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    FGL-1作為LAG-3主要的免疫抑制配體在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展

    2021-01-10 04:24:16賈王強(qiáng)倪紅諺袁龍
    實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志 2021年4期
    關(guān)鍵詞:檢查點(diǎn)免疫治療配體

    賈王強(qiáng) 倪紅諺 袁龍

    鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院(鄭州450008)

    癌癥在全世界的病死率和發(fā)病率仍然居高不下,每年新增患者1 810 萬例,僅2018年因癌癥死亡人數(shù)達(dá)960 萬[1]。目前癌癥治療方法主要包括手術(shù)、化療、放療、免疫治療以及它們的組合療法,而免疫治療被學(xué)術(shù)界廣泛認(rèn)為是治療各種癌癥最重要的研究成果之一[2]。腫瘤特異性T 細(xì)胞在腫瘤進(jìn)展期間獲得的多種抑制性受體的表達(dá)可導(dǎo)致其功能失調(diào),而免疫治療作用于這些抑制性受體以逆轉(zhuǎn)其功能失調(diào),并阻斷抗腫瘤免疫反應(yīng)中抑制T 細(xì)胞的途徑,重新激活腫瘤特異性T細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)以促進(jìn)腫瘤消除[3]。免疫檢查點(diǎn)(immune checkpoint)是負(fù)向調(diào)節(jié)T 細(xì)胞功能的抑制信號分子,能夠抑制細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞(CTL)在腫瘤中殺傷癌細(xì)胞的能力[2,4]。盡管免疫檢查點(diǎn)治療在臨床中取得了重大突破,但腫瘤內(nèi)在抗性導(dǎo)致在實(shí)體腫瘤中大量使用免疫檢查點(diǎn)抑制劑的反應(yīng)率很低[2,5]。為了讓更多患者從免疫治療中受益,免疫治療的重點(diǎn)已轉(zhuǎn)向針對腫瘤微環(huán)境中的新型替代免疫檢查點(diǎn)[6],例如淋巴細(xì)胞活化基因-3(LAG-3)及其配體纖維介素蛋白-1(fibrinogen like protein 1,F(xiàn)GL-1)等。

    LAG3 是一種免疫檢查點(diǎn)受體蛋白,主要表達(dá)在活化的T 淋巴細(xì)胞上[7]。研究表明,主要組織相容性復(fù)合物Ⅱ類(MHC-Ⅱ)作為LAG-3的經(jīng)典配體,LAG-3 與MHC-Ⅱ分子的結(jié)合可以下調(diào)T 細(xì)胞的活性。然而,MHC-Ⅱ是否僅對LAG-3 有抑制功能仍是不清楚的。同時,LAG-3 也可增強(qiáng)調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞(Tregs)的抑制活性,通過治療性抗體抑制LAG-3,可解除LAG-3 對T 細(xì)胞的抑制作用,增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答[8-9]。纖維介素蛋白-1 是一種肝細(xì)胞分泌蛋白,屬于纖維蛋白原家族。在正常生理?xiàng)l件下,F(xiàn)GL-1蛋白主要由肝細(xì)胞分泌并促進(jìn)其有絲分裂和代謝功能[10-11]。最近有研究顯示FGL-1 是LAG-3的一個重要的功能性配體,并揭示了LAG-3-FGL-1通路在腫瘤免疫中的作用[12]。FGL-1 作為LAG-3的配體,其在體外和體內(nèi)以受體-配體相互依賴的方式發(fā)揮其對T 細(xì)胞的抑制功能。阻斷FGL-1-LAG-3 相互作用可以刺激腫瘤微環(huán)境中T 細(xì)胞的活化和增殖以提高機(jī)體對腫瘤的免疫與清除能力。癌癥患者血漿中FGL-1升高與預(yù)后不良和免疫治療效果有關(guān)[13]。雖然有一些研究對LAG-3 腫瘤免疫中的作用進(jìn)行了研究,但對于LAG-3-FGL-1通路在腫瘤免疫中的作用及可能的機(jī)制相關(guān)研究較少。本文旨在總結(jié)腫瘤患者與FGL-1 的關(guān)系,以及總結(jié)FGL-1 蛋白的生物學(xué)特征,揭示其可能的免疫學(xué)機(jī)制,期望能為腫瘤免疫治療提供新的思路。

