罕見Bmh 類孟買血型1 例血清學(xué)鑒定

韓新樂

（江蘇省新沂市人民醫(yī)院，江蘇 新沂）

0 引言

孟買血型是1952 年Bhende 在印度發(fā)現(xiàn)的，是十分罕見的血型，這種個體紅細胞膜上缺乏A、B、H 抗原，而類孟買型與孟買型很相似，紅細胞上沒有H 抗原，但不同的是類孟買型紅細胞上有少量的A 或B 抗原，主要是H 基因受到其抑制基因Z 的影響，基因表達產(chǎn)物大大下降，但仍有一小部分H 產(chǎn)生，這部分抗原在正常A 基因或B 基因作用下，轉(zhuǎn)化成少量的A 或B 抗原，其血清中也有相應(yīng)的抗A 或抗B 及抗H 抗體[1]。這給實驗室ABO 定型和交叉配血帶來困難，本例是武漢一家醫(yī)院送檢的標(biāo)本，經(jīng)上海血液中心血型參比實驗室基因測序為B101/O01,h3h3，也稱Bmh血型。現(xiàn)將患者血清學(xué)檢測報道如下。

1 臨床資料

患者，女26 歲，G2PO，臨床診斷：宮腔粘連Ⅱ度，無手術(shù)史外傷史，無藥物史。否認有家族遺傳史；現(xiàn)欲行宮腔鏡手術(shù)備血，由于家屬不在本地，家系調(diào)查無法及時獲得。

2 血型血清學(xué)檢測

2.1 試劑

單克隆抗-A、抗-B 抗-H 標(biāo)準(zhǔn)ABO 的細胞（批號分別為：20150917、20150917、20150316、20160315）均購自上海血液生物醫(yī)藥有限公司?？?Lea、抗-Leb（Sanquin，Ho11and 批號：8000168048）。人源抗-A、抗-B 血清自制，實驗用O 細胞和B 細胞均來自3 d 以內(nèi)獻血者。

2.2 方法

血型定型、抗體鑒定、吸收放散試驗、血型物質(zhì)檢測均按文獻[2]操作。儀器：離心機（KA-2200，日本久保田）、普通離心機、水浴箱、孵育器。

3 試驗結(jié)果

3.1 ABO 正反定型

立即及多次離心后以及將反定型各個試管分別置4 ℃、37 ℃后反應(yīng)結(jié)果如下表1。

3.2 H 抗原檢查

患者紅細胞與抗H 反應(yīng)未見凝集，表明患者紅細胞上無H 抗原，見表2。

3.3 Lewis 血型檢測

Lewis 血型檢測該患者為Le（a-b+），提示患者是分泌型，見表3。

表1 患者正反血型鑒定結(jié)果（試管法）

表2 患者紅細胞懸液與抗H 抗體反應(yīng)結(jié)果

表3 患者紅細胞懸液與抗Lea、Leb 試劑反應(yīng)結(jié)果

3.4 患者血清中不規(guī)則抗體檢測

選擇2 個成人正常新鮮O 型、B 型及臍帶O 細胞，三洗，配成紅細胞懸液與患者血清反應(yīng)，見表4。提示患者血清中存在抗-I 抗體。

表4 患者血清與正常新鮮O 型、B 型及臍帶血反應(yīng)結(jié)果

3.5 吸收放散試驗

取一份患者洗滌壓積細胞加入一份等量人源抗B 血清混合放4 ℃過夜收，用冷的生理鹽水將紅細胞洗滌6 次，加入等量生理鹽水，于56 ℃10 min 進行熱放散，離心取放散液加入B 細胞；同時做O 細胞對照，結(jié)果放散液中有抗B 抗體，表明患者紅細胞上有B 抗原（對未次上清液2 滴加入B 細胞1 滴應(yīng)為陰性），見表5。

