土貝母苷甲抗腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展

王中會(huì)，晁 旭，2，呂天依，胡錦丹，閆平慧

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué),陜西 咸陽(yáng)712046；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng) 712046)

癌癥是世界上最嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一，也是導(dǎo)致人類(lèi)死亡的主要原因之一。目前臨床上的治療方法主要有手術(shù)、放化療、基因療法和生物療法。然而，這些標(biāo)準(zhǔn)治療方案具有成功率較低、易耐藥、復(fù)發(fā)率高、癌細(xì)胞易發(fā)生轉(zhuǎn)移、不良反應(yīng)多和并發(fā)癥嚴(yán)重等缺點(diǎn)[1]。惡性腫瘤的治療仍然面臨著很大的挑戰(zhàn)。

《黃帝內(nèi)經(jīng)》云：“正氣存內(nèi)，邪不可干；邪之所湊，其氣必虛”，李中梓言：“積之成也，正氣不足，而后邪氣踞之……”說(shuō)明包括腫瘤的發(fā)生主要由于正氣不足，陰陽(yáng)失衡，氣機(jī)逆亂，氣血陰液失常，與邪毒結(jié)聚，發(fā)為腫瘤[2]，屬于“癥瘕”“積聚”的范疇。因此，扶正祛邪為總的治則，根據(jù)患者情況酌情變化用藥，正氣尚不虧虛時(shí)以祛邪為主，治法如清熱解毒、散結(jié)消腫等，正氣出現(xiàn)虧虛時(shí)則以扶正氣為主，兼以祛邪。

土貝母來(lái)源于葫蘆科植物土貝母Bolbostemma paniculatum(Maxim.)Franquet 的干燥塊莖，又名土貝、大貝母、地苦膽、草貝。首載于《本草征要》，有解毒、散結(jié)、消腫之功效，主治乳癰，瘰疬，痰核等疾病[3]。土貝母苷甲(Tubeimoside Ⅰ，TBMSⅠ)是從土貝母中提取的三萜皂苷，其抗癌作用的潛在機(jī)制正逐漸被揭示。大量的研究證實(shí)TBMSⅠ在體內(nèi)外不同的致癌階段都具有抗癌活性，通過(guò)多靶點(diǎn)、多通路抑制腫瘤的進(jìn)展。以下將根據(jù)腫瘤系統(tǒng)分類(lèi)綜述TBMSⅠ的抗腫瘤作用機(jī)制。

1 呼吸系統(tǒng)腫瘤

1.1 TBMSⅠ與肺癌 肺癌是全球最常見(jiàn)的癌癥之一，發(fā)生率和病死率一直居高不下，5年總生存率低于15%[4]。因此，尋找有效的方法來(lái)治療肺癌是至關(guān)重要的。大量研究證明，TBMS Ⅰ對(duì)肺癌具有細(xì)胞毒性作用。

1.1.1 抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)凋亡：國(guó)醫(yī)大師周仲英認(rèn)為，虛、毒、瘀等邪氣膠著日久，發(fā)為癌毒。癌毒兼夾流竄，與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移高度一致，因此，可運(yùn)用中醫(yī)藥的清熱解毒、散結(jié)消腫等治法抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，從而誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡。Zhang等[5]研究發(fā)現(xiàn)，在肺癌A549細(xì)胞中，TBMSⅠ通過(guò)增加Bax與Bcl-2的比值和降低COX-2的表達(dá)來(lái)抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。此外，還通過(guò)上調(diào) Caspase-9、Caspase-3 和多聚ADP-核糖聚合酶(Parp) 蛋白表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[6]。

Hao等[7]發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ作用于肺癌細(xì)胞A549和PC9后，上調(diào)p15、p21、細(xì)胞周期蛋白-B1(cyclin-B1)和凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-8以及促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，下調(diào)抗凋亡蛋白Mcl-1和c-IAP1的表達(dá)，使細(xì)胞阻滯在G2/M期，提示TBMSⅠ通過(guò)調(diào)節(jié)多種凋亡相關(guān)基因誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。并且，TBMSⅠ還通過(guò)抑制AP-1、NF-κB和TNF-α的活化抑制A549和PC9的增殖。此外，TBMSⅠ還通過(guò)增加JNK和MAPK的磷酸化水平來(lái)增強(qiáng)MAPK-JNK信號(hào)通路的活性，以及誘導(dǎo)活性氧(ROS)的產(chǎn)生，從而抑制肺癌的進(jìn)展。

