào)控的非編碼小分子RNA，它參與了多種疾病的發(fā)生和發(fā)展過程。miR-126成熟體為發(fā)揮特有生物學(xué)功能的重要片段，其為高度保守miRNA，位于表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域7基因的7號(hào)內(nèi)含子，其前提為可以折疊為四個(gè)穩(wěn)定“發(fā)夾”狀的二級(jí)結(jié)構(gòu)，最低自由能為-165.7 kJ/mol，具有穩(wěn)定的二級(jí)結(jié)構(gòu)。糖尿病的發(fā)生與發(fā)展均有miR-126參與，且miR-126對(duì)于血管并發(fā)癥的發(fā)生也具有重要作用。miR-126還是導(dǎo)致代謝性疾病發(fā)生以及進(jìn)一步發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素，它可以通過對(duì)胰島素信號(hào)分子通路進(jìn)行調(diào)節(jié)，誘發(fā)胰島素抵抗現(xiàn)象；通過負(fù)向調(diào)控血管內(nèi)皮生長因子水平的表達(dá)，在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生中起重要作用；還可以特異性地參與呼吸系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)的病理生理過程[4]。研究顯示，妊娠糖尿病患者血漿中miR-126表達(dá)水平越低，LDL-C水平越高，提示miR-126與脂代謝異常有密切關(guān)系[5]。本研究結(jié)果顯示，觀察組孕婦的miR-126、HDL-C均顯著低于對(duì)照組，其空腹血糖、空腹胰島素、糖化血紅蛋白、胰島素抵抗指數(shù)、TG、TC以及LDL-C均顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。提示妊娠期糖尿病孕婦常有不同程度的糖代謝紊亂和脂質(zhì)代謝異常。本研究中還發(fā)現(xiàn)，妊娠期糖尿病孕婦的miR-126表達(dá)水平較低，且存在胰島素抵抗。多因素分析結(jié)果顯示，空腹胰島素水平、空腹血糖水平、miR-126水平同妊娠期糖尿病孕婦發(fā)生胰島素抵抗之間有密切關(guān)系，顯示糖尿病孕婦機(jī)體的糖代謝紊亂與胰島素抵抗有關(guān)，糖代謝紊亂可誘發(fā)及進(jìn)一步加重胰島素分泌缺陷，這可能是由于高血糖、低miR-126水平均可誘發(fā)糖、脂類代謝異常以及炎癥反應(yīng)，加快了發(fā)生胰島素抵抗的過程[6]。

總之，血清miR-126表達(dá)水平與妊娠期糖尿病的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系，可能為妊娠期糖尿病孕婦出現(xiàn)胰島素抵抗的重要機(jī)制。密切監(jiān)測孕婦血清miR-126表達(dá)水平的變化可以判斷病情的發(fā)展情況以及胰島素抵抗的發(fā)生情況。本研究存在樣本量較小的缺陷，且未深入分析血清miR-126表達(dá)水平參與妊娠期糖尿病孕婦胰島素抵抗發(fā)生的具體作用機(jī)制，仍有待在今后臨床中展開更為深入的研究，以進(jìn)一步明確該指標(biāo)水平同胰島素抵抗發(fā)生之間的關(guān)聯(lián)。