3.6 吸收后血清效價測定

將患者細胞吸收前后的抗B 血清的效價進行檢測，患者紅細胞吸收前128，經(jīng)吸收后抗B 已效價為64，也證實患者紅細胞上存在B 抗原。

表5 吸收放散試驗結(jié)果

3.7 唾液中血型物質(zhì)檢測

將抗A、抗B、抗H 試劑血清進行標(biāo)化，以出現(xiàn)2+ 凝集強度的最小稀釋度作為工作液對唾液中的血型物質(zhì)進行中和抑制試驗，抗A 進行1:4 稀釋，抗B 進行1:8 稀釋，抗H 進行1:4 稀釋，在抗A、抗B、抗H 試管中加入相應(yīng)的標(biāo)化試劑50 μL，各加入經(jīng)煮沸處理的唾液上清液50 μL 室溫充分作用30 min，然后加入相應(yīng)的試劑A、B、O 細胞懸液50 μL，離心觀察結(jié)果表明，抗A 管2+，抗B 管陰性，抗H 管陰性，近一步證實唾液中有B 和H 血型物質(zhì)。

4 結(jié)果

通過以上一系列的試驗可證實該患者為紅細胞上H 抗原缺失，存在弱的B 抗原，Lewis 血型為（a-b+），唾液和患者血清中分別檢出B 和H 血型物質(zhì)，根據(jù)其血清學(xué)特征該患者的血型為類孟買Bmh。

5 討論

H 抗原受控于FUT1（H）、FCT2（Se）、FUT3（Le）三個基因，它們分別決定紅細胞上H 的表達，分泌液中H 物質(zhì)的出現(xiàn)和消失，及紅細胞上是否有Lea或Leb抗原的出現(xiàn)。孟買型是紅細胞H 抗原缺乏的非分泌型，基因型是hh，其血清學(xué)特征是紅細胞不能被抗-A、抗-B、或抗-AB 凝集，血清中則含有抗A、抗B 和抗H 抗體，所以其唾液中無A、B、H 物質(zhì)而類孟買是分泌型，其血清學(xué)特征為紅細胞與抗H 不凝集，與抗A、抗B 凝集很弱，甚至用吸收放散才能檢出A 和B 抗原，是因為其分泌液和血清中含有A、B 物質(zhì)，類孟買型都是分泌型（Sese 或SeSe），其Lewis 血型可以為Le（a-b+）/Le（a-b-），Lewis 物質(zhì)廣泛存在于人體，可以通過其檢測推斷其分泌性[3]。

通過表1、表2 可見：ABO 正反定型不符抗H 抗原陰性，考慮可能是類孟買血型；A、B、O 細胞在4 ℃時全部凝集考慮患者血清中可能有冷抗體存在；患者Lewis 血型為Le（a-b+），從而確定患者為分泌型，并且通過唾液中血型物質(zhì)的檢測進一步明確了該患者為分泌型個體。

為了證實患者弱B 抗原存在，做了吸收放散試驗，結(jié)果與人源B 血清冷吸收后的血清，效價降低；患者紅細胞進行熱放散液中檢測出B 抗體，則可以證實了患者紅細胞上B 抗原的存在，患者唾液血型物質(zhì)檢測結(jié)果證實了唾液中有B 和H 血型物質(zhì)。綜上所述該患者血型為Bmh。通過選擇病人血清與成人O、B、臍O 細胞進行反應(yīng)發(fā)現(xiàn)該患者血清中存在抗-HI 抗體，HI 抗體是一種自身冷抗體。曾經(jīng)被認為是無害的，但也有因抗HI 引起的急性輸血反應(yīng)報道。所以輸注時要注意保溫[4]

類孟買型目前鑒定方法有二種：血型血清學(xué)和分子生物學(xué)。血型血清學(xué)比較適合醫(yī)院日常檢測，根據(jù)近年文獻報道，總結(jié)有幾個特點：紅細胞上無H 抗原、血清中有弱抗A/B 抗體或H（HI）抗體，血清中及唾液中有少量ABH 物質(zhì)；Lewis血型為分泌型。本例中B 抗原和抗H 抗體均較弱，有HI 冷抗體很容易誤定患者血型為O 型，容易造成嚴(yán)重后果[5-6]。本例類孟買患者輸血時，盡量輸注同型血或自身輸血，如果情況緊急選擇37 ℃與患者血清反應(yīng)最弱或無反應(yīng)的B 型或O 型預(yù)溫洗滌濾白紅細胞輸注，確?；颊甙踩?。