    1 LAG-3 的結(jié)構(gòu)及功能

    LAG-3 是在活化的T 細(xì)胞上被發(fā)現(xiàn)的含有498個氨基酸的跨膜蛋白,由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)3 個部分組成[7-8]。該蛋白的編碼區(qū)位于人12 號染色體短臂的遠(yuǎn)端部分,與CD4 的編碼區(qū)相鄰。TRIEBEL 等[14]對LAG-3 的氨基酸序列的分析顯示,其具有4 個與CD4 高度同源的細(xì)胞外IgSF 域(D1~D4),而D1 的親和力高于CD4,因此其可以通過干擾MHC-Ⅱ與CD4 的結(jié)合來抑制T 細(xì)胞活化;LAG-3 可與MHC-Ⅱ相互作用以阻止相同的MHC分子與TCR 和CD4 結(jié)合,從而直接阻斷免疫反應(yīng)中的TCR 信號傳導(dǎo)通路。然而有研究[15]發(fā)現(xiàn),LAG-3 不能普遍結(jié)合MHC-Ⅱ,而是選擇性地結(jié)合穩(wěn)定的MHC-Ⅱ復(fù)合物(peptide-MHC class Ⅱ,pMHC-Ⅱ),并可優(yōu)先抑制與穩(wěn)定的pMHC-Ⅱ反應(yīng)的T 細(xì)胞的活化。此外,LAG-3 不會干擾CD4-pMHC-Ⅱ和TCR-pMHC-Ⅱ的相互作用。LAG-3 的IC 區(qū)由約60 個氨基酸殘基組成,LAG-3 的抑制功能需要其細(xì)胞內(nèi)的IC 區(qū)域參與,這表明LAG-3 會通過其IC 區(qū)域轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制信號。LAG-3 細(xì)胞質(zhì)尾部的分子結(jié)構(gòu)與其他免疫檢查點(diǎn)截然不同,它具有3 個結(jié)構(gòu)域:第1 個區(qū)域是絲氨酸磷酸化位點(diǎn);第2 個區(qū)域是含有KIEELE 基序的單個賴氨酸殘基,此結(jié)構(gòu)域?qū)φ{(diào)節(jié)CD4+T 細(xì)胞的功能至關(guān)重要;第3 個區(qū)域是谷氨酸-脯氨酸重復(fù)序列,與LAG-3 相關(guān)蛋白(LAG-3 related protein,LAP)結(jié)合,有助于定位LAG-3。在這3 個區(qū)域中,KIEELE 基序?qū)π盘栟D(zhuǎn)導(dǎo)和LAG-3 的抑制功能是不可或缺的[16]。

    2 腫瘤及TIL 中的LAG-3

    2.1 LAG-3 在腫瘤中的表達(dá)與作用LAG-3 在多種惡性腫瘤中異常表達(dá),與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。在慢性淋巴細(xì)胞性白血病中,LAG-3高表達(dá)患者的療效較差[17]。在肝細(xì)胞癌中LAG-3的高表達(dá)與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)[18]。在胃癌中,LAG-3 在CD4+T 和CD8+T 細(xì)胞上的表達(dá)升高,可能會損害細(xì)胞介導(dǎo)的免疫功能[19];LAG-3 在黑色素瘤的CD8+腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TIL)上表達(dá)與黑色素瘤的TNM 分期及預(yù)后有關(guān)[20];LAG-3 在乳腺癌患者中的表達(dá)與其存活率呈正相關(guān),與復(fù)發(fā)風(fēng)險呈負(fù)相關(guān)[21-23];在卵巢癌中,LAG-3在紐約食管鱗狀細(xì)胞癌-1(NY-ESO-1,New York esophageal squamous cell carcinoma-1)誘導(dǎo)的特異性CD8+T 細(xì)胞上高表達(dá),使其產(chǎn)生IFN-g 和TNF-a 的能力下降;此外,LAG-3 在肺癌及結(jié)直腸癌等惡性腫瘤中均高表達(dá)且與疾病預(yù)后有一定的關(guān)系[23]。