Lin等[8]通過(guò)基于細(xì)胞培養(yǎng)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，暴露于TBMSⅠ后，NCI-H460肺癌細(xì)胞中29個(gè)核糖體蛋白(Ribosomal proteins，RPs)差異表達(dá)，其中2/5的RPs的差異超過(guò)了1.2倍，提示TBMSⅠ可能導(dǎo)致核糖體功能障礙和游離RP升高。RP表達(dá)增加，與小鼠雙微體2(MDM2)結(jié)合增加，激活下游分子p53,p53的Ser15和Ser37位點(diǎn)磷酸化水平上升，MDM2的Ser166磷酸化水平下降，破壞p53和MDM2的循環(huán)。另外，TBMSⅠ通過(guò)下調(diào)p-mTOR、p-p70S6K表達(dá)和上調(diào)IκBα表達(dá)來(lái)破壞mTOR和NF-κB信號(hào)通路誘導(dǎo)NCI-H460細(xì)胞凋亡。

另外，NCI-H1299細(xì)胞中，TBMSⅠ能上調(diào)原本在NSCLC組織中低表達(dá)的microRNA(miR)-126-5p的表達(dá)，觸發(fā)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-A(VEGF-A)、VEGFR-2和ERK1/2途徑的失活，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并抑制人NSCLC細(xì)胞NCI-H1299的遷移和侵襲。

1.1.2 TBMSⅠ誘導(dǎo)癌細(xì)胞自噬：自噬是一種重要的細(xì)胞再循環(huán)機(jī)制，負(fù)責(zé)降解故障或不必要的細(xì)胞蛋白質(zhì)和細(xì)胞器[9]。癌細(xì)胞通過(guò)上調(diào)自噬途徑表現(xiàn)出強(qiáng)大的適應(yīng)能力。

Wang等[10]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ是一種有效的自噬抑制劑，破壞線粒體通路誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡。也能夠抑制V-ATPase破壞溶酶體酸化，阻斷晚期自噬通量，影響功能失調(diào)線的粒體的清除，導(dǎo)致ROS積累。ROS過(guò)度積累后引起溶酶體膜損傷使溶酶體膜通透性增強(qiáng)，進(jìn)而導(dǎo)致組織蛋白酶B的泄漏，組織蛋白酶B上調(diào)Bax介導(dǎo)的線粒體外膜通透性，進(jìn)而導(dǎo)致胞質(zhì)細(xì)胞色素c介導(dǎo)的Caspase依賴(lài)性凋亡。從而形成了一種正反饋回路增強(qiáng)了TBMSⅠ對(duì)肺癌細(xì)胞的殺傷作用。

1.1.3 抑制癌細(xì)胞血管生成：《醫(yī)林改錯(cuò)》言：“肚腹結(jié)塊,必有形之血”。因此，可通過(guò)抑制血管生成阻礙腫瘤的發(fā)展。Gu等[11]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ顯著抑制CD1 nu/nu小鼠非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)異種移植瘤生長(zhǎng)，降低NCI-H460側(cè)腫瘤中CD31陽(yáng)性微血管的密度，并以劑量依賴(lài)性方式顯著抑制VEGFR2和第二代抗血管生成化合物血管生成素-2(Ang-2)/Tie2(TEK)在內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)，這與AKT/mTOR信號(hào)通路的下調(diào)有關(guān)。另外，TBMSⅠ在大鼠主動(dòng)脈環(huán)試驗(yàn)中可抑制血管芽的形成，加速內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，并通過(guò)阻斷肌動(dòng)蛋白絲組織抑制小鼠內(nèi)皮END2細(xì)胞的遷移[12]。

1.1.4 降低耐藥性：順鉑(CDDP)是晚期肺癌的常用化療藥，療效明確。然而長(zhǎng)期使用易產(chǎn)生耐藥性。王欣悅等[13]研究發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合TBMSⅠ后，CDDP作用于耐藥的NSCLC細(xì)胞A549/DDP可上調(diào) p53、Caspase-3 表達(dá)，降低Bcl-2/Bax的比值，抑制A549/DDP細(xì)胞的耐藥性。

