飼料添加劑中5種有機(jī)酸的測(cè)定方法研究

侯林叢，黃好強(qiáng)，徐志海，王彩杰，向霞霞，張 星

（1.河南海瑞正檢測(cè)技術(shù)有限公司，河南 鄭州 450001；2.鄭州賽科藥業(yè)科技有限公司；3.河南牧經(jīng)養(yǎng)殖技術(shù)研究院有限公司；4.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院）

目前，飼料酸化劑中有機(jī)酸的測(cè)定方法有酸堿滴定法、離子色譜法、氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、液相色譜法等。高效液相色譜法具有分析范圍廣、檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)，利用高效液相色譜測(cè)定有機(jī)酸大多是關(guān)于青貯發(fā)酵液、食品及飲料等，而利用高效液相色譜同時(shí)測(cè)定飼料添加劑中蘋果酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸含量的報(bào)道較少，該方法在大量的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，建立了一種同時(shí)測(cè)定5種有機(jī)酸的高效液相色譜法，以期為基層飼料檢驗(yàn)人員提供新的檢測(cè)參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）；高效液相色譜儀（美國(guó)waters公司）：配紫外檢測(cè)器；超聲波處理器（昆山超聲儀器）；離心機(jī)（安徽嘉文儀器裝備有限公司）。

蘋果酸、甲酸、乙酸標(biāo)準(zhǔn)品：含量≥99.0%（北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司；丙酸、丁酸標(biāo)準(zhǔn)品：含量≥99.0%（北京曼哈格生物科技有限公司）；磷酸（色譜純）；乙腈（色譜純）；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱取蘋果酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸標(biāo)準(zhǔn)品100 mg于10 mL 容量瓶中，加少量超純水溶解，用超純水定容至刻度，搖勻，分別得出濃度為10.0 mg/mL 各有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液，根據(jù)樣品含量適當(dāng)稀釋成一系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 樣品前處理

稱取適量樣品（根據(jù)樣品中各有機(jī)酸含量稱取0.2～2 g）于100 mL容量瓶中，加入70 mL超純水，于超聲波中提取20 min，期間不斷搖晃促使溶解，用超純水定容至刻度，1 000 r/min 離心10 min，取上清液經(jīng)0.45 靘濾膜過濾，上機(jī)測(cè)定。

1.4 色譜條件

色譜柱：C18柱，長(zhǎng)250 mm，內(nèi)徑4.5 mm，粒徑5 靘（大連依利特）；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相：0.1 %磷酸溶液（pH 值2.5）：乙腈=98∶2；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；進(jìn)樣量：10霯。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件

該文選用依利特C18色譜柱，針對(duì)不同比例的流動(dòng)相對(duì)5 種有機(jī)酸的分離結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果表明，流動(dòng)相中pH 值過高、有機(jī)相比例偏大均會(huì)影響5 種有機(jī)酸的分離效果，致使蘋果酸和甲酸兩個(gè)相鄰色譜峰重合。當(dāng)使用0.1%磷酸溶液pH值為2.5時(shí)，能夠使5種有機(jī)酸進(jìn)行有效分離。另外還實(shí)驗(yàn)了0.5%、20%等不同比例的有機(jī)相對(duì)出峰時(shí)間的影響，當(dāng)有機(jī)相比例為0.5%時(shí)，丁酸保留時(shí)間在40 min左右，分析時(shí)間過長(zhǎng)。有機(jī)相比例為20%時(shí)，甲酸保留時(shí)間在1 min左右，無法進(jìn)行積分。當(dāng)有機(jī)相比例為2%時(shí)，各有機(jī)酸保留時(shí)間不受雜質(zhì)干擾，分析時(shí)間控制在30 min以內(nèi)，且各物質(zhì)都能得到完全分離。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定

分別取25～1 000 靏/毫升系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液注入高效液相色譜儀中，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，該系列標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，滿足實(shí)際標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.3 精密度的測(cè)定

按照本方法，選取同一飼料添加劑進(jìn)行精密度試驗(yàn)，平行測(cè)定6 次，6 組數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在8.0%以內(nèi)，測(cè)定結(jié)果見表1。

2.4 回收率試驗(yàn)

分別取同一基質(zhì)樣品兩份，一份為本底，另一份添加不同濃度的有機(jī)酸標(biāo)液，回收率結(jié)果見表2。

2.5 討論

該方法采用同一流動(dòng)相利用高效液相色譜分析方法同時(shí)測(cè)定飼料添加劑中5 種有機(jī)酸的含量。該方法步驟簡(jiǎn)單、易于操作，重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，可用于飼料添加劑中有機(jī)酸含量的分析與質(zhì)量控制，具有很大的實(shí)用價(jià)值?！?/p>

表1 方法精密度測(cè)定結(jié)果

表2 方法回收率測(cè)定結(jié)果