蘆根清熱作用機(jī)制研究

劉亞虓 張潘潘 顏偌楠 戚巍瓊 鄧翀 姜祎 張化為

【摘 要】 目的：研究蘆根對(duì)干酵母致發(fā)熱小鼠的炎癥因子含量的變化，探討蘆根解熱的藥理機(jī)制。方法：將60只小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性組和水樣低、中、高劑量組共6個(gè)組，連續(xù)灌胃給藥7 d，由于酵母混懸液致熱，最后檢測(cè)小鼠體溫變化，并測(cè)定血清中白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、環(huán)磷酸腺苷（cAMP）和前列腺素E2（PGE2）含量的變化。結(jié)果：與模型組比較，陽性組和給藥組小鼠體溫下降較為顯著（P<0.05）;給藥組血清中各細(xì)胞因子及下丘腦中PGE2的含量顯著降低（P<0.05）。結(jié)論：蘆根對(duì)干酵母致熱小鼠具有顯著的解熱效果，其作用機(jī)制可能與降低發(fā)熱小鼠血清中IL-1β、TNF-α、cAMP含量以及抑制下丘腦組織中PGE2的釋放有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 蘆根;解熱;作用機(jī)制

【中圖分類號(hào)】R285.5?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2021）22-0025-04

Study on the Mechanism of Heat-clearing Effect of Reed Rhizome

LIU Yaxiao ZHANG Pan YAN Ruonan QI Weiqiong DENG Chong JIANG Yi ZHANG Huawei*

School of Pharmacy， Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine， Xianyang 712046， China

Abstract：Objective To study the effect of Reed root on the content of inflammatory factors in mice with fever caused by dry yeast and to explore the antipyretic mechanism of Reed Root.Methods Sixty mice were randomly divided into six groups： blank group， model group， positive group and water sample low-dose， medium-dose and high-dose groups. The mice were given intragastric administration for 7 days continuously. The changes of body temperature and serum levels of serum interleukin-1β（IL-1β）， tumor necrosis factor-α（TNF-α）， cyclic adenosine monophosphate（cAMP） and prostaglandin E2（PGE2）were measured because of the fever induced by yeast suspension. Results Compared with the model group， the temperature of mice in the positive group and the Administration Group decreased significantly （P<0.05）， and the contents of cytokines in serum and PGE2 in hypothalamus decreased significantly （P<0.05）.Conclusions? Reed root of dry yeast to heat has significant antipyretic effect， its mechanism may be related to reduce fever in mice serum IL-1β， TNF-α， cAMP the content and inhibit the release of PGE2 in the hypothalamus organization concerned.

Keywords：Rhizoma Phragmitis; Antipyretic; Mechanism of Action

蘆根來源于禾本科植物蘆葦Phragmites communis Trin.新鮮或干燥的根莖[1]，性味甘、寒，歸肺、胃經(jīng)，具有清熱生津、除煩、止嘔、利尿等作用，常被廣泛用于治療萎縮性胃炎、大葉性肺炎、便秘等疾病[2]，還有用其治療干燥綜合征的報(bào)道[3]。近年來，蘆根在預(yù)防炎癥、感冒等方面起到了良好的作用[4]。

發(fā)熱是指機(jī)體的體溫調(diào)定點(diǎn)在免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)協(xié)調(diào)作用下上移而誘發(fā)的一種適應(yīng)性反應(yīng)，其作用機(jī)制是由致熱原的刺激使體溫中樞調(diào)定點(diǎn)上移[5]。發(fā)熱通常是通過一些炎癥因子含量的變化來判斷，而發(fā)熱又使機(jī)體內(nèi)炎癥因子和前列腺素產(chǎn)生和釋放增多，引起全身炎癥從而導(dǎo)致體溫升高[6]。常用的致熱原有：脂多糖、2，4-二硝基酚、干酵母等[7]。本研究將通過干酵母致熱小鼠實(shí)驗(yàn)并密切關(guān)注小鼠體溫變化，同時(shí)采用ELISA試劑盒測(cè)定發(fā)熱炎癥因子含量的變化來探討蘆根對(duì)小鼠發(fā)熱模型的解熱作用，以初步探討其解熱的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 昆明種雄性小鼠60只，體重18～22 g，成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證編號(hào)：SCXK（川）2020-030。實(shí)驗(yàn)前置于溫度為20 ℃左右的環(huán)境中，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d。