1.2 TBMSⅠ與鼻咽癌 鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，多發(fā)生于華南地區(qū)，其癌癥發(fā)病率和癌癥相關(guān)死亡率均排第7，對(duì)放療比較敏感[14]。NPC放療失敗的患者雖可繼續(xù)選擇手術(shù)切除或者化療，但總體效果令人不滿(mǎn)意。因此，尋找對(duì)NPC低毒高效的藥物具有重要意義。

Ma等[15]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ可能通過(guò)在微管蛋白的秋水仙堿微管蛋白結(jié)合位點(diǎn)抑制微管聚合來(lái)發(fā)揮其對(duì)鼻咽癌CNE-2N細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。另外，TBMSⅠ通過(guò)下調(diào)Bcl-2和上調(diào)Bax、Caspase-3[16]，使Raf-1蛋白磷酸化活化并激活MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[17]來(lái)誘導(dǎo)CNE-2N細(xì)胞凋亡。

2 消化系統(tǒng)腫瘤

2.1 TBMSⅠ與肝癌 肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上第七大常見(jiàn)癌癥，是也癌癥相關(guān)死亡的第二大常見(jiàn)原因，占癌癥總死亡人數(shù)的8.2%[18]，手術(shù)、放化療、肝移植等是目前治療HCC的常規(guī)手段，然而術(shù)后的高復(fù)發(fā)率和高轉(zhuǎn)移率嚴(yán)重影響患者的生命質(zhì)量。因此，需要尋找新的低毒有效的藥物來(lái)改變現(xiàn)狀。大量研究表明TBMSⅠ有作為HCC化療藥物的候選物的潛力。

2.1.1 抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，誘導(dǎo)凋亡：Wang等[19]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ以劑量-時(shí)間依賴(lài)的方式抑制人肝癌細(xì)胞HepG2、HCCLM3和正常肝細(xì)胞L-02、QSG-7701的增殖，但對(duì)HepG2更為敏感。進(jìn)一步研究其機(jī)制發(fā)現(xiàn)TBMSⅠ誘導(dǎo)細(xì)胞收縮、核凝結(jié)和碎裂，細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，線粒體膜破裂，細(xì)胞色素c從線粒體釋放， Caspase-3和Caspase-9激活，Bax/Bcl-2比值由抗凋亡向促凋亡轉(zhuǎn)變，以上表明TBMS I通過(guò)介導(dǎo)級(jí)聯(lián)凋亡信號(hào)通路有效抑制HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)。

Fas是一種原型死亡受體，在細(xì)胞表面受到損傷時(shí)啟動(dòng)外部凋亡途徑，F(xiàn)as通過(guò)與FasL連接而激活[20]，構(gòu)成一個(gè)誘導(dǎo)死亡的信號(hào)復(fù)合體。Yin等[21]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ通過(guò)觸發(fā)內(nèi)在途徑和外在途徑誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，即Fas和FasL表達(dá)增加，Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9被激活，F(xiàn)as、Fas配體、Bcl-2和Bax的表達(dá)受到調(diào)節(jié)。另外，TBMSⅠ在G2/M期誘導(dǎo)ROS積累和細(xì)胞周期停滯，從而通過(guò)TNF-α、NF-κB、JNK和p53的信號(hào)調(diào)節(jié)促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

2.1.2 誘導(dǎo)癌細(xì)胞自噬：AMPK途徑是癌癥中最關(guān)鍵的信號(hào)途徑之一，持續(xù)激活A(yù)MPK會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移或侵襲[22]。LC3是監(jiān)測(cè)自噬的生物標(biāo)志物，LC3-I轉(zhuǎn)變?yōu)長(zhǎng)C3-Ⅱ顯示自噬啟動(dòng)[23]。Ruan等[24]發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ處理HepG2細(xì)胞后，自噬體積累，Beclin 1和微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3)-1的mRNA表達(dá)增加。此外，TBMSⅠ以濃度依賴(lài)的方式增加了AMPK的磷酸化，從而激活A(yù)MPK信號(hào)通路。AMPK特異性抑制劑化合物C(CC)可顯著抑制TBMSⅠ誘導(dǎo)的LC3 Ⅱ積累，TBMS Ⅰ和CC聯(lián)合處理后，HepG2細(xì)胞中LC3 Ι和Beclin 1的mRNA表達(dá)也受到抑制。以上研究提示TBMSⅠ通過(guò)激活A(yù)MPK信號(hào)通路，誘導(dǎo)受損自噬體的積累，觸發(fā)肝癌細(xì)胞的自噬。

