2型糖尿病患者HbA1c、25-OH-D3及T淋巴細(xì)胞亞群與胰島素分泌的相關(guān)性分析

付慧清 王新顏 吳潔清 李燕 李清 劉迎春

糖化血紅蛋白（haemoglobin A1c，HbA1c）與糖尿病并發(fā)癥密切相關(guān)，HbAlc 的控制水平直接影響到糖尿病患者的長期預(yù)后［1］。隨著研究的不斷深入，有不少國內(nèi)外研究報道，細(xì)胞免疫異常與T2DM 的發(fā)病、進(jìn)展有著密切聯(lián)系，而活性維生素D 有類激素作用，參與免疫應(yīng)答、細(xì)胞增殖等多種生理過程，其與糖尿病的相互影響越來越受到重視［2-3］。但關(guān)于細(xì)胞免疫與血糖水平及胰島分泌功能關(guān)系的報道較少［4］。本文分析T2DM 患者HbA1c、25-羥維生素D3（25-hydroxyl vitamin D3，25-OH-D3）水平及T 淋巴細(xì)胞亞群與胰島素分泌的相關(guān)性，具體報告內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年5月至2020年5月本院收治的92例T2DM 患者（觀察組）臨床資料，其中男50 例，女42 例，年齡41～74 歲，平均（55.90±3.21）歲，糖尿病病程為1.5～26年，平均病程為（7.18±1.19）年。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合世界衛(wèi)生組織中關(guān)于T2DM 診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］：空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）均＞7.0 mmol·L-1，葡萄糖耐量試驗(yàn)（glucose tolerance test，GTT）中予以 口服葡萄糖75 g 2 h 后血糖≥11.1 mmol·L-1；②T2DM 患者入院后均可完成所有實(shí)驗(yàn)檢查及配合完成所有治療；③臨床資料完整且準(zhǔn)確者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并糖尿病酮癥酸中毒、糖尿病腎病及其他嚴(yán)重并發(fā)癥者；②近期服用維生素D 類藥物者，接受日光暴曬者；③合并惡性腫瘤者；④合并免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)及甲狀腺疾病。

同時納入同期于本院接受健康體檢結(jié)果正常者60 例作為對照組。其中男32 例，女28 例，年齡40～73 歲，平均（55.29±3.16）歲。兩組在性別、年齡等方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），均衡可比。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，受試者及家屬簽署知情同意書。

1.2 方法

收集所有研究對象一般資料，記錄其HbA1c、25-OH-D3、T 淋巴細(xì)胞亞群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）水平及FBG、空腹胰島素（fasting insulin，F(xiàn)INS）、胰島β 細(xì)胞功能指數(shù)（index of β-cell function in HOMA，HOMA-β）、胰島素抵抗指數(shù)（insulin resistance index in HOMA，HOMA-IR）、胰島素第一分泌時相峰值倍數(shù)（multiple of peak value of the first insulin secretion phase，PR）情況，并采用葡萄糖負(fù)荷后30 min 的凈增胰島素與凈增葡萄糖比值（⊿I30/⊿G30）來對胰島素分泌功能進(jìn)行直接評估，比較兩組體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）、血清HbA1c、25-OH-D3、T 淋巴細(xì)胞亞群水平及胰島分泌相關(guān)指標(biāo)差異，采用Pearson 相關(guān)分析分別觀察T2DM 患者血清HbA1c、25-OH-D3、T 淋巴細(xì)胞亞群和胰島分泌的關(guān)系。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 HbA1c、25-OH-D3、T 淋巴細(xì)胞亞群的檢測

觀察組入院患者入院后次日清晨抽取空腹靜脈血3 mL，對照組體檢者體檢當(dāng)日清晨抽取空腹靜脈血3 mL，在低溫離心機(jī)中離心（3 000 r/min，15 min）后分離血清，將其置于-70℃冰箱中貯存以待檢測。采用高壓液相色譜法（日本Bio Rad 公司）檢測HbA1c，采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測25-OH-D3 水平，采用流式細(xì)胞儀檢測T 淋巴細(xì)胞亞群水平，操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.2 胰島分泌相關(guān)指標(biāo)檢測

