兩種消毒藥劑消毒桑葉對(duì)家蠶原種繁育的影響

譚福洋，冉艷萍，蘭艷妮，李楓燁，楊杰，莫炳巧，莫顯風(fēng)，浦月霞*

（1.廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站，南寧市 530007；2.宜州區(qū)桑蠶循環(huán)經(jīng)濟(jì)發(fā)展中心，河池市 546300）

桑葉消毒是原種繁育防控微粒子病的有效途徑。氯制劑是目前應(yīng)用最為廣泛、種類數(shù)量最多且最有發(fā)展前途一類消毒劑，主要是通過(guò)次氯酸的強(qiáng)氧化作用，使病原微生物蛋白質(zhì)變性、凝固、酶失活從而起到消毒作用［1］。氯制劑可分為無(wú)機(jī)氯制劑和有機(jī)氯制劑，前者主要有漂白粉、次氯酸及其鹽類等，后者主要有氯化異氰尿酸及其鹽類等［2］。漂白精的主要成分為次氯酸鈣，屬于無(wú)機(jī)氯制劑。廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站原種繁育科從2004年啟用桑葉消毒至今，一直沿用漂白精作為桑葉消毒的消毒藥劑，具有效果好，成本低，易保存，穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，但漂白精腐蝕性強(qiáng)，不易漂洗，殘留物質(zhì)多，對(duì)蠶室環(huán)境及周圍環(huán)境造成污染。三氯異氰尿酸藥劑屬于有機(jī)氯制劑。主要成分為三氯異氰尿酸，作為廣譜消毒藥劑，具有消毒效果佳、精簡(jiǎn)實(shí)用性強(qiáng)及可添食等諸多優(yōu)點(diǎn)［3］，高效、低毒和廣譜性等特點(diǎn)更符合產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的要求。王玉華等［3］的研究也表明該類藥劑可殺滅病毒、芽孢以及分生孢子。為了探明主要成分為三氯異氰尿酸的藥劑與常用的漂白精在消毒桑葉后，對(duì)家蠶原種繁育的成績(jī)和微粒子病防控效果是否有影響，本試驗(yàn)以不消毒桑葉為對(duì)照，用主要成分為三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）的藥劑和漂白精配制消毒液對(duì)桑葉進(jìn)行消毒，比較分析兩廣二號(hào)原種繁育的成績(jī)及微粒子病防控效果，探討兩種消毒藥劑的差異性，為原種繁育桑葉消毒選擇適合的消毒藥劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)

試驗(yàn)時(shí)間為2020年3—7月。試驗(yàn)地點(diǎn)為廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站良種繁育與試驗(yàn)示范基地。

1.2 試驗(yàn)材料

家蠶品種兩廣二號(hào)原原種芙蓉、932、湘暉、7532由廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站母種組提供，桑葉由廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站石埠基地提供。試劑A為三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）（商品名：亞迪欣，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所附屬蠶藥廠生產(chǎn)），試劑B為漂白精（主要成分為次氯酸鈣和氯化鈣，由天津市鑫澤精細(xì)化工有限責(zé)任公司生產(chǎn)）。

1.3 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)對(duì)兩廣二號(hào)的4個(gè)原原種分別設(shè)置處理Ⅰ、處理Ⅱ和對(duì)照3個(gè)處理。處理Ⅰ：將試劑A按照使用說(shuō)明，與水按1∶1 000比例配置成消毒液，桑葉在消毒液中浸泡消毒5 min，清洗，脫水、晾干。處理Ⅱ：將試劑B配制成有效氯濃度0.4%消毒液，桑葉在消毒液中浸泡消毒10 min，清洗，脫水，晾干。對(duì)照：桑葉采摘后用清水浸泡、清洗，脫水、晾干。每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)飼育區(qū)，每區(qū)飼育200頭蠶，全齡用對(duì)應(yīng)處理的桑葉飼喂。飼養(yǎng)、防病、上蔟、種繭保護(hù)、發(fā)蛾交配與制種等操作，參照NY/T 1492—2007《桑蠶原種繁育技術(shù)規(guī)程》［4］進(jìn)行。每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)時(shí)間，分別為2020年3月15日—4月21日，2020年5月8日—6月15日，2020年6月20日—7月27日。