1.2 藥材與試劑 蘆根，市場(chǎng)購買（批號(hào)：20200401），經(jīng)過陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院顏永剛教授鑒定其為禾本科植物蘆葦Phragmites communis Trin.的干燥根莖，0.9%氯化鈉注射液（國藥準(zhǔn)字號(hào)H20196626）、IL-1β試劑盒、TNF-α試劑盒、cAMP試劑盒、PGE2試劑盒（上海優(yōu)選生物科技有限公司、批號(hào)：20200418）、高活性干酵母（安琪酵母股份有限公司）、對(duì)乙酰氨基酚片（成都恒瑞制藥有限公司）。

1.3 儀器 高速冷凍離心機(jī)（TG-16）、酶標(biāo)儀（MULTISKAN GO）、電子體溫計(jì)（歐姆龍有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 樣品制備 稱取蘆根藥材約1 kg，以10倍量、8倍量的水煎煮提取兩次，提取時(shí)間2 h、1.5 h，合并兩次煎煮液，減壓回收溶劑，得到流浸膏，備用[8]。

1.4.2 發(fā)熱小鼠模型的制備 實(shí)驗(yàn)前先適應(yīng)3 d，從第4 d開始測(cè)量小鼠體溫，將電子體溫計(jì)測(cè)溫探頭插入小鼠肛門內(nèi)2 cm記錄直腸體溫，每天按時(shí)測(cè)量1次，連續(xù)測(cè)量7 d。剔除體溫變化異常的小鼠，將檢測(cè)合格的60只小鼠隨機(jī)分為6組：空白組、模型組、陽性組、水樣（低、中、高劑量）組。每組10只[9-10]。

實(shí)驗(yàn)采用灌胃給藥方式[11]，空白組和模型組給等體積的生理鹽水，陽性組給對(duì)乙酰氨基酚溶液，給藥組按蘆根水樣部位低、中、高劑量依次灌胃，連續(xù)7 d。造模前需要先禁食10 h，除空白組以外，其余組均在小鼠背部皮下注射20%酵母混懸液10 mL/kg，在注射酵母混懸液后1、2、3、4 h依次測(cè)量各組小鼠體溫[12]。

1.5 用ELISA試劑盒測(cè)量發(fā)熱小鼠下丘腦組織中發(fā)熱介質(zhì)含量

1.5.1 血樣采集 在上述6組小鼠測(cè)溫后，立即眼眶靜脈取血，在4 ℃，3500 r/min的條件下離心20 min，取上清液，置-20℃冰箱保存、待測(cè)[13]。

1.5.2 取下丘腦組織 上述6組小鼠眼眶靜脈取血后立即處死，于冰上操作取下丘腦，將取下的下丘腦放入1.5 mL離心管中，放到冰上，待全部取完后，將每組下丘腦組織用生理鹽水1∶[KG-*3/5]9比例制備成10%的組織勻漿液，4 ℃，2000 r/min，離心10 min，后用移液槍取上清液，置-20℃冰箱保存、待測(cè)[14]。

1.5.3 相關(guān)發(fā)熱介質(zhì)含量測(cè)定 按照試劑盒操作規(guī)范，嚴(yán)格操作，測(cè)定數(shù)據(jù)[15]。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，對(duì)所得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以x±s表示。組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠體溫變化 如表1、圖1所示，在造模之前各組小鼠的體溫接近，除空白組外其余各組用20%酵母混懸液造模。除模型組體溫持續(xù)上升外，其余各組小鼠體溫在3 h達(dá)峰值，之后具有下降趨勢(shì)。