所有研究對象入院后進(jìn)行口服葡萄糖耐受試驗(yàn)（oral glucose tolerance test，OGTT）及胰島素釋放試驗(yàn)。采用電化學(xué)發(fā)光法測定FINS 水平，采用葡萄糖氧化酶法測定BG、HOMA-β、HOMA-IR、PR 情況，并采用葡萄糖負(fù)荷后30 min 的凈增胰島素與凈增葡萄糖比值（⊿I30/⊿IG30）來直接評估胰島素分泌功能。PR=峰值/FINS，HOMA-β= FINS×20/（FPG-3.5），HOMA-IR = FPG X FIN S/22.5。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)分析；P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組間BMI、HbA1c 及25-OH-D3 水平比較

兩組BMI比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；觀察組HbA1c水平顯著高于對照組，而25-OH-D3水平顯著低于對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組間BMI、HbA1c 及25-OH-D3 水平比較（±s）Table 1 Comparison of BMI，HbA1c and 25-oh-d3 levels between the two groups（±s）

表1 兩組間BMI、HbA1c 及25-OH-D3 水平比較（±s）Table 1 Comparison of BMI，HbA1c and 25-oh-d3 levels between the two groups（±s）

分組對照組觀察組t 值P 值n 60 92--BMI（kg/m2）23.87±1.12 24.09±1.27 1.093 0.276 HbA1c（%）5.87±0.65 8.15±1.16 13.862＜0.001 25-OH-D3（mmol/L）44.76±3.59 23.19±1.17 53.516＜0.001

2.2 兩組間T 淋巴細(xì)胞亞群比較水平

觀察組CD4+水平、CD4+/CD8+值顯著低于對照組，而CD8+水平高于對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組間T 淋巴細(xì)胞亞群比較水平（±s）Table 2 Comparison of T lymphocyte subsets between the two groups（±s）

表2 兩組間T 淋巴細(xì)胞亞群比較水平（±s）Table 2 Comparison of T lymphocyte subsets between the two groups（±s）

組別對照組觀察組t 值P 值n 60 92--CD4+42.68±3.97 33.19±2.07 19.280＜0.001 CD8+24.89±2.47 29.08±4.09 7.128＜0.001 CD4+/CD8+1.81±0.37 1.22±0.25 10.837＜0.001

2.3 兩組胰島分泌相關(guān)指標(biāo)比較

觀察組FBG、FINS、HOMA-β、HOMA-IR 及PR 值顯著高于對照組，而⊿I30/⊿IG30顯著低于對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 T2DM 患者血清HbA1c 和胰島分泌的相關(guān)性分析

T2DM 患者血清HbA1c 水平與FBG 呈正相關(guān)，與FINS、HOMA-β、PR 及⊿I30/⊿IG30呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見表4。

2.5 T2DM 患者血清25-OH-D3 和胰島分泌的相關(guān)性分析

T2DM 患者血清25-OH-D3 水平與FINS、HOMA-β、PR 及⊿I30/⊿IG30呈正相關(guān)，與FBG 及HOMA-IR 呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見表5。

表3 兩組胰島分泌相關(guān)指標(biāo)比較（±s）Table 3 Comparison of related indexes of islet secretion between 2 groups（±s）

表3 兩組胰島分泌相關(guān)指標(biāo)比較（±s）Table 3 Comparison of related indexes of islet secretion between 2 groups（±s）

組別對照組觀察組t 值P 值n 60 92--FBG（mmol/L）5.14±0.32 7.95±1.09 19.411＜0.001 FINS（μg/mL）7.98±1.54 20.13±3.53 25.125＜0.001 HOMA-β 57.97±2.04 72.19±2.89 33.097＜0.001 HOMA-IR 1.59±0.33 7.23±1.21 35.224＜0.001 PR 8.12±0.79 17.90±1.56 44.915＜0.001⊿I30/⊿IG30 30.79±3.13 19.07±1.22 32.384＜0.001

表4 T2DM 患者血清HbA1c 和胰島分泌的相關(guān)性分析Table 4 Correlation Analysis of serum HbA1c and islet secretion in T2DM patients

表5 T2DM 患者血清25-OH-D3 和胰島分泌相關(guān)性Table 5 Correlation Analysis of serum 25-OH-D3 and islet secretion in T2DM patients

2.6 T2DM 患者T 淋巴細(xì)胞亞群和胰島分泌的相關(guān)性分析

T2DM 患者CD8+、CD4+/CD8+與FBG、FINS、HOMA-β、HOMA-IR 及PR 均無顯著相關(guān)性（P＞0.05）；而CD4+與FBG、HOMA-IR 呈負(fù)相關(guān)，而與FINS、HOMA-β、PR 及⊿I30/⊿IG30 呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表6。