2.2 TBMSⅠ與結(jié)直腸癌 結(jié)腸直腸癌(Colorectal cancer，CRC)是常見(jiàn)惡性腫瘤之一，是全球第三大確診癌癥和第二大癌癥相關(guān)死亡的原因[25]。晚期CRC的治療主要是化療，但仍有一部分患者對(duì)目前常用的化療藥物耐藥而終復(fù)發(fā)，使療效受到限制。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)治療CRC的新藥。研究表明TBMSⅠ在CRC中有抗腫瘤作用。

2.2.1 調(diào)節(jié)自噬提高CRC對(duì)化療藥的敏感性：Yan等[26]研究發(fā)現(xiàn)TBMSⅠ既可以通過(guò)ROS誘導(dǎo)的AMPK激活來(lái)促進(jìn)自噬的啟動(dòng)，也可以通過(guò)抑制溶酶體水解酶來(lái)阻斷自噬通量，從而導(dǎo)致自噬性溶酶體積累的大量受損。自噬起始抑制劑(3-MA或選擇性消融自噬相關(guān)蛋白)可緩解了TBMSⅠ誘導(dǎo)的CRC抑制，而自噬通量抑制劑氯喹(CQ)的聯(lián)合使用輕微增加了TBMSⅠ誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。提示受損的自噬溶酶體積累有助于TBMSⅠ誘導(dǎo)的CRC細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。作為一種自噬通量抑制劑，低劑量的TBMSⅠ與5-FU或DOX協(xié)同作用對(duì)CRC細(xì)胞具有良好的合成致死作用，以上提示TBMSⅠ與常規(guī)抗癌療法的聯(lián)合治療可能值得考慮通過(guò)調(diào)節(jié)自噬進(jìn)行臨床試驗(yàn)。

2.2.2 抑制CRC的遷移和侵襲：Bian等[27]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ能抑制CRC細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，并降低β-連環(huán)蛋白在CRC細(xì)胞中的表達(dá)。β-連環(huán)蛋白的過(guò)度表達(dá)挽救TBMSⅠ誘導(dǎo)的增殖和侵襲抑制，而β-連環(huán)蛋白的敲除增強(qiáng)了TBMSⅠ誘導(dǎo)的增殖和侵襲抑制。以上提示TBMSⅠ通過(guò)抑制Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路抑制CRC細(xì)胞增殖和侵襲。

2.2.3 抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，誘導(dǎo)凋亡：于超等[28]研究發(fā)現(xiàn),TBMSⅠ通過(guò)下調(diào) Bcl-2和p53，上調(diào)Fas表達(dá)，并將細(xì)胞周期阻滯在S期，從而誘導(dǎo)SW480細(xì)胞凋亡。

2.3 TBMSⅠ與胃癌 胃癌在全球癌癥相關(guān)存活率中排名第五，在癌癥相關(guān)死亡率中排名第三[18]，五年生存率低于20%[29]。因此，有必要找到更有效的胃癌治療藥物，以提高患者生存率。研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡發(fā)揮抗腫瘤作用，可能被開(kāi)發(fā)為胃癌治療的抗癌劑。Zhang等[29]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ通過(guò)上調(diào)Bax水平，下調(diào)Bcl-2水平，使Bax與Bcl-2的比值呈濃度依賴(lài)性增加，從而抑制胃癌細(xì)胞BGC823增殖。

2.4 TBMSⅠ與食管癌 食管癌(Esophageal cancer，EC)在全球發(fā)病率排名第七，死亡率第六[18]，有兩種組織學(xué)亞型，即食管鱗狀細(xì)胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)和食管腺癌(Esophageal adenocarcinoma，EAC)。在中國(guó)，ESCC占EC的90%以上。因此大多數(shù)研究以ESCC為主。

Xu等[30]研究發(fā)現(xiàn)，EC109細(xì)胞經(jīng)TBMSⅠ處理后，線粒體跨膜電位破壞，Caspase-3和Caspase-9活性升高，AIF被釋放、Bax與Bcl-2比值增加，PARP裂解。另外，TBMSⅠ還通過(guò)降低cdc2、cyclin-B1和p21的表達(dá)將EC109細(xì)胞阻滯在G2/M期。以上提示TBMSⅠ通過(guò)線粒體內(nèi)在凋亡和P21-cdc2/cyclin-B1信號(hào)通路誘導(dǎo)凋亡。

