頂空氣相色譜法測(cè)定左卡尼汀原料藥中三甲胺的含量

宋文姬，劉印，扈長(zhǎng)青，王東岳，吳寧

(山東齊都藥業(yè)有限公司，山東省腦神經(jīng)保護(hù)類藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 淄博 255400)

1 儀器與試劑

1.1 儀器 島津GC-2010Plus氣相色譜儀(島津公司)，配HS-10頂空進(jìn)樣器，檢測(cè)器為氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)，島津化學(xué)工作站，20 mL帶有密閉塞的頂空瓶；電子天平(CPA225D，賽多利斯)。所用儀器和量具均經(jīng)檢定和校正。

1.2 試劑 左卡尼汀(山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)：181002、180701、180702、180703)；45%的三甲胺水溶液(分析純，Sigma-Aldrich)；甲醇(色譜級(jí)，TEDIA)；乙醇(色譜級(jí)，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)；丙酮(分析純，萊陽(yáng)康德化工有限公司)；氫氧化鈉(分析純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司)；試驗(yàn)用水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Pora PLOT Amines毛細(xì)管色譜柱(25 m×0.32 mm×10 μm)；程序升溫過(guò)程：初始溫度110 ℃保持2 min，以15 ℃·min-1升到210 ℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度：230 ℃；檢測(cè)器溫度：250 ℃；載氣為N2；分流比為5∶1；進(jìn)樣體積：1 mL；柱流速：3.0 mL·min-1；氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)；頂空進(jìn)樣器條件：頂空瓶平衡溫度80 ℃，定量環(huán)溫度95 ℃，傳輸管線溫度：110 ℃，頂空瓶平衡時(shí)間30 min，進(jìn)樣時(shí)間1.0 min，瓶壓150 kPa。

2.2 溶液配制 三甲胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱定45%的三甲胺水溶液約44.5 mg，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取1 mL至20 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

三甲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密量取三甲胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液1 mL 至10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

樣品溶液：稱取左卡尼汀約200 mg，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，加水5 mL，密封，振搖，使樣品充分溶解，即得。

2.3 專屬性試驗(yàn) 左卡尼汀原料藥合成工藝中使用了甲醇、乙醇和丙酮這3種溶劑。為了防止甲醇、乙醇和丙酮干擾，因此專屬性中增加這3種溶劑的定位。

各對(duì)照品儲(chǔ)備液：精密稱取甲醇24 mg、乙醇40 mg和丙酮40 mg，分別置20 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別精密量取各對(duì)照品儲(chǔ)備液和三甲胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1 mL，置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

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各對(duì)照品溶液：精密量取各對(duì)照品儲(chǔ)備液各1 mL，分別置于10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

分別精密量取空白溶液、各對(duì)照品溶液、三甲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封。在上述檢測(cè)條件下分別進(jìn)樣分析，空白溶液不干擾三甲胺出峰，各對(duì)照品溶液中甲醇的保留時(shí)間為9.064 min、丙酮的保留時(shí)間為10.673、乙醇的保留時(shí)間為11.406 min，三甲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液中三甲胺保留時(shí)間為7.857 min，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(見圖1)中各組分分離度良好，專屬性符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。

2.4 定量限和檢測(cè)限測(cè)定 取三甲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液逐步稀釋，進(jìn)樣測(cè)定，按S/N≥10及S/N≥3分別計(jì)算定量限及檢測(cè)限。通過(guò)試驗(yàn)確定三甲胺定量限濃度為0.083 4 μg·mL-1，檢測(cè)限濃度為0.025 0 μg·mL-1。符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。

2.5 線性關(guān)系測(cè)定 精密量取三甲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液2 mL到50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，制成1#線性溶液。分別精密量取三甲胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1、2、3 mL到40 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，制成2#～4#線性溶液。分別精密量取三甲胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2、3 mL到20 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，制成5#和6#線性溶液。精密量取三甲胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2 mL到10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，制成7#線性溶液。精密量取1#～7#線性溶液各5.0 mL，置20 mL頂空瓶中密封，分別進(jìn)樣。線性關(guān)系見表1。三甲胺在0.081 6～4.079 7 μg·mL-1，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 1，符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。