表6 T2DM 患者T 淋巴細(xì)胞亞群和胰島分泌的相關(guān)性Table 6 correlation analysis of T lymphocyte subsets and islet secretion in T2DM patients

3 討論

本組數(shù)據(jù)顯示，HbA1c 水平與FBG 呈正相關(guān)，與FINS、HOMA-β、PR 及⊿I30/⊿IG30 呈負(fù)相關(guān)，提示，在T2DM 患者中，HbA1c 水平的表達(dá)與胰島分泌功能具有密切聯(lián)系。相關(guān)文獻(xiàn)提出，HbA1c 水平越高提示患者近期血糖水平控制不佳［6］。而HbA1c 與FINS、HOMA-β、PR 及⊿I30/⊿IG30 呈負(fù)相關(guān)，與HOMA-IR 無相關(guān)性，提示隨著HbA1c 水平的升高，患者胰島β 細(xì)胞功能已受損，分泌功能出現(xiàn)下降，考慮機(jī)制可能為長期高血糖導(dǎo)致一系列氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生。故動態(tài)監(jiān)測T2DM 患者HbA1c水平有利于評估患者近期血糖控制及預(yù)防。

曾有國外動物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，機(jī)體維生素D 水平過于缺乏對胰島素的分泌存在不良影響，從而導(dǎo)致胰島素分泌不足，增加T2DM 發(fā)生風(fēng)險［7］。本組數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，F(xiàn)INS、HOMA-β、HOM A-IR 及PR 是反映胰島素分泌的良好指標(biāo)，而⊿I30/⊿IG30值大小可直接反映胰島功能好壞。經(jīng)Pearson相關(guān)分析提示25-OH-D3 水平的缺乏與胰島分泌功能的相關(guān)性。曾有生物學(xué)研究證實(shí)，25-OH-D 可與胰腺維生素D 受體結(jié)合，然后激活β 細(xì)胞中L 型鈣離通道，使得胰島素釋放，胰島素受體底物酪氨酸磷酸化，從而啟動胰島素信號的傳導(dǎo)，達(dá)到胰島素分泌控制血糖效果［8］。故當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)25-OH-D3 缺乏時，可能是導(dǎo)致T2DM 患者胰島分泌功能減弱下降的主要原因，從而引發(fā)血糖升高等現(xiàn)象。

近年來，不少國內(nèi)外研究報道在T2DM 患者中存在免疫異常［9］。相關(guān)研究報道顯示，在內(nèi)循環(huán)中，CD4+、CD4+/CD8+值的降低是免疫缺陷的重要指征［10］，而本研究結(jié)果符合上述研究理論。除此之外，本組Pearson 相關(guān)分析提示機(jī)體免疫缺陷的產(chǎn)生與胰島分泌功能密切相關(guān)。曾有相關(guān)報道表明，自身免疫性胰島炎與T2DM 患者胰島β 細(xì)胞凋亡及胰島分泌缺陷有著密切聯(lián)系，而胰島炎的發(fā)生可能是機(jī)體固有免疫系統(tǒng)激活的結(jié)果，在免疫系統(tǒng)的激活中，T 淋巴細(xì)胞亞群的失衡扮演著重要角色［11］。李蓉等［12］報道，當(dāng)血糖升高時，淋巴細(xì)胞數(shù)量下降，且長期高血糖會導(dǎo)致免疫缺陷的產(chǎn)生和T 淋巴細(xì)胞亞群紊亂，從而加重胰島β 細(xì)胞凋亡和胰島分泌功能的障礙。故高血糖、細(xì)胞免疫異常及胰島分泌缺陷在T2DM 中呈現(xiàn)惡性循環(huán)，相互影響，但是具體詳細(xì)機(jī)制還有待加大樣本含量和延長研究時間進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，HbA1c、CD8+在T2DM 患者中表達(dá)上升，而25-OH-D3、CD4+及CD4+/CD8+值表達(dá)下降，且隨著HbA1c 的升高、CD4+的下降及25-OH-D3的缺乏，胰島素敏感性下降，胰島分泌功能減弱，故聯(lián)合三者檢測有利于評估T2DM 患者胰島分泌功能，在臨床治療上具有一定指導(dǎo)意義。