動(dòng)物檢測樣品采集和處理

劉瑩

動(dòng)物檢測樣品采集和處理

劉瑩

（河南省西峽縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 西峽 474500）

動(dòng)物檢測樣品的采集、保存、運(yùn)輸和處理，事關(guān)所采檢測樣品的質(zhì)量和檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。為有效保障動(dòng)物檢測樣品的質(zhì)量及安全性，本文就采集和處理動(dòng)物檢測樣品過程中應(yīng)注意的事項(xiàng)進(jìn)行了闡述。

動(dòng)物樣品；采集；處理

動(dòng)物檢測樣品是實(shí)驗(yàn)室檢測工作的對(duì)象，樣品的采集、保存、運(yùn)輸和處理關(guān)系著所采檢測樣品的質(zhì)量，決定著檢測工作的成敗，是實(shí)驗(yàn)室操作質(zhì)量控制的首要環(huán)節(jié)。采集動(dòng)物檢測樣品應(yīng)注意以下事項(xiàng)：

1 樣品的采集和處理

樣品采集時(shí)應(yīng)穿戴好防護(hù)用品（如一次性手套、鞋套、防護(hù)服，口罩等）后再進(jìn)行樣品采集，應(yīng)避免防護(hù)用品破損。樣品采集操作完成后，應(yīng)嚴(yán)格按照生物安全要求妥善處理相關(guān)污染物品，以免造成人畜感染和環(huán)境污染。

1.1 病原微生物樣品的采集和處理

（1）充分保定動(dòng)物。在減少動(dòng)物應(yīng)激的同時(shí)，避免動(dòng)物對(duì)采樣人員構(gòu)成威脅。

（2）做好環(huán)境消毒和動(dòng)物尸體處理工作。防止污染環(huán)境，防止疫病傳播。

（3）根據(jù)不同檢測目的，采集相應(yīng)的樣品。如監(jiān)測抗體采用血清樣品，檢測抗原則根據(jù)病原不同分別采集相應(yīng)的內(nèi)容物、分泌物、組織臟器、排泄物或其他材料，不能初步判斷病因時(shí)應(yīng)進(jìn)行全面采樣待查。進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查、抗體監(jiān)測、群體健康狀況評(píng)估或環(huán)境衛(wèi)生檢測時(shí)，樣品數(shù)量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求及一定飼養(yǎng)階段的區(qū)間分布。企業(yè)進(jìn)行群體抗體監(jiān)測時(shí)可根據(jù)群體大小和日齡狀態(tài)，制定符合養(yǎng)殖場自身的采樣方案和樣本數(shù)目。

（4）采集樣品時(shí)應(yīng)無菌操作。

（5）所采集樣品要及時(shí)標(biāo)記并進(jìn)行登記。

（6）用于細(xì)菌檢測的樣品，如果是無菌樣品，接種前無需作特別處理；有雜菌污染的樣品，可接種選擇性培養(yǎng)基抑制雜菌生長；奶、尿等樣品含菌量少時(shí)，可用離心法或過濾法作集菌處理。

1.2 血樣的采集和處理

采集全血應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)要求選擇合適的抗凝劑，如肝素、乙二胺四乙酸（EDTA）、阿氏液、枸櫞酸鈉等。血清血液樣品采集后應(yīng)避免震蕩，于室溫下靜置2～4 h（避免暴曬），待血液凝固、血清析出后分離血清，置4 ℃ 保存，如需長期保存應(yīng)置于-20 ℃ 保存，避免反復(fù)凍融。

1.3 眼、呼吸道、咽、肛拭子的采集與處理

需進(jìn)行病毒分離的樣品用無菌PBS液保存，如需長期保存，應(yīng)置于-70 ℃；待進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)立即進(jìn)行涂片染色和接種相應(yīng)培養(yǎng)基；待進(jìn)行核酸檢測的樣品用50 % 甘油生理鹽水保存，保存液沒過拭子即可。所采集樣品應(yīng)用稀釋液作1～2倍稀釋，室溫作用1 h后充分振蕩，離心取上清液。

1.4 實(shí)質(zhì)臟器的采集和處理

（1）對(duì)已死亡的畜禽，應(yīng)盡快采集，冬季不超過6 h，夏季不超過4 h。瀕死畜禽，在放血后采集。采集實(shí)質(zhì)臟器時(shí)應(yīng)無菌操作，將所采臟器組織塊，放入無菌容器，每塊組織應(yīng)單獨(dú)放置，取材應(yīng)包括病灶和周邊正常組織。供組織病理學(xué)檢查的樣品應(yīng)新鮮，不能冷凍，不能擠壓，避免人為損傷，組織塊以1.5 cm × 1.5 cm × 1.5 cm為宜。如作冷凍切片，則需將組織放在0～4 ℃保存，盡快進(jìn)行切片、檢測；作石蠟切片應(yīng)及時(shí)用10 % 甲醛溶液固定；進(jìn)行分子生物學(xué)檢查的樣品，應(yīng)保持新鮮，低溫保存，不能及時(shí)檢測的，7 d內(nèi)可于 -20 ℃保存，超過30 d的應(yīng)置于-70 ℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)冷凍。進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行觸片、固定。

（2）供顯微鏡檢查的膿汁、血液、分泌物等樣品，應(yīng)無菌操作，盡快進(jìn)行涂片、固定。

2 樣品的記錄

送往實(shí)驗(yàn)室的樣品應(yīng)填寫一式兩份的送檢單，一份隨樣品送實(shí)驗(yàn)室，另一份留送備案。送檢單應(yīng)包括畜主姓名、場址、動(dòng)物品種及數(shù)量；被感染動(dòng)物的種類、數(shù)量、發(fā)病日期、造成損失、感染動(dòng)物在畜群中的分布情況、發(fā)病動(dòng)物及死亡數(shù)量、臨床癥狀、病理變化、免疫及用藥情況。送檢樣品的清單和說明應(yīng)包括病料種類、保存方法等。

3 樣品的運(yùn)輸

運(yùn)輸樣品時(shí)應(yīng)提前與動(dòng)物疫病診斷室溝通，并視天氣情況和運(yùn)輸時(shí)間長短，將所采集的樣品放入加有足夠冰袋的泡沫保溫箱中，以最快最直接的途徑送往實(shí)驗(yàn)室。如果樣品能在采集后24 h內(nèi)抵達(dá)實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)放在4 ℃的容器中密封保存，專人運(yùn)送。如需寄送，裝箱時(shí)要內(nèi)裝防震材料。在制成的涂片、觸片、玻片上做好標(biāo)記，火焰固定，放入玻片盒內(nèi)，并另附說明。所有樣品都要標(biāo)注詳細(xì)標(biāo)簽。

[1] 樊麗鑫, 袁慧, 宋紅靜. 獸醫(yī)臨床樣品的采集與送檢規(guī)范[J]. 山東畜牧獸醫(yī), 2015, 36（6）: 55-56.

[2] 劉煒, 賈松濤, 彭志領(lǐng). 基層動(dòng)物疫病防控技術(shù)指南[M]. 鄭州: 河南人民出版社, 2014.

[3] 袁江平. 牛羊布魯氏菌病臨床樣品的采集與送檢技術(shù)要點(diǎn)[J]. 山東畜牧獸醫(yī), 2018, 39（6）: 56.

（2021–05–08）

S851.2+1

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