3 女性生殖系統(tǒng)腫瘤

3.1 TBMSⅠ與宮頸癌 宮頸癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率都居于第四[18]，嚴(yán)重危害了女性的健康。

3.1.1 抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，誘導(dǎo)凋亡：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成、蛋白質(zhì)折疊和細(xì)胞內(nèi)鈣(Ca2+)水平的關(guān)鍵位點(diǎn)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能的異?？蓪?dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，激活一系列被稱(chēng)為“未折疊蛋白質(zhì)反應(yīng)”(UPR)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[31]。GADD153/CHOP是一種促凋亡的轉(zhuǎn)錄因子，在生理?xiàng)l件下極少表達(dá)，但在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時(shí)強(qiáng)烈誘導(dǎo)表達(dá)。Xu等[32]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ對(duì)HeLa細(xì)胞進(jìn)行處理后，線粒體跨膜電位(△Ψm)耗竭，導(dǎo)致Caspase依賴(lài)性凋亡細(xì)胞死亡的激活。在TBMSⅠ治療后，UPR信號(hào)通路也被激活，這些變化伴隨著GADD153/CHOP的表達(dá)增加。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的選擇性抑制劑(Sal)可部分消除TBMSⅠ誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。以上提示TBMSⅠ通過(guò)線粒體功能障礙和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激細(xì)胞死亡途徑對(duì)HeLa細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性。

3.1.2 誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯：Xu等[33]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ下調(diào)cyclinB1、Cdc2和Cdc25C的水平，上調(diào)Chk2磷酸化水平，Cdc25C的細(xì)胞質(zhì)隔離、Cip1/p21誘導(dǎo)和微管蛋白聚合異常，提示TBMSⅠ介導(dǎo)的HeLa細(xì)胞在G2/M期發(fā)生細(xì)胞周期停滯。

3.2 TBMSⅠ與卵巢癌 卵巢癌是婦科惡性腫瘤里最常見(jiàn)和最致命的一種惡性腫瘤，雖然發(fā)病率在婦科惡性腫瘤里排第三，但病死率卻高居榜首[34]。雖然手術(shù)和化療有一定的療效，然而，大多數(shù)會(huì)經(jīng)歷疾病的復(fù)發(fā)。因此，必須找到具有更高活性和反應(yīng)率的新型化療藥。研究表明，TBMSⅠ有抑制卵巢癌發(fā)生發(fā)展的作用。

3.2.1 抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，誘導(dǎo)凋亡：Chen等[35]研究表明，TBMSⅠ對(duì)SKOV-3細(xì)胞增殖產(chǎn)生劑量和時(shí)間依賴(lài)性的抑制，阻滯在G2/M期，并增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平，上調(diào)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78/免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白(GRP78/Bip)和C/EBP同源蛋白(CHOP)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生。另外，磷酸化p38/MAPK提高Bax的表達(dá)，磷酸化ERK1/2降低Bcl-2的表達(dá)，Bax和Bcl-2蛋白比例發(fā)生變化，激活下游信號(hào)Caspase-3，最終導(dǎo)致SKOV-3細(xì)胞凋亡。

3.2.2 降低卵巢癌對(duì)CDDP的耐藥性：Liu等[36]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ-CDDP共用可促進(jìn)人卵巢癌細(xì)胞A2780/DDP凋亡，降低增殖活性，并增加胞質(zhì)Ca2+水平，下調(diào)ERK1/2和通過(guò)Bcl-2和Bax上調(diào)p38信號(hào)通路，以及 GST-π mRNA和蛋白表達(dá)的降低，提示TBMSⅠ通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和下調(diào)CDDP耐藥基因，抑制CDDP耐藥A2780/DDP細(xì)胞的增殖。而p38抑制劑(SB203580)和ERK1/2抑制劑(PD98059)可有效阻斷了這一作用。

