HPLC法測(cè)定三種防風(fēng)中升麻素苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷含量

王 萍，雷鈞濤，劉玉波 (.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 07；2.吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，吉林 吉林 20；.吉林市林業(yè)科學(xué)研究院，吉林 吉林 20)

本品為傘形科植物防風(fēng)(Saposhnikoviadivaricata(Turcz.)Schischk.)的干燥根，具有祛風(fēng)解表、勝濕止痛、止痙的作用[1]。研究表明，防風(fēng)中所含有的升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、升麻素、亥矛酚苷等色原酮類成分，是發(fā)揮藥效作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛等多方面的藥理作用[2]。因此，本研究以高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定三種不同地區(qū)防風(fēng)中升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量，為防風(fēng)的深入研究提供基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品

3種分別來源于吉林省吉林市、白城市和內(nèi)蒙古赤峰市的防風(fēng)藥材，均經(jīng)吉林醫(yī)藥學(xué)院雷鈞濤教授鑒定為藥典品種。升麻素苷(中國(guó)成都菲普德生物有限公司，>98%，JOT-10173)；5-O-甲基維斯阿米醇苷(中國(guó)成都菲普德生物有限公司，>98%，JOT-10152)；色譜甲醇(Fisher公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀(LC-20A型，日本島津公司)；超聲波清洗器(KQ-5200E型，中國(guó)昆山市超聲儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

升麻素苷對(duì)照品及5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品各5 mg，精密稱定，分別加甲醇制成60 mg/L的溶液，備用。

2.2 供試品溶液制備

取防風(fēng)藥材細(xì)粉約0.25 g，精密稱定，放于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10.0 mL，水浴回流2 h，放冷，濾過，濾液放于容量瓶中，用甲醇定容至10.0 mL。

2.3 色譜條件

按2015版《中國(guó)藥典》方法，色譜柱：Apollo C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫為35 ℃；流動(dòng)相為甲醇∶水(45∶55)；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm。

2.4 線性關(guān)系考察

2.4.1升麻素苷線性關(guān)系考察

自動(dòng)進(jìn)樣器分別吸取60 mg/L的升麻素苷對(duì)照品溶液1、2、5、10、15、20 μL進(jìn)入液相色譜儀中，按照2.3色譜條件測(cè)定。依據(jù)測(cè)得數(shù)據(jù)，以升麻素苷質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以升麻素苷色譜峰吸收峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性回歸方程為y=1 738 044.84x-3 442.10，R2=1。升麻素苷在0.06～1.20 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4.25-O-甲基維斯阿米醇苷線性關(guān)系考察

自動(dòng)進(jìn)樣器分別吸取60 mg/L的5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品溶液1、2、5、10、15、20 μL，進(jìn)入液相色譜儀中，按照2.3色譜條件測(cè)定。依據(jù)測(cè)得數(shù)據(jù)，以5-O-甲基維斯阿米醇苷質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以5-O-甲基維斯阿米醇苷色譜峰吸收峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性回歸方程為y=1 981 912.03x-2 128.38，R2=1。5-O-甲基維斯阿米醇苷在0.06～1.20 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

2.5.1升麻素苷精密度試驗(yàn)

精密吸取60 mg/L的升麻素苷對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，按照2.3色譜條件測(cè)定，以升麻素苷峰面積計(jì)算精密度，RSD=0.11%。

2.5.25-O-甲基維斯阿米醇苷精密度試驗(yàn)

精密吸取60 mg/L的5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，按照2.3色譜條件測(cè)定，以5-O-甲基維斯阿米醇苷峰面積計(jì)算精密度，RSD=0.30%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于0、4、8、16、20、24 h注入液相色譜儀，進(jìn)樣量為10 μL，按照2.3色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，以升麻素苷峰面積計(jì)算其穩(wěn)定性，RSD為0.32%，以5-O-甲基維斯阿米醇苷峰面積計(jì)算其穩(wěn)定性RSD值為0.30%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批防風(fēng)粉末，按2.2方法處理，并按2.3色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣10 μL，計(jì)算樣品中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量，以升麻素苷含量計(jì)算RSD值為0.22%，以5-O-甲基維斯阿米醇苷計(jì)算RSD值0.12%。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量的防風(fēng)藥材供試品6份，分別精密加入升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品，按2.3色譜條件測(cè)定，按照含量測(cè)定項(xiàng)下操作，分別計(jì)算回收率。升麻素苷平均回收率為101.68%，RSD值為1.33%;5-O-甲基維斯阿米醇苷平均回收率率為99.77%，RSD值為1.03%。

2.9樣品中含量測(cè)定

分別取不同產(chǎn)地防風(fēng)藥材，按上述2.3色譜條件測(cè)定，11種防風(fēng)藥材中升麻素苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷含量如表1。升麻素苷的保留時(shí)間為5.799 min，5-O-甲基維斯阿米醇苷的保留時(shí)間為13.273 min。

表 1 3種防風(fēng)藥材中兩種成分的含量(mg/g)

3 討 論

由含量測(cè)定結(jié)果可知，各地區(qū)防風(fēng)含量有所差異，以含量為指標(biāo)可知含量大小順序?yàn)榘壮?赤峰>吉林。由于防風(fēng)的品種不僅復(fù)雜多樣，而且性狀鑒定困難，且混淆的品類多，使得藥材質(zhì)量參差不齊[3]。歷代名著中對(duì)防風(fēng)產(chǎn)地的記載主要包括陜西、黑龍江、山東、河南、江蘇、浙江及湖北北部等地?，F(xiàn)在防風(fēng)的主要產(chǎn)區(qū)為東北和內(nèi)蒙古，質(zhì)量也以東北黑龍江的為最佳。到目前為止，防風(fēng)的產(chǎn)區(qū)變化很大，主要是防風(fēng)的產(chǎn)地由南向北移，由關(guān)內(nèi)移到了關(guān)外的東北和內(nèi)蒙古地區(qū)[4]。本實(shí)驗(yàn)中選取東北地區(qū)兩種防風(fēng)和內(nèi)蒙地區(qū)一種防風(fēng)進(jìn)行對(duì)比，可以看出其中吉林白城種子較優(yōu)。本實(shí)驗(yàn)也證明了不同地區(qū)防風(fēng)品種藥典中所規(guī)定的含量相差較多。為了栽培與種植需要，需要加大樣本量進(jìn)行逐步分析。