一體化加工生白術(shù)飲片對(duì)大黃誘導(dǎo)的脾虛模型小鼠的影響

徐建中 欒會(huì)玲 業(yè) 康 孫乙銘 黃晶晶 金 捷

白術(shù)最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其性溫，味甘、苦，主入脾胃，具有健脾燥濕，益氣，利尿，止汗，安胎的作用，被稱為“補(bǔ)氣健脾第一要藥”，有“十方九術(shù)”之說[1]。本研究通過大黃誘導(dǎo)的小鼠脾虛模型，觀察白術(shù)一體化加工炮制的三種生白術(shù)飲片對(duì)脾虛模型小鼠基本機(jī)能狀態(tài)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)以及胃蛋白酶活性的影響，進(jìn)一步比較白術(shù)的不同一體化加工炮制工藝對(duì)治療脾虛作用的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng) 物 ICR 小鼠120 只，SPF 級(jí)，雌性，體質(zhì)量18～22g，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)20200622Abzz0118065189，飼養(yǎng)于清潔級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)，溫度20～26℃，相對(duì)濕度40%～70%，光照明暗交替各12h，通風(fēng)≥15 次/h；動(dòng)物使用設(shè)施條件合格證號(hào)：SYXK（浙）2018-0011。喂飼全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料，飼料由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼料生產(chǎn)基地供應(yīng)。飲水為城市自來水，凈水器過濾后裝入消毒飲水瓶?jī)?nèi)自由飲用。實(shí)驗(yàn)方案符合《浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理辦法》對(duì)動(dòng)物倫理的要求。

1.2 藥 物 三種一體化加工炮制的生白術(shù)飲片（產(chǎn)地：浙江磐安，自制），分別為：鮮白術(shù)80℃殺青1h 后于50℃烘至半干后切片、烘干；傳統(tǒng)加工條件下囪灶烘至半干后切片、烘干；傳統(tǒng)加工生白術(shù)飲片。湯劑的制備：稱取上述三種不同的一體化加工炮制生白術(shù)樣品各50g，第1 煎加400mL 水浸泡1h，微沸煎煮60min，第2 煎加入250mL 水，煎煮微沸25min，過濾，合并濾液，水浴濃縮，制成水煎液1g/mL。大黃按照常規(guī)的制備方法煎煮成含藥材為1g/mL 的大黃水煎液。

1.3 儀 器 電子天平（慈溪市天東衡器廠）；JA2003 型電子天平（寧波市鄞州華豐電子儀器廠）；T-28 電子體溫計(jì)（松下電器）；BAO-150A 精密鼓風(fēng)干燥箱（施都凱儀器設(shè)備（上海）有限公司）；L-550臺(tái)式低速大容量離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物造模、分組及給藥 按照隨機(jī)數(shù)字表法根據(jù)動(dòng)物體質(zhì)量隨機(jī)抽取15 只小鼠作為正常對(duì)照組，其余小鼠均進(jìn)行脾虛證造模。參考文獻(xiàn)[2]建立脾虛小鼠模型：按25mL·kg-1·d-1的藥量，每天1g/mL 大黃水煎液對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃，連續(xù)灌胃8 天。小鼠出現(xiàn)毛發(fā)枯槁、疏散，便軟甚至便溏、體質(zhì)量及體溫下降等表現(xiàn)即為造模成功。正常對(duì)照組同時(shí)灌服等體積生理鹽水。造模成功的小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法根據(jù)其體質(zhì)量隨機(jī)分為七組，分別為模型組、傳統(tǒng)加工低劑量組和高劑量組，傳統(tǒng)加工至半干切片低劑量組和高劑量組，以及80℃殺青后半干切片低劑量組和高劑量組，每組15 只。從第9 天開始，模型組與正常對(duì)照組給予等體積生理鹽水，傳統(tǒng)加工低劑量組給予10g（生白術(shù)水煎液）·kg-1·d-1，傳統(tǒng)加工高劑量組給予20g（生白術(shù)水煎液）·kg-1·d-1；傳統(tǒng)加工至半干切片低劑量組給予10g（生白術(shù)加工品水煎液）·kg-1·d-1，傳統(tǒng)加工至半干切片高劑量組給予20g（生白術(shù)加工品水煎液）·kg-1·d-1；80℃殺青后半干切片低劑量組給予10g（鮮白術(shù)80℃殺青水煎液）·kg-1·d-1，80℃殺青后半干切片高劑量組給予20g（鮮白術(shù)80℃殺青水煎液）·kg-1·d-1，連續(xù)給藥7 天。

2.2 觀察指標(biāo)