3.3 TBMSⅠ與絨毛膜癌 絨毛膜癌是生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。Huang等[37]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ對(duì)人絨毛膜癌細(xì)胞JEG-3的生長(zhǎng)有很強(qiáng)的抑制作用。經(jīng)TBMSⅠ處理后，細(xì)胞顯著凋亡，細(xì)胞周期明顯阻滯在G2期，△Ψm下降，細(xì)胞色素c從線粒體釋放，Caspase-3表達(dá)增強(qiáng),上調(diào)Bax表達(dá)，下調(diào)Bcl-2表達(dá)，抑制NF-κB功能，并影響p38/MAPK、ERK1/2 Akt的磷酸化，以上提示TBMSⅠ通過(guò)誘導(dǎo)線粒體功能障礙和調(diào)節(jié)p38/MAPK、ERK1/2和PI3K/Akt信號(hào)通路誘導(dǎo)JEG-3細(xì)胞凋亡。

3.4 TBMSⅠ與乳腺癌 乳腺癌在女性中是最常見(jiàn)的癌癥，也是癌癥死亡的主要原因[18]，尋找新的化療藥物來(lái)降低癌癥相關(guān)病死率是當(dāng)前醫(yī)學(xué)面臨的重大挑戰(zhàn)。TBMSⅠ相關(guān)的抗腫瘤作用也越來(lái)越多的被人們所研究。

3.4.1 誘導(dǎo)癌細(xì)胞自噬：Jiang等[38]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ通過(guò)Akt介導(dǎo)的信號(hào)通路在MCF-7、MDAMB-231和T47D人乳腺癌細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞保護(hù)性自噬。這種效應(yīng)與LC3-Ⅱ量的增加，導(dǎo)致自噬體形成和自噬流量的增加有關(guān)。另外，TBMSⅠ降低了包括p-Akt (Ser473和thr308)、p-mTOR (p70S6K)在內(nèi)的Akt-mTOR信號(hào)通路的表達(dá)，并增加了真核翻譯延伸因子2激酶(eEF-2K)信號(hào)通路的表達(dá)，如p-eEF-2K (Thr56)，提示Akt-mTOR-eEF-2K通路參與了TBMSⅠ誘導(dǎo)的自噬。此外，Akt介導(dǎo)的抗凋亡Bcl-2家族蛋白水平的降低，如Mcl-1、Bcl-xl和Bcl-2，有助于刺激凋亡。CQ對(duì)自噬的抑制或Beclin1表達(dá)的沉默增加了TBMSⅠ導(dǎo)的凋亡，表明自噬具有促進(jìn)存活的作用。

3.4.2 抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移：CXCL12/CXCR4信號(hào)軸在刺激癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移方面具有重要作用。Peng等[39]研究發(fā)現(xiàn)，TBMSⅠ可顯著下調(diào)人乳腺癌T47D、MDA-MB-435和MCF-7細(xì)胞中CXCR4和CXCL12的基因表達(dá)，而CXCR4的異位表達(dá)消除了TBMSⅠ對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞侵襲的抑制活性。TBMSⅠ(20 mg/kg，每日腹腔注射1個(gè)月)體內(nèi)治療顯著抑制裸鼠MDA-MB-231腫瘤的腫瘤體積和肺轉(zhuǎn)移，抑制NF-κB對(duì)CXCR4啟動(dòng)子的DNA結(jié)合活性。這些結(jié)果表明TBMSⅠ在體外和體內(nèi)劑量依賴(lài)性地抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。TBMSⅠ的抗轉(zhuǎn)移活性與CXCR4通過(guò)抑制NF-κB結(jié)合活性而下調(diào)有關(guān)。

4 神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤

4.1 TBMSⅠ與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(Glioblastoma，GBM)是惡性膠質(zhì)瘤中最常見(jiàn)的亞型。是一種高轉(zhuǎn)移、高復(fù)發(fā)的惡性腫瘤，放化療的預(yù)后較差[40]。可從天然植物中研究新的有效化療藥物來(lái)提高GBM患者的生存率。TBMSⅠ因其抗癌活性有成為抗癌新型化療藥的潛力。