    2.2 LAG-3 在TIL 中的表達(dá)與作用在腫瘤進(jìn)展期間,腫瘤浸潤性CD4+T 細(xì)胞會慢慢衰竭,LAG-3的表達(dá)也會升高[24]。編碼LAG-3 分子與編碼CD4分子基因的染色體定位相同,擁有共同的外顯子和內(nèi)含子,因此LAG-3 與CD4 可能是同一基因復(fù)制進(jìn)化而來的。TRIEBEL 等[14]發(fā)現(xiàn)MHC-Ⅱ類分子是LAG-3 和CD4 的共同配體,LAG-3 與CD4 的同源性表明其可以結(jié)合MHC-Ⅱ類分子,LAG-3 通過與MHC-Ⅱ類分子結(jié)合并相互作用抑制特異性CD4+T 細(xì)胞的增殖。ASCIERTO 等[9]發(fā)現(xiàn),在CD4+T 細(xì)胞中的Th1 上可檢測到LAG-3,而在大部分Th2 上不能檢測到,這說明LAG-3 可作為區(qū)分Th1和Th2 的表面標(biāo)志物。然而后來又有研究[25-26]認(rèn)為,LAG-3 表達(dá)可能無法可靠地區(qū)分Th1 和Th2。LAG-3 在未活化的CD8+T 細(xì)胞表達(dá)較少,而當(dāng)受相應(yīng)的抗原刺激后,LAG-3 的表達(dá)顯著升高。LAG-3在活化的CD8+T 細(xì)胞上高水平表達(dá),抑制CD8+T 細(xì)胞的活化及增殖,從而抑制CD8+T 細(xì)胞的抗腫瘤活性。越來越多的研究發(fā)現(xiàn),LAG-3 可在各種類型腫瘤的腫瘤浸潤性CD8+T 細(xì)胞中過度表達(dá),如卵巢癌、肺癌、結(jié)直腸癌、肝細(xì)胞癌、腎細(xì)胞癌和其他實(shí)體腫瘤[23,27]。此外,LAG-3 分子的mRNA 在CD8+T 細(xì)胞表面高表達(dá)可導(dǎo)致CD8+T 細(xì)胞的功能缺陷。LAG-3 也在Treg 中高表達(dá)。最近的研究[28]發(fā)現(xiàn),LAG-3 可以促進(jìn)Treg 分化,而阻斷LAG-3 可以減弱其對Treg 的誘導(dǎo)作用,腫瘤浸潤性Treg 在腫瘤進(jìn)展過程中與PD-1、CTLA-4、LAG-3 和T 細(xì)胞免疫球蛋白粘蛋-3(TIM-3,T-cell immunoglobulin mucin-3)等抑制性分子一起可以增強(qiáng)Foxp3 的積累。有研究發(fā)現(xiàn)[29],LAG-3+Foxp3+Treg 細(xì)胞在外周血單個核細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞和DC 等)、TIL 及黑色素瘤、結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織中高表達(dá),活化的LAG-3+Treg 能夠產(chǎn)生IL-10 和轉(zhuǎn)化生長因子-b1(TGF-b1),LAG-3+Treg 細(xì)胞具有免疫抑制作用,與腫瘤免疫逃逸相關(guān)。LAG-3 潛在的生物學(xué)機(jī)制最初在活化的NK 細(xì)胞上被發(fā)現(xiàn),但LAG-3 對NK 細(xì)胞的調(diào)控作用在小鼠模型和人細(xì)胞模型中的結(jié)果并不一致。在小鼠身上的研究發(fā)現(xiàn),敲除LAG-3基因可以導(dǎo)致小鼠NK 細(xì)胞自然殺傷活性降低[30]。另有研究發(fā)現(xiàn),LAG-3抗體對人類的NK細(xì)胞自然殺傷活性沒有特異性影響,然而其機(jī)制尚不清楚[31]。根據(jù)最近的研究[32],LAG-3 在漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)上表達(dá)水平比在任何其他DC 亞群上都高。LAG-3 可以負(fù)向調(diào)節(jié)pDC 的活化,LAG-3 也被認(rèn)為是pDC 重要的功能標(biāo)志物。LAG-3 通過基于免疫受體酪氨酸的激活基序(ITAM,immunoreceptor tyrosine-based activation motif)抑制性信號傳導(dǎo)途徑與MHC-Ⅱ的相互結(jié)合抑制DC 的增殖和成熟[33]。LAG-3 在pDC 上高度表達(dá),有助于維持pDC 內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[34]。