1.4 調(diào)查項(xiàng)目

試驗(yàn)調(diào)查指標(biāo)為全齡經(jīng)過(guò)，蛹期經(jīng)過(guò)、蠶期病死率、死籠率、全繭量、繭層量、繭層率、蠶卵孵化率、死卵率、不受精卵率。蠶期分區(qū)記錄各齡病死蠶數(shù)量，發(fā)育情況；上蔟后第8 d，計(jì)數(shù)結(jié)繭頭數(shù)和死籠數(shù)，隨機(jī)抽樣25粒雄蛹繭和25粒雌蛹繭，電子天平稱量全繭重量和繭層重量；產(chǎn)卵后第7 d蠶卵呈固有色時(shí)，隨機(jī)抽樣50圈蠶卵調(diào)查單蛾產(chǎn)卵量、不受精卵數(shù)和死卵數(shù)，催青孵化后調(diào)查孵化卵數(shù)；蠶種微粒子病檢驗(yàn)由廣西壯族自治區(qū)蠶種質(zhì)量檢驗(yàn)檢疫站檢測(cè)。調(diào)查項(xiàng)目計(jì)算公式如下：

1.5 數(shù)據(jù)處理

取3個(gè)重復(fù)批的平均數(shù)作為各處理數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)采用IBM SPSS 23軟件分析，組間組內(nèi)顯著性差異使用單因素ANOVA檢驗(yàn)。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 兩種消毒藥劑桑葉消毒對(duì)兩廣二號(hào)原種繁育全齡經(jīng)過(guò)、蛹期經(jīng)過(guò)的影響

處理Ⅰ、處理Ⅱ、對(duì)照3個(gè)處理的全齡經(jīng)過(guò)：中系芙蓉、932為21 d，日系湘暉、7532為22 d；蛹期經(jīng)過(guò)：芙蓉為14 d，932、湘暉和7532為13 d。不同處理的全齡經(jīng)過(guò)和蛹期經(jīng)過(guò)表現(xiàn)一致，因此，兩種消毒劑消毒桑葉對(duì)家蠶兩廣二號(hào)原原種蠶的全齡經(jīng)過(guò)、蛹期經(jīng)過(guò)沒(méi)有影響，與對(duì)照處理的桑葉無(wú)差異。

2.2 不同消毒藥劑桑葉消毒對(duì)兩廣二號(hào)原種繁育體質(zhì)健康性的影響

由表1可以看出，芙蓉、932、湘暉的蠶期病死率與死籠率經(jīng)過(guò)方差分析后，處理Ⅰ與處理Ⅱ相比無(wú)顯著性差異。處理Ⅰ與對(duì)照、處理Ⅱ與對(duì)照相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。7532蠶期病死率與蛹期死籠率經(jīng)過(guò)方差分析后，處理Ⅰ與處理Ⅱ、處理Ⅰ與對(duì)照相比較無(wú)顯著差異；處理Ⅱ與對(duì)照的死籠率無(wú)顯著差異，處理Ⅱ與對(duì)照的蠶期病死率有顯著差異（P＜0.05）；試驗(yàn)結(jié)果表明處理Ⅰ與其他兩組相比病死率與蛹期死籠率基本無(wú)顯著差異。

表1 不同消毒藥劑桑葉消毒對(duì)兩廣二號(hào)原種繁育體質(zhì)健康性的影響

續(xù)表1

2.3 不同藥劑桑葉消毒對(duì)兩廣二號(hào)原種繁育種繭質(zhì)量的影響

由表2可以看出，對(duì)于品種芙蓉，處理Ⅰ與處理Ⅱ的全繭量無(wú)顯著差異，但處理Ⅰ、處理Ⅱ與對(duì)照都有顯著差異；處理Ⅰ、處理Ⅱ、對(duì)照的繭層量和繭層率均無(wú)顯著差異。對(duì)于品種932，處理Ⅰ、處理Ⅱ、對(duì)照的全繭量相互比較均有顯著差異，處理Ⅰ的繭層量與處理Ⅱ和對(duì)照均無(wú)顯著差異，處理Ⅱ的繭層量與對(duì)照有顯著差異，處理Ⅰ、處理Ⅱ、對(duì)照的繭層率均無(wú)顯著差異。對(duì)于品種湘暉，處理Ⅰ、處理Ⅱ的全繭量與對(duì)照都有顯著差異，處理Ⅰ與處理Ⅱ無(wú)顯著差異；處理Ⅰ、處理Ⅱ、對(duì)照的繭層量和繭層率均無(wú)顯著差異。對(duì)于品種7532，處理Ⅰ、處理Ⅱ的全繭量與對(duì)照都有顯著差異，處理Ⅰ與處理Ⅱ無(wú)顯著差異；B的繭層量與對(duì)照有顯著差異，處理Ⅰ的繭層量分別與處理Ⅱ和對(duì)照均無(wú)顯著差異；處理Ⅰ、處理Ⅱ、處理對(duì)照的繭層率均無(wú)顯著差異。