表1 三甲胺的線性關(guān)系

2.6 回收率試驗(yàn) 精密稱取供試品(批號(hào)：181002)12份，每份0.2 g，分別置12個(gè)20 mL頂空瓶中，其中3份加入5 mL水溶解，密封，作為空白供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定?？瞻坠┰嚻啡芤褐袡z出三甲胺，平均峰面積為620。其余的9份樣品分3組各3份，分別加入線性項(xiàng)下的3#、5#、6#線性溶液5.0 mL，密封，溶解，依次進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表2，回收率均在80%～115%之間，符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。

表2 三甲胺加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.7 精密度測(cè)定 精密稱取供試品(批號(hào)：181002)9份，每份0.2 g，分別置9個(gè)20 mL頂空瓶中，其中3份加入5 mL水溶解，密封，作為空白供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。其余的6份樣品加入線性項(xiàng)下的5#線性溶液5.0 mL，密封，溶解，作為加標(biāo)供試品溶液，依次進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。

為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，另一名分析人員于不同的日期單獨(dú)建立系統(tǒng)，按重復(fù)性溶液配制方式重新配制中間精密度測(cè)試溶液，進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)考察重復(fù)性試驗(yàn)與中間精密度試驗(yàn)共12次測(cè)定結(jié)果，三甲胺回收率的RSD應(yīng)不大于10%。結(jié)果見表3，三甲胺回收率的RSD為1.7%，符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。

表3 三甲胺精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=12)

2.8 耐用性試驗(yàn)

2.8.1 改變頂空條件 分別改變頂空瓶平衡溫度±5 ℃；平衡時(shí)間±5 min，其他產(chǎn)地條件不變，將三甲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試品溶液和加標(biāo)供試品溶液分別進(jìn)樣測(cè)定，三甲胺回收率的RSD應(yīng)不大于10%。見表4，三甲胺回收率的RSD為3.5%，符合規(guī)定。

表4 頂空條件耐用性試驗(yàn)結(jié)果

2.8.2 改變GC測(cè)定條件 分別改變柱流速±0.1 mL·min-1；改變進(jìn)樣口溫度及檢測(cè)器溫度±5 ℃，其他測(cè)定條件及頂空條件不變，將三甲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試品溶液和加標(biāo)供試品溶液分別進(jìn)樣測(cè)定，三甲胺回收率的RSD應(yīng)不大于10%。三甲胺回收率的RSD為1.7%(見表5)，符合規(guī)定。

表5 頂空條件耐用性試驗(yàn)結(jié)果

綜上，測(cè)定條件耐用性較好。

2.9 左卡尼汀中三甲胺含量測(cè)定 精密稱取供試品(批號(hào):181002、180701、180702、180703)0.2 g，分別置20 mL頂空瓶中，分別精密量取5.0 mL水，密封溶解后進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中三甲胺含量。結(jié)果見表6。

3 討論

左卡尼汀原料藥在《中國(guó)藥典》及國(guó)外藥典(EP10、BP2020、USP43-NF38)中均有收載，但未見對(duì)三甲胺進(jìn)行控制。我們根據(jù)三甲胺特性，選擇適用于胺類化合物和氨氣分析的高保留Pora PLOT Amines氣相專用柱，通過(guò)優(yōu)化升溫程序，從而獲得較好峰型。本文建立的頂空氣相色譜法準(zhǔn)確度高，耐用性好，適合左卡尼汀原料藥中三甲胺測(cè)定。在標(biāo)準(zhǔn)中增加對(duì)三甲胺的控制，可更加有效地控制藥品質(zhì)量。

表6 左卡尼汀中三甲胺含量測(cè)定結(jié)果