    3 PD-1 聯(lián)合LAG-3 在腫瘤中的作用

    PD-1 作為一種免疫檢查點(diǎn),可以抑制T 細(xì)胞活化。許多研究發(fā)現(xiàn)通過特異性抗體阻斷PD-1可以明顯抑制多種腫瘤的進(jìn)展,如乳腺癌、黑色素瘤、肺癌和結(jié)直腸癌等[35-37]。同樣,與PD-1 一樣,LAG-3 也是一種免疫抑制檢查點(diǎn)分子,LAG-3 通過對T 細(xì)胞的調(diào)節(jié),使抗原特異性CD4+T 細(xì)胞增殖減少[38]。已有多項(xiàng)研究使用LAG-3 抗體治療多種惡性腫瘤,其中包括黑色素瘤、胰腺癌和晚期腎細(xì)胞癌[39-40]。然而,關(guān)于抗PD-1/LAG-3雙特異性抗體在惡性腫瘤中的研究較少,所以有必要開發(fā)針對PD-1 和LAG-3 的新型雙特異性抗體。FGL-1 作為LAG-3 的配體,在體外和體內(nèi)以受體-配體相互依賴的方式發(fā)揮對T 細(xì)胞的抑制作用,阻斷FGL-1-LAG-3 的相互作用可以刺激腫瘤微環(huán)境中T 細(xì)胞的活化和增殖,以提高機(jī)體對腫瘤的免疫與清除能力[41-42]。因此,通過阻斷FGL-1-LAG-3 通路和阻斷PD-1,可以為腫瘤的免疫治療提供一種新的治療方法。

    4 FGL-1 的結(jié)構(gòu)及功能

    FGL-1 是一種肝細(xì)胞分泌蛋白,最初是從人肝癌細(xì)胞中克隆得到的,并發(fā)現(xiàn)其在肝癌患者中高度表達(dá)。FGL-1 屬于纖維蛋白原家族,其C 端部分有與纖維蛋白原相關(guān)的結(jié)構(gòu)域,該結(jié)構(gòu)域存在于肌腱蛋白、纖維白蛋白、血管生成素、纖維蛋白原b和c 鏈中。FGL-1 與纖維蛋白原β-亞基和γ-亞基的羧基末端氨基酸具有高度同源性,但它不具有纖維蛋白原的3 個功能域:血小板結(jié)合位點(diǎn)、交聯(lián)區(qū)和凝血酶敏感位點(diǎn)。以前的研究發(fā)現(xiàn),F(xiàn)GL-1 的表達(dá)在再生肝臟中升高,并且FGL-1 可以刺激原代肝細(xì)胞中3H-胸苷的攝取,這說明FGL-1 可以促進(jìn)肝細(xì)胞增殖,因此有人認(rèn)為FGL-1 是肝臟再生因子。然而另有研究發(fā)現(xiàn),F(xiàn)GL-1 對肝癌細(xì)胞生長具有抑制作用,提示其在肝細(xì)胞增殖中具有抗增殖作用[43]。

    5 FGL-1 作為LAG-3 的主要功能配體在腫瘤中的表達(dá)及作用

    KIM 等[44]采用BioGPS 組織微陣列數(shù)據(jù)庫和蛋白質(zhì)組分析發(fā)現(xiàn),F(xiàn)GL-1 mRNA 和蛋白質(zhì)主要在人類正常的肝臟和胰腺組織中表達(dá)。Oncomine 數(shù)據(jù)庫的Meta 分析揭示了FGL-1 mRNA 在人類實(shí)體腫瘤中高表達(dá)的現(xiàn)象,這些腫瘤包括肺癌、前列腺癌、黑色素瘤和結(jié)直腸癌等,與正常組織相比,F(xiàn)GL-1 mRNA 在肺癌中具有最高的上調(diào)百分比(35%),而在胰腺、肝臟和頭頸癌中的表達(dá)有所降低。此外,惡性腫瘤基因組圖譜數(shù)據(jù)庫顯示,F(xiàn)GL-1 在肺腺癌中上調(diào)程度最高。FGL-1 在前列腺癌和乳腺癌中也顯著上調(diào),但在肝癌中下調(diào)。ZHANG 等[45]通過分析50 例胃癌組織及相應(yīng)癌旁組織中FGL-1的表達(dá),發(fā)現(xiàn)胃癌組織中FGL-1 的表達(dá)在mRNA 和蛋白水平上均明顯高于癌旁組織,F(xiàn)GL-1 在胃癌組織中上調(diào)與預(yù)后不良相關(guān)。