2.2.1 胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù) 實(shí)驗(yàn)開始前、造模結(jié)束后次日給藥前及給藥結(jié)束次日，采用實(shí)驗(yàn)用電子秤稱每組小鼠的體質(zhì)量，以及同時(shí)采用數(shù)字溫度計(jì)探測(cè)每組體溫。給藥結(jié)束次日脫頸椎處死小鼠，取出脾臟和胸腺，觀察形態(tài)，稱重并記錄。胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)的計(jì)算公式：胸腺（脾臟）指數(shù)（mg/g）=胸腺（脾臟）重量（mg）/體質(zhì)量（g）。

2.2.2 胃蛋白酶測(cè)定[3]采用麥特（Mett）氏毛細(xì)玻管法。第一步，制備蛋白管：用注射器把雞蛋清注入10cm 長(zhǎng)、內(nèi)徑1mm 的干凈玻璃毛細(xì)管中，注意管內(nèi)無氣泡。其次，放入100℃沸水中煮1min，此時(shí)蛋白凝固，用鑷子取出，備用。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將胃取出，沿胃大彎剪開，合并內(nèi)容物放進(jìn)離心管中，并加入生理鹽水10mL，離心，取上清液5mL，和10mL 0.05mol/L Hcl溶液混合加入培養(yǎng)皿中，調(diào)節(jié)PH 為2，放進(jìn)蛋白管10 根，防止水分蒸發(fā)，蓋好玻蓋，放入37℃恒溫箱中孵育24h，然后取出蛋白管，用尺測(cè)量每根蛋白管兩端透明部分的長(zhǎng)度（mm）（此表示已被消化了的蛋白質(zhì)部分），求其平均值。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 11.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（） 表示，多組間比較采用單因素方差分析，各組原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求時(shí)，組間比較顯著性檢驗(yàn)用LSD 檢驗(yàn)；各組原始數(shù)據(jù)不符合方差齊性要求，組間比較顯著性檢驗(yàn)用Dunnett T3 檢驗(yàn)；P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 不同一體化加工生白術(shù)飲片對(duì)脾虛模型小鼠體質(zhì)量和體溫的影響 給藥后，與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠體質(zhì)量顯著降低（P<0.05）；與模型組比較，三種生白術(shù)飲片處理組小鼠體質(zhì)量均有不同程度增加，其中，傳統(tǒng)加工的生白術(shù)飲片低、高劑量組和傳統(tǒng)加工半干切片低劑量組小鼠體質(zhì)量改善顯著（P<0.05）。模型組小鼠體溫在給藥后明顯低于正常對(duì)照組（P<0.05）；與模型組比較，不同一體化加工的生白術(shù)飲片組小鼠體溫顯著改善（P<0.05），不同加工方法處理組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3.2 不同一體化加工生白術(shù)飲片對(duì)脾虛模型小鼠胸腺指數(shù)與脾臟指數(shù)的影響 模型組小鼠較正常對(duì)照組胸腺指數(shù)出現(xiàn)顯著性降低（P＜0.05），與模型組比較，各給藥組小鼠胸腺指數(shù)雖有不同程度的增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組小鼠較正常對(duì)照組脾臟指數(shù)顯著性降低（P＜0.05）；與模型組比較，除傳統(tǒng)加工半干切片低劑量組的脾臟指數(shù)稍降低外，其余組的脾臟指數(shù)均有不同程度的增加，其中80℃殺青后半干切片高劑量組小鼠脾臟指數(shù)改善顯著（P＜0.05），不同加工方法處理組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

3.3 白術(shù)不同炮制品對(duì)脾虛模型小鼠胃蛋白酶活性的影響 給藥后，與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠胃蛋白酶活性明顯降低（P<0.05）；與模型組比較，三種生白術(shù)飲片低劑量組活性均降低，高劑量處理組小鼠胃蛋白酶活性增高，其中以80℃殺青后半干切片的高劑量組最顯著（P<0.05），明顯高于傳統(tǒng)加工處理高劑量組和傳統(tǒng)加工半干切片高劑量組（P 均<0.05）。其他各組蛋白酶活性差異不顯著（P>0.05）。見表3。

表1 給藥后各組小鼠體質(zhì)量和體溫比較（）

表1 給藥后各組小鼠體質(zhì)量和體溫比較（）

注：正常組為健康小鼠，予生理鹽水；模型組為脾虛模型小鼠，予生理鹽水；傳統(tǒng)加工高低劑量組為脾虛模型小鼠分別給予20g/kg 和10g/kg 生白術(shù)水煎液；傳統(tǒng)加工半干切片高低劑量組為脾虛模型小鼠分別給予20g/kg 和10g/kg 生白術(shù)加工品水煎液；80℃殺青后半干切片高低劑量組為脾虛模型小鼠分別給予20g/kg 和10g/kg 鮮白術(shù)80℃殺青水煎液；與正常對(duì)照組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與傳統(tǒng)加工半干切片高劑量組比較，cP<0.05

