豬細(xì)小病毒疫苗的研究進(jìn)展

歐陽(yáng)海平，潘永飛，宋延華

（廣東省云浮市溫氏食品集團(tuán)股份有限公司 527400）

豬細(xì)小病毒病是由豬細(xì)小病毒（Porcine parvovirus， PPV）引起的母豬繁殖障礙病，主要引起初產(chǎn)母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、木乃伊胎及斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征等。 豬細(xì)小病毒為無囊膜單鏈線狀DNA 病毒，病毒粒子平均直徑約20nm。 目前，疫苗接種是有效防控PPV 的主要措施。 國(guó)內(nèi)PPV 商品疫苗均為全病毒滅活苗。 由于PPV 對(duì)環(huán)境抵抗力強(qiáng)，出于疫苗安全性考慮，滅活手段也在不斷改進(jìn)，但是滅活苗始終有滅活失敗的風(fēng)險(xiǎn)。 研發(fā)安全、高效的疫苗對(duì)清除PPV 尤為關(guān)鍵。因此，人們利用生物技術(shù)開發(fā)新型基因工程疫苗以克服現(xiàn)有疫苗的缺點(diǎn)。 本文僅就國(guó)內(nèi)的豬細(xì)小病毒疫苗研究現(xiàn)狀作一綜述。

1 豬細(xì)小病毒病滅活疫苗

豬細(xì)小病毒滅活疫苗是將PPV 感染的細(xì)胞培養(yǎng)物通過理化方法處理，使其喪失感染性但仍保持良好的免疫原性，然后加入佐劑乳化制備而成。

目前國(guó)內(nèi)共有18 家企業(yè)獲得PPV 疫苗批準(zhǔn)文號(hào) （表1），毒 株 包 括CP-99 株、S-1 株、BJ-2 株，WH-1 株，NJ 株，CG-05株，YBF01 株，L 株。

2 PPV 基因工程苗

2.1 PPV 亞單位疫苗

PPV VP2 蛋白是最主要的結(jié)構(gòu)蛋白，具有血凝活性，在自然條件下能組裝成病毒樣顆粒， 誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生很強(qiáng)的免疫應(yīng)答反應(yīng)，是制作亞單位疫苗的潛在蛋白。

陳玉梅等[1]通過優(yōu)化密碼子，使用伴侶蛋白質(zhì)粒共表達(dá)策略，使用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)出可溶性的VP2 蛋白，并在體外裝配成具有血凝活性的VLPs。 小鼠免疫試驗(yàn)表明制備的VLPs疫苗能刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性HI 抗體和中和抗體。 宋品等[2]將合成的密碼子優(yōu)化的PPV VP2 基因克隆到帶有His 標(biāo)簽和小分子泛素相關(guān)修飾物（SUMO）標(biāo)簽的pSMK 表達(dá)載體中，在大腸桿菌中表達(dá)可溶性VP2 蛋白。對(duì)表達(dá)的重組融合蛋白，用特異性蛋白酶切除其SUMO 標(biāo)簽，在一定的鹽離子條件下，VP2 蛋白可自我組裝成VLPs。 李茜等[3]使用Bac-to-Bac 昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)VP2 蛋白，也能組裝成VLPs，免疫BALB/c 小鼠后能刺激小鼠產(chǎn)生抗PPV 的特異性抗體。 這些研究為研制豬細(xì)小病毒基因工程疫苗提供了科學(xué)依據(jù)。

2.2 重組PPV 活載體疫苗

采用弱毒或無毒病原微生物作為表達(dá)載體， 對(duì)其導(dǎo)入外源抗原基因，制成疫苗后接種動(dòng)物，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)，這類新型疫苗稱為活載體疫苗。

謝永興等[4]使用同源重組技術(shù)表達(dá)豬圓環(huán)病毒2 型Cap 蛋白和豬細(xì)小病毒VP2 蛋白的重組偽狂犬病病毒。 重組病毒感染的PK-15 細(xì)胞中能檢測(cè)到VP2 蛋白， 免疫小鼠后可產(chǎn)生低水平VP2 抗體。付朋飛、宋文博等[5，6]成功構(gòu)建了PPV VP2 外源抗原基因的重組偽狂犬病毒rPRV-VP2 株。

表1 國(guó)內(nèi)批準(zhǔn)銷售的PPV 商業(yè)化疫苗

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3 PPV 聯(lián)合疫苗

聯(lián)合免疫具有一針防多病， 省時(shí)省力， 減少豬群應(yīng)激等優(yōu)勢(shì)。目前國(guó)內(nèi)暫無豬細(xì)小病毒的聯(lián)苗獲批。根據(jù)中國(guó)知識(shí)產(chǎn)權(quán)專利局公開資料顯示，2016 年至今，已有多家科研機(jī)構(gòu)申請(qǐng)了豬生殖與呼吸道綜合征病毒[7]，豬圓環(huán)病毒3 型、豬細(xì)小病毒和豬流感三聯(lián)滅活疫苗[8]，豬偽狂犬病/豬細(xì)小病毒病二聯(lián)滅活疫苗[9]，豬丹毒、豬細(xì)小病毒二聯(lián)滅活疫苗[10]，豬丹毒、豬細(xì)小病毒、豬流感病毒三聯(lián)滅活[11]，豬細(xì)小病毒、豬流行性腹瀉、大腸埃希氏菌三聯(lián)疫苗[12]，豬細(xì)小病毒和豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗[13]，豬圓環(huán)病毒2 型與豬細(xì)小病毒二聯(lián)滅活疫苗[14]相關(guān)專利。研究結(jié)果表明聯(lián)苗的免疫保護(hù)效果不差于PPV 單苗， 也證實(shí)了抗原組合物之間無相互干擾，甚至起到了協(xié)同作用。

4 結(jié)語(yǔ)

豬細(xì)小病毒病仍是當(dāng)今危害養(yǎng)豬業(yè)的一大難題。 豬細(xì)小病毒病沒有特效的治療措施，只能靠疫苗接種來防控。 隨著分子生物學(xué)技術(shù)和基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展，PPV 新型疫苗研制已經(jīng)取得了很大進(jìn)展，相信在不久的將來必將研制出安全、高效、廉價(jià)的新型基因工程疫苗。