MET具有酪氨酸激酶的活性，通常在上皮細(xì)胞中表達(dá)，可通過(guò)活化配體HGF(肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子)參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移[41]。TBMSⅠ不僅可以降低U87和LN229細(xì)胞中遷移蛋白MMP-7、MMP-2、Snail和Slug的表達(dá)，從而抑制GBM的遷移和侵襲，還通過(guò)增強(qiáng)MET泛素化降解抑制GBM細(xì)胞AKT、ERK通路的激活。蛋白酶體抑制劑MG-132可以顯著減弱TBMSⅠ 所致的MET泛素化水平下降。另外，TBMSⅠ 還可提高抑制Cyclin A2、Cyclin-B1和CDK1蛋白的表達(dá)將GBM細(xì)胞阻斷在G2/M期。

4.2 TBMSⅠ與膠質(zhì)瘤 膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的侵襲性惡性腫瘤之一，具有高復(fù)發(fā)率、高死亡率和低治愈率的特點(diǎn)。雖然近年來(lái)膠質(zhì)瘤在診斷和治療上取得了一定的進(jìn)展，但總生存率仍然很低，要改變這種現(xiàn)狀就需要尋找新的藥物。和其他藥物相比，TBMSⅠ已被證實(shí)具有良好的增效減毒作用。

TBMSⅠ通過(guò)抑制Akt磷酸化降低了人腦膠質(zhì)瘤u251細(xì)胞的活力。隨后通過(guò)靶向PI3K/Akt/p21和周期蛋白依賴(lài)性激酶1/Cyclin-B1信號(hào)級(jí)聯(lián)抑制DNA合成并誘導(dǎo)G2/M期阻滯。此外，TBMSⅠ還通過(guò)PI3K/Akt介導(dǎo)的Bcl-2信號(hào)通路觸發(fā)細(xì)胞凋亡。以上結(jié)果表明，TBMSⅠ通過(guò)PI3K/Akt依賴(lài)途徑抑制膠質(zhì)瘤的進(jìn)展。另外，TBMSⅠ還通過(guò)釋放細(xì)胞色素C和激活Caspase-3來(lái)增加活性氧濃度，同時(shí)調(diào)節(jié)Bax/Bcl-2比例，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

5 其他系統(tǒng)腫瘤

5.1 TBMSⅠ與前列腺癌 前列腺癌是全球男性第二大常見(jiàn)癌癥和第五大常見(jiàn)癌癥相關(guān)死亡原因[42-45]。雄激素剝奪治療是目前治療前列腺癌的主要方式，但到了晚期之后效果不顯。

TBMSⅠ處理前列腺癌細(xì)胞DU145和PC3之后，p53和p21表達(dá)增加、Cyclin E和Cdk2表達(dá)減少，提示TBMSⅠ將癌細(xì)胞阻滯在G0/G1。廣譜Caspase抑制劑Z-VAD-FMK預(yù)處理細(xì)胞后，抑制了TBMSⅠ的凋亡作用，但不能阻止G0/G1阻滯。另外，TBMSⅠ作用于DU145細(xì)胞后，ROS產(chǎn)生、線粒體功能障礙、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白和裂解的Caspase-3，激活A(yù)SK-1及其下游靶點(diǎn)p38和JNK，最終誘導(dǎo)線粒體凋亡。而NAC、SB203580、SP600125 (JNK抑制劑)Sal預(yù)處理細(xì)胞顯著逆轉(zhuǎn)了TBMSⅠ介導(dǎo)的Bax、Bcl-2和Caspase-3表達(dá)的變化，表明TBMSⅠ誘導(dǎo)DU145細(xì)胞氧化應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡。

5.2 TBMSⅠ與白血病 白血病是一種克隆性惡性造血干細(xì)胞疾病，也是第六大致命性癌癥，占所有癌癥新增病例的2.4%[18]。治療以化療為主，因而耐藥性成了治療該病的主要臨床障礙。為了更有效的治療白血病，急需尋求新的化療藥。

誘導(dǎo)分化是抑制惡性細(xì)胞生物行為的一個(gè)重要機(jī)制，而去分化被認(rèn)為是癌癥的標(biāo)志。TBMSⅠ誘導(dǎo)的早幼粒細(xì)胞白血病HL-60細(xì)胞分化為更加成熟的形式，具有粒細(xì)胞的形態(tài)和功能特征。

5.3 TBMSⅠ與黑色素瘤 黑色素瘤是皮膚癌中最具侵襲性的一種，占皮膚癌死亡人數(shù)的61.2%。手術(shù)切除和化療是黑色素瘤的主要治療方式，而化療耐藥的產(chǎn)生已成為惡性黑色素瘤治療的主要問(wèn)題之一。因此，尋找更有效、更有針對(duì)性的治療藥物迫在眉睫。