2.2 酵母混懸液致熱各組小鼠血清發(fā)熱介質(zhì)含量的比較 造模后，4 h取血清及下丘腦測(cè)定各發(fā)熱介質(zhì)含量，發(fā)現(xiàn)在IL-1β、TNF-α、cAMP、PGE2四個(gè)指標(biāo)中模型組發(fā)熱介質(zhì)含量明顯升高且與空白組有顯著性差異，表明造模成功;而陽性組發(fā)熱介質(zhì)含量明顯下降，與模型組有顯著性差異，給藥組發(fā)熱介質(zhì)含量相對(duì)模型組均有不同程度的降低，但不同炎癥因子與劑量之間無明顯相關(guān)性，說明蘆根對(duì)干酵母致熱小鼠具有明顯的解熱作用。

3 討論

蘆根始載于《名醫(yī)別錄》，味甘性寒，具有清熱生津等作用，可用于熱病煩渴等癥的治療。臨床上外感發(fā)熱患者在處方配伍中可適當(dāng)加入蘆根，清熱生津而不傷人體正氣，有益于疾病愈后身體機(jī)能的恢復(fù)。

實(shí)驗(yàn)以皮下注射酵母混懸液致熱小鼠為研究對(duì)象，對(duì)蘆根的解熱作用和清熱機(jī)制進(jìn)行探討。通過對(duì)炎癥小鼠的體溫變化和體內(nèi)各炎癥因子水平的測(cè)定。分析發(fā)現(xiàn)，酵母混懸液致熱后，小鼠體溫在3 h左右達(dá)到峰值，之后體溫開始有下降趨勢(shì)，與文獻(xiàn)[16]中記載的嚙齒類動(dòng)物體溫在6～8 h之間達(dá)到峰值不同。在實(shí)驗(yàn)中通過連續(xù)給藥的方式使小鼠體溫下降，說明蘆根水提液具有解熱作用。為了測(cè)得小鼠體內(nèi)炎癥因子的變化，在給藥4 h后測(cè)定血清中IL-1β、TNF-α、cAMP及小鼠下丘腦中PGE2的含量。研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)IL-1β分泌量過多時(shí)，會(huì)作用于下丘腦使機(jī)體發(fā)熱[17];TNF-α通過直接刺激下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞或刺激巨噬細(xì)胞釋放白細(xì)胞介素-1（IL-1）而引起機(jī)體發(fā)熱[18];cAMP可調(diào)節(jié)機(jī)體生理功能及物質(zhì)代謝，當(dāng)cAMP激活時(shí)，會(huì)導(dǎo)致心肌收縮，提供能量供給，使機(jī)體體溫上升[19]。當(dāng)以上三種炎癥因子水平降低時(shí)，機(jī)體可產(chǎn)生解熱作用。PGE2也是非常強(qiáng)的致熱物質(zhì)之一，能引起體溫上升，而清熱藥的作用位點(diǎn)是下丘腦的熱量控制中心，通過抑制環(huán)氧合酶的活性而減少前列腺素的合成，從而達(dá)到降低體溫的作用[20]。

低、中、高劑量組的蘆根水提取液對(duì)不同的炎癥因子含量變化規(guī)律不盡一致，這可能與中藥本身因劑量不同的雙向調(diào)節(jié)有關(guān)，與文獻(xiàn)[21]研究結(jié)果一致。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，高劑量組的蘆根水提液使IL-1β、TNF-α及PGE2的含量明顯降低;中劑量組的蘆根水提液使cAMP的含量明顯降低，但整體而言，各個(gè)指標(biāo)與模型組相比均有顯著性差異且呈下降趨勢(shì)，這與IL-1β、TNF-α、cAMP及PGE2上文所述的作用機(jī)制一致。

綜上所述，中藥蘆根確有解熱作用，其清熱作用機(jī)制與抑制機(jī)體內(nèi)的IL-1β、TNF-α、cAMP的表達(dá)有關(guān)，并且通過抑制下丘腦體溫中樞內(nèi)的環(huán)氧合酶，進(jìn)而降低PGE2的釋放，也是蘆根產(chǎn)生清熱作用的機(jī)制之一。

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（收稿日期：2021-04-09 編輯：劉 斌）

作者簡(jiǎn)介：劉亞虓（1998-），女，漢族，本科在讀，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)。E-mail：1216161802@qq.com

通信作者：張化為（1980-），男，博士，副教授，研究方向?yàn)橹胁菟幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)研究。E-mail：307838553@qq.com