表2 不同消毒藥劑桑葉消毒對(duì)兩廣二號(hào)原種繁育種繭質(zhì)量的影響

2.4 不同藥劑桑葉消毒對(duì)兩廣二號(hào)原種繁育蠶種質(zhì)量的影響

由表3可以看出，品種芙蓉、932、湘暉和7532蠶卵的孵化率、死卵率和不受精率經(jīng)方差分析表明，處理Ⅰ與對(duì)照、處理Ⅱ與對(duì)照、處理Ⅰ與處理Ⅱ相比均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。試驗(yàn)結(jié)果表明，使用這兩種消毒藥劑桑葉消毒及是否消毒桑葉，不會(huì)影響原種繁育蠶種的孵化率、死卵率和不受精率。

表3 不同消毒藥劑桑葉消毒對(duì)兩廣二號(hào)原種繁育蠶種質(zhì)量的影響

2.5 不同藥劑桑葉消毒對(duì)兩廣二號(hào)原種繁育微粒子病發(fā)病率的影響

由表4可以看出，處理不同，家蠶微粒子病發(fā)病率不同，芙蓉、932、湘暉、7532四個(gè)原原種的處理Ⅰ、處理II都比未經(jīng)桑葉消毒的處理對(duì)照的微粒子病毒率低，其中處理Ⅰ的微粒子病發(fā)病率均為0，說(shuō)明此次試驗(yàn)中，處理Ⅰ中的試劑A消毒桑葉后，比處理II中的試劑B消毒桑葉后，對(duì)家蠶的微粒子病的防控效果更好。

表4 不同消毒藥劑桑葉消毒對(duì)兩廣二號(hào)原種繁育微粒子病發(fā)病率的影響

3 討論和小結(jié)

3.1 討論

3.1.1 兩種試劑對(duì)原種繁育成績(jī)的影響比較 本試驗(yàn)的研究結(jié)果表明，用三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）（試劑A）及漂白精（試劑B）消毒桑葉，對(duì)兩廣二號(hào)原種繁育的成績(jī)影響各異，對(duì)齡期經(jīng)過(guò)、蛹期經(jīng)過(guò)、蠶卵的孵化率、死卵率、不受精卵率均無(wú)影響，但對(duì)部分品種的體質(zhì)指標(biāo)和繭質(zhì)指標(biāo)有一定影響。用三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）及漂白精消毒桑葉不影響芙蓉、932、湘暉的蠶期病死率與死籠率，但對(duì)7532的蠶期病死蠶率有影響，降低了病蠶發(fā)生率。桑葉經(jīng)消毒后，表面病原被殺滅，經(jīng)食下傳染的細(xì)菌和病毒數(shù)量減少，降低蠶病發(fā)生率，符合消毒防病的規(guī)律。用三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）及漂白精消毒桑葉對(duì)全繭量都有一定影響，桑葉消毒后，各品種的全繭量均有不同程度提高，但不影響繭層率。桑葉經(jīng)消毒清洗后，灰塵、氟化物減少，蠶更喜食，食下量增加，是全繭量的增加的主要原因。