50%的黑色素瘤有BRAF突變，在所有類(lèi)型的突變中，超過(guò)80%是名為BRAFV600E的單核苷酸突變，它誘導(dǎo)下游MEK1/2-ERK1/2(也稱(chēng)為MAPK)級(jí)聯(lián)反應(yīng)的激活。發(fā)現(xiàn)于黑色素瘤中的BRAF(V600E)突變及其持續(xù)激活的下游MEK1/2-ERK1/2級(jí)聯(lián)在惡性腫瘤發(fā)生中起重要作用。然而，MEK1/2-ERK1/2級(jí)聯(lián)反應(yīng)過(guò)活化也可以抑制腫瘤生長(zhǎng)。TBMSⅠ快速激活了MEK1/2-ERK1/2，其抑制劑SL-327抑制了MEK1 /2，恢復(fù)了TBMSⅠ的抗癌作用。另外，鋅數(shù)據(jù)庫(kù)根據(jù)TBMSⅠ的結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)TBMSⅠ的靶點(diǎn)可能是蛋白酪氨酸磷酸酶1B (PTP1B)，通過(guò)PTP1B的選擇性抑制劑TCS401或shRNA抑制PTP1B，可以挽救TBMSⅠ在黑色素瘤細(xì)胞中的抗癌作用。以上結(jié)果提示TBMSⅠ可能激活PTP1B，而PTP1B進(jìn)一步激活MEK1/2-ERK1/2級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖。

6 小 結(jié)

許多抗癌藥物均具有有效的治療效果，然而，由于其不可忽視的不良反應(yīng)限制了臨床使用。中醫(yī)藥治療癌癥歷史悠久，不良反應(yīng)小或無(wú)不良反應(yīng)，近年來(lái)，中醫(yī)藥多層次、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)治療癌癥的研究越來(lái)越受到關(guān)注。TBMSⅠ是土貝母的主要藥理成分，具有高效低毒、水溶性好的特點(diǎn)，在抗腫瘤效用方面表現(xiàn)出獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)：①TBMSⅠ在體內(nèi)外對(duì)多種癌細(xì)胞均有明顯的抑制作用，并通過(guò)多種機(jī)制發(fā)揮良好的抗癌活性；②TBMSⅠ通過(guò)調(diào)節(jié)如Bcl-2家族蛋白、信號(hào)通路、MAPK-JNK、AKT/mTOR、p53/MDM2、MAPK-jnk、Wnt/b-catenin、P21-cdc2/cyclin-B1、ROS/MAPK、MAPK/p38、PI3K/Akt、NF-κB、ERK1/2、CXCL12-CXCR4和AktemTOReeEF-2K等多種信號(hào)通路抑制腫瘤進(jìn)展，可作為一種用于開(kāi)發(fā)治療各種癌癥的獨(dú)特治療劑的先導(dǎo)化合物。

但是，目前對(duì)于TBMSⅠ抗腫瘤研究還存在一些問(wèn)題：①盡管一些分子和經(jīng)典的途徑已經(jīng)被認(rèn)為是TBMSⅠ的可能靶點(diǎn)，但仍需要進(jìn)一步完善和探索相關(guān)機(jī)制，為可能應(yīng)用于癌癥治療提供更多的理論依據(jù)；②TBMSⅠ的安全劑量范圍尚未明確，還需進(jìn)行急性和長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究以確定其安全性；③雖然許多研究表明TBMSⅠ在培養(yǎng)的癌細(xì)胞中有化療致敏作用，但這些發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)意義尚不清楚。目前尚無(wú)相關(guān)的臨床應(yīng)用研究報(bào)道。因此，無(wú)論是單獨(dú)使用還是與現(xiàn)有療法協(xié)同使用，臨床前和臨床試驗(yàn)仍然需要闡明TBMSⅠ的抗癌作用。

綜上所述，中醫(yī)藥以其獨(dú)特的整體性和模式識(shí)別與治療的特點(diǎn)，在腫瘤防治過(guò)程中發(fā)揮重要作用，在藥用領(lǐng)域影響深遠(yuǎn)，而TBMSⅠ作為中藥單體之一，具有廣闊的應(yīng)用前景。