表2 給藥后各組小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)比較（mg/g，）

表2 給藥后各組小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)比較（mg/g，）

注：正常組為健康小鼠，予生理鹽水；模型組為脾虛模型小鼠，予生理鹽水；傳統(tǒng)加工高低劑量組為脾虛模型小鼠分別給予20g/kg 和10g/kg 生白術(shù)水煎液；傳統(tǒng)加工半干切片高低劑量組為脾虛模型小鼠分別給予20g/kg 和10g/kg 生白術(shù)加工品水煎液；80℃殺青后半干切片高低劑量組為脾虛模型小鼠分別給予20g/kg 和10g/kg 鮮白術(shù)80℃殺青水煎液；與正常對(duì)照組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05

4 討論

傳統(tǒng)的生白術(shù)飲片加工時(shí)主要為“除去雜質(zhì)，洗凈，潤(rùn)透，切厚片，干燥”，炮制過程中要用水潤(rùn)透處理，我們采用了一體化加工炮制工藝，將白術(shù)產(chǎn)地初加工與生白術(shù)飲片的炮制結(jié)合在一起，減少了中間加工步驟，避免了藥材再加工過程中有效成分的損失。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，造模后脾虛小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)明顯減緩，且體溫?zé)o明顯升高，說明脾虛模型造模成功。而經(jīng)不同一體化加工的生白術(shù)飲片治療后脾虛證小鼠的體質(zhì)量和體溫增長(zhǎng)加快，以傳統(tǒng)加工生白術(shù)飲片高低劑量組，以及傳統(tǒng)加工后半干切片低劑量組效果更明顯，說明不同一體化加工生白術(shù)飲片能不同程度地改善脾虛證模型小鼠的脾虛狀態(tài)。

表3 給藥后各組小鼠胃蛋白酶活性比較（mm，）

表3 給藥后各組小鼠胃蛋白酶活性比較（mm，）

注：正常組為健康小鼠，予生理鹽水；模型組為脾虛模型小鼠，予生理鹽水；傳統(tǒng)加工高低劑量組為脾虛模型小鼠分別給予20g/kg 和10g/kg 生白術(shù)水煎液；傳統(tǒng)加工半干切片高低劑量組為脾虛模型小鼠分別給予20g/kg 和10g/kg 生白術(shù)加工品水煎液；80℃殺青后半干切片高低劑量組為脾虛模型小鼠分別給予20g/kg 和10g/kg 鮮白術(shù)80℃殺青水煎液；與正常對(duì)照組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與傳統(tǒng)加工高劑量組、傳統(tǒng)加工半干切片高劑量組比較，cP<0.05

胸腺與脾臟結(jié)構(gòu)的正常與否與機(jī)體的免疫功能密切相關(guān)。胸腺指數(shù)與脾臟指數(shù)數(shù)值高低的變化可以反映機(jī)體免疫功能的狀態(tài)[4]。本研究中，造模后脾虛小鼠胸腺指數(shù)較正常對(duì)照組出現(xiàn)明顯萎縮（P<0.05），白術(shù)不同一體化加工制品的高低劑量組胸腺指數(shù)較模型組無顯著性改善（P>0.05），80℃殺青后半干切片的高劑量組小鼠脾臟指數(shù)較模型組具有顯著性增長(zhǎng)（P<0.05），說明80℃殺青后半干切片能增加白術(shù)健脾的功效。長(zhǎng)期服用大黃，可造成消化功能紊亂，將導(dǎo)致胃蛋白酶活降低。本實(shí)驗(yàn)中，模型組小鼠胃蛋白酶活性顯著低于對(duì)照組（P<0.05），給藥后，80℃殺青后半干切片高劑量組胃蛋白酶活性顯著升高，且蛋白酶活性明顯高于傳統(tǒng)加工處理高劑量組和傳統(tǒng)加工半干切片高劑量組（P<0.05）?？赡茉蚴?0℃殺青后半干切片處理的生白術(shù)飲片中內(nèi)酯類成分白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ總含量較高（白術(shù)內(nèi)酯總量為0.094%，其中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ為0.056%；傳統(tǒng)加工的生白術(shù)飲片白術(shù)內(nèi)酯總含量為0.060%，其中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ為0.035%；傳統(tǒng)加工半干切片白術(shù)內(nèi)酯總含量為0.081%，其中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ為0.048%，另文發(fā)表）的緣故。研究表明，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ能促進(jìn)脾虛大鼠胃腸道消化吸收功能，是白術(shù)健脾的有效成分之一[5]。白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ通過抗炎作用而對(duì)慢性萎縮性胃炎（CAG）大鼠的胃黏膜起保護(hù)作用[6]。

綜上所述，白術(shù)的三種一體化加工飲片均能不同程度地改善脾虛證模型小鼠的脾虛狀態(tài)，增加其體溫及體質(zhì)量，同時(shí)對(duì)免疫器官萎縮也具有一定的改善作用，其中80℃殺青后半干切片高劑量組藥效較為明顯，說明該工藝對(duì)提高白術(shù)的健脾藥效具有促進(jìn)作用。