3.1.2 兩種試劑對(duì)降低微粒子病的影響比較 兩種消毒藥劑對(duì)桑葉消毒后，雖然都能有效降低微粒子病毒率，但是使用三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）后，4種品種的家蠶微粒子病發(fā)病率均為0，除家蠶品種7532外，其余3種的微粒子病發(fā)病率均低于使用試劑B后的微粒子病發(fā)病率，由此可見(jiàn)，三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）對(duì)家蠶微粒子病的防控作用要比試劑B更好。三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）與漂白精的消毒原理一致，試驗(yàn)結(jié)果處理Ⅰ的微粒子病發(fā)病率普遍低于處理Ⅱ，且都為0，主要原因可能是三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）的消毒藥理為三氯異氰尿酸在水中形成次氯酸，次氯酸的強(qiáng)氧化作用使病原微生物的蛋白質(zhì)變性，從而達(dá)到讓病原微生物死亡的目的。磷酸三鈉有助溶催化作用，可以加速氯氣的釋放，提高消毒效果，對(duì)家蠶病毒病、真菌病、細(xì)菌病和微粒子病的病原體消毒效果明顯，對(duì)微粒子病病原體消毒效果更為顯著。

3.1.3 兩種試劑的實(shí)用性比較 兩種藥劑經(jīng)使用，三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）對(duì)比漂白精，前者具有3大優(yōu)點(diǎn)：一是成本便宜。配備試劑A溶液的成本為0.002 3元/kg；試劑B溶液為0.06元/kg，試劑配置成本方面三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）是漂白精的1/26。三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）的成品藥較漂白精穩(wěn)定，在當(dāng)前的包裝條件下，前者有效期在2年以上，而后者有效期為6個(gè)月左右。二是高效，便利。三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）藥品有助溶調(diào)節(jié)劑的作用，易溶解，即開(kāi)即用，消毒溶液澄清，便于使用，而漂白精藥品溶解速度較慢，需靜置等待上清液，消毒溶液混蝕，消毒完畢后殘?jiān)^多，使用不方便。三是低毒。三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）產(chǎn)生的刺激性氣味少，揮發(fā)快，對(duì)人體傷害少。

3.2 小結(jié)

王玉華等［3］［5］的研究認(rèn)為主要成分為三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）的廣譜消毒藥劑300倍溶液對(duì)CPV、NPV消毒15 min有效；3 200倍溶液對(duì)N.b消毒5 min、對(duì)B.t毒素消毒10 min有效；1 600倍溶液對(duì)sotto芽孢消毒15 min有效；800倍溶液對(duì)A.f及B.b分生孢子消毒10 min有效，并且還表明了該藥劑消毒溶液具有藥效穩(wěn)定性高，使用方便及可添食等優(yōu)點(diǎn)。本次試驗(yàn)則是在前人的基礎(chǔ)上，探明該種藥劑對(duì)家蠶原種繁育成績(jī)的影響和微粒子病防控的效果，與前人研究的文獻(xiàn)相比更適用于實(shí)際生產(chǎn)。

試驗(yàn)結(jié)果表明主要成分為三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）的廣譜消毒藥劑與漂白精在消毒桑葉后，對(duì)兩廣二號(hào)原種繁育的成績(jī)影響各異，對(duì)控制微粒子病發(fā)生有很好的效果。雖然兩種試劑在使用后，4個(gè)品種的家蠶的微粒子病率均降低，但是三氯異氰尿酸（輔劑磷酸三鈉）消毒藥劑對(duì)微粒子病的防控效果比漂白精更好。另外，該消毒藥劑對(duì)原種繁育成績(jī)影響較小，無(wú)殘留等更符合環(huán)保要求，因此推測(cè)其可作為漂白精的替代品，用于原種繁育桑葉消毒，鑒于它的廣譜性，250倍溶液亦可用于蠶室蠶具消毒。本次試驗(yàn)存在一定的不足之處。一是處理Ⅱ的桑葉浸泡消毒過(guò)程中，由于桑葉量大，片葉之間存在粘連，導(dǎo)致有個(gè)別葉面沒(méi)有接觸藥液，產(chǎn)生消毒不徹底的情況。二是桑葉屬于隨機(jī)采摘，采摘回來(lái)處理Ⅰ的片葉沒(méi)有攜帶微粒子病毒。生產(chǎn)試驗(yàn)比實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)存在的不確定因素較多，從而可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生細(xì)微的影響。蠶藥是防病重要的物質(zhì)基礎(chǔ)，根據(jù)產(chǎn)業(yè)的科學(xué)發(fā)展觀和可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略，蠶藥必然向著低毒、高效、廣譜性等方向全面創(chuàng)新發(fā)展。