    WANG 等[41]采用基因組規(guī)模受體陣列技術(shù),使用IgFc 標(biāo)記的LAG-3 細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域融合蛋白(LAG-3-Ig)來檢測LAG-3 的結(jié)合蛋白,F(xiàn)GL-1 被證實(shí)是LAG-3-Ig 的主要結(jié)合蛋白。FGL-1 與LAG-3相互作用具有高度特異性,WANG 等[41]通過流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證了這種相互作用。LAG-3 蛋白由4 個Ig 樣細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域D1~D4 組成,通過結(jié)構(gòu)域缺失研究發(fā)現(xiàn),LAG-3 中D3~D4 結(jié)構(gòu)域的缺失不影響其與FGL-1 的結(jié)合,而單獨(dú)的D1 或D2 可以部分降低結(jié)合能力,表明D1 和D2 可以影響FGL與1-LAG-3 的相互作用[7-8]。之前有研究發(fā)現(xiàn),LAG-3 D1 結(jié)構(gòu)域的C 鏈中的單點(diǎn)突變(Y73F)可以抑制其與MHC-Ⅱ的結(jié)合,然而,該單點(diǎn)突變不影響其與FGL1-Ig 結(jié)合,這表明FGL-1-LAG-3 相互作用與MHC-Ⅱ-LAG-3結(jié)合并不是無用的。WANG等[41]經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn),F(xiàn)GL1 作為LAG-3 的主要功能性配體,在體外和體內(nèi)以受體-配體相互依賴的方式對T 細(xì)胞起抑制作用,F(xiàn)GL1-LAG-3 相互作用也可能影響記憶T 細(xì)胞的產(chǎn)生?;蛳騿慰寺】贵w可以阻斷FGL1-LAG-3 相互作用以增強(qiáng)T 細(xì)胞應(yīng)答并促進(jìn)抗腫瘤免疫能力。此外,抗FGL-1單克隆抗體在LAG-3 缺陷型小鼠中沒有抗腫瘤作用,而抗LAG-3 單克隆抗體同樣在FGL-1 缺陷型小鼠中喪失功效。FGL-1 是LAG-3 抑制T 細(xì)胞反應(yīng)的主要配體,WANG 等[41]使用FGL1-KO 小鼠的腫瘤模型研究發(fā)現(xiàn),F(xiàn)GL-1 對依賴于LAG-3 的抗腫瘤免疫具有免疫抑制作用,抗FGL-1 單克隆抗體的抗腫瘤作用依賴于LAG-3,而抗LAG-3 的作用依賴于FGL-1 但不依賴于MHC-Ⅱ或其它LAG-3 配體。鑒于FGL-1 在大多數(shù)正常組織中表達(dá)有限,而在幾種人類惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào),并且與這些腫瘤的預(yù)后不良和療效不佳相關(guān),因此可以高度選擇性地對高表達(dá)FGL-1 的腫瘤患者進(jìn)行靶向抗體療法。FGL-1 與LAG-3 相互作用是一種獨(dú)立的腫瘤免疫逃逸機(jī)制,阻斷這種相互作用可能與抗PD 治療產(chǎn)生協(xié)同作用。

    6 結(jié)語

    LAG-3 分子作為一種免疫檢查點(diǎn)受體蛋白,在黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌及結(jié)直腸癌等多種實(shí)體腫瘤中異常表達(dá)且與疾病預(yù)后有關(guān),說明LAG-3 在腫瘤免疫中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。MHC-Ⅱ是LAG-3 的經(jīng)典配體,LAG-3 可通過與MHC-Ⅱ分子的結(jié)合下調(diào)T細(xì)胞的活性。然而,MHC-Ⅱ是否僅對LAG-3 的抑制功能負(fù)責(zé)還存在爭議。FGL-1是LAG-3 的一種新發(fā)現(xiàn)的配體,在體外和體內(nèi)以受體-配體相互依賴的方式對T 細(xì)胞抑制功能起作用,F(xiàn)GL-1-LAG-3 信號通路可能與惡性腫瘤的免疫逃逸有關(guān),通過阻斷此信號通路的傳導(dǎo)可能有助于惡性腫瘤的免疫治療。然而,F(xiàn)GL-1-LAG-3 信號通路具體的免疫逃逸機(jī)制仍然未知。此外,LAG-3不同配體的作用機(jī)制以及各配體之間是否存在結(jié)構(gòu)與功能的相關(guān)性也不清楚。因此,解決這些關(guān)鍵問題有助于優(yōu)化LAG-3 靶向治療策略,提高惡性腫瘤的治療效果。

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