固相萃取-高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蔬菜中氯蟲苯甲酰胺等5種農(nóng)藥殘留量

吳丹亞，潘潔

(寧波市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站，浙江 寧波 315012)

氯蟲苯甲酰胺是從鄰氨基苯甲二酰胺類化合物中篩選出來的具有新型結(jié)構(gòu)的廣譜型殺蟲劑[1]，近年在生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用。吡蟲啉、多菌靈、除蟲脲與滅幼脲也是在糧食、蔬菜與果樹生產(chǎn)上普遍使用的低毒性農(nóng)藥。農(nóng)藥使用帶來的農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留問題一直是人們關(guān)注的熱點(diǎn)。GB 26763—2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》對(duì)不同食品基體中的這5種農(nóng)藥的殘留量均設(shè)定了限量標(biāo)準(zhǔn)。除氯蟲苯甲酰胺外，其他4種農(nóng)藥的殘留測(cè)定國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中都有涉及，但液相色譜法都是針對(duì)單個(gè)農(nóng)藥的測(cè)定，尚無同時(shí)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)。目前對(duì)氯蟲苯甲酰胺的測(cè)定和多農(nóng)藥殘留測(cè)定，大都采用液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法[2-5]。本文結(jié)合已有的方法，利用現(xiàn)有的試驗(yàn)條件，建立了一種乙腈提取、氨基小柱固體萃取、液相色譜-紫外檢測(cè)器檢測(cè)蔬菜中這5種農(nóng)藥殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

供試蔬菜樣品為大白菜與番茄；供試藥劑吡蟲啉、多菌靈、氯蟲苯甲酰胺、除蟲脲與滅幼脲均為標(biāo)準(zhǔn)品，濃度均為100 μg·mL-1(農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所)；甲醇、乙腈(默克，HPLC級(jí))，氯化鈉(國藥，分析純)，二氯甲烷(國藥，分析純)，試驗(yàn)用水為屈臣氏純凈水。

1.1.2 儀器

Dionex U3000液相色譜儀(熱電公司，配紫外檢測(cè)器)，Dionex Acclaim 120 C18色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)；氮吹儀(Organomation E-EVAP 112)，數(shù)顯恒溫水浴鍋(HH-6，國華)，高速分散均質(zhì)機(jī)(IKA T18)，離心機(jī)(SIGMA 4-16)，Agela Cleanert NH2小柱(500 mg/6 mL)。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理

提取。在25.0 g蔬菜樣品(大白菜、番茄)中加入50 mL乙腈，高速勻漿2 min后，加入7～8 g氯化鈉，繼續(xù)高速勻漿2 min，3 000轉(zhuǎn)·min-1離心5 min。吸取上清液10 mL，放入50 mL燒杯中，于70 ℃水浴鍋上蒸發(fā)至近干，加入2.0 mL甲醇+二氯甲烷(1+99)，蓋上鋁箔，待凈化。

凈化。將NH2柱用4.0 mL甲醇+二氯甲烷(1+99)混合液充分活化，當(dāng)溶劑液面到達(dá)吸附層表面時(shí)，立即加入上述待凈化溶液，用5 mL具塞刻度試管收集洗脫液，用2 mL甲醇+二氯甲烷(1+99)洗燒杯后過柱，并重復(fù)1次。將具塞刻度試管置于氮吹儀上，水浴40 ℃，氮吹蒸發(fā)至近干，用甲醇準(zhǔn)確定容至2.5 mL。旋渦混勻，過0.22 μm濾膜，待測(cè)。

1.2.2 色譜條件優(yōu)化

柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。針對(duì)波長、流動(dòng)相及流速等方面進(jìn)行優(yōu)化，以200～400 nm范圍內(nèi)的波長掃描結(jié)果確定檢測(cè)波長；選擇甲醇+水、甲醇+乙腈+水2種流動(dòng)相，進(jìn)行洗脫，根據(jù)色譜結(jié)果來確定最佳色譜條件。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

準(zhǔn)確吸取0.8 mL吡蟲啉、多菌靈、氯蟲苯甲酰胺、除蟲脲、滅幼脲標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇定容至10 mL，配成8 μg·mL-1的單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確吸取50、100、150、200、250 μL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別定容至10 mL，配成0.04、0.08、0.12、0.16、0.20 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。按最佳色譜條件進(jìn)行測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 波長選擇

對(duì)5種農(nóng)藥在200～300 nm進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果表明，吡蟲啉最大吸收波長為270 nm，多菌靈在286 nm附近有較大吸收，除蟲脲與滅幼脲在254 nm處有較大吸收，氯蟲苯甲酰胺在210～300 nm無明顯吸收峰，且隨著波長的增加吸收減弱(圖1)。鑒于254 nm干擾相對(duì)較大，而在270 nm處5種農(nóng)藥都有較大的吸收，因而選擇270 nm作為檢測(cè)波長。

圖1 5種農(nóng)藥紫外光譜掃描曲線

2.2 流動(dòng)相選擇

首先考慮常用的甲醇+水系統(tǒng)，但試驗(yàn)結(jié)果表明，甲醇+水系統(tǒng)在峰型、分離度上不是十分理想，當(dāng)加入乙腈之后，采用梯度洗脫，充分利用乙腈與甲醇在分離選擇性上的差異，明顯改善了峰型、提高了分離度，達(dá)到比較理想的分離效果。

2.3 流速選擇

流速大雖能縮短分析時(shí)間，但會(huì)影響分離效果；流速過小則會(huì)使分析時(shí)間變長并影響峰型；因而從分析時(shí)間、分離情況與峰型等方面綜合考慮，1 mL·min-1的流速能達(dá)到較滿意的結(jié)果。由此確定最佳的色譜條件：柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL，檢測(cè)波長270 nm，流速為1 mL·min-1，流動(dòng)相為水+甲醇+乙腈，采用梯度洗脫，具體見表1。保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。5種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖2，供試大白菜與番茄的色譜圖見圖3～5。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

圖2 5種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)液色譜(0.2 μg·mL-1)

圖3 大白菜樣品色譜

圖4 番茄樣品色譜圖1

圖5 番茄樣品色譜圖2

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍及最低檢出限

在最佳色譜條件下，對(duì)系列濃度的混合工作液進(jìn)行測(cè)定，確定其回歸方程與相關(guān)系數(shù)。從表2可知，5種農(nóng)藥在40～200 μg·L-1范圍內(nèi)，線性良好，相關(guān)系數(shù)都大于0.999，符合農(nóng)殘分析要求[6]。計(jì)算40 μg·L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液中各農(nóng)藥的的信噪比，以其3倍信噪比來確定各農(nóng)藥的最低檢出限。

表2 5種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 回收率與精密度

對(duì)大白菜與番茄樣品進(jìn)行回收率試驗(yàn)。在蔬菜樣品中分別添加2個(gè)濃度水平的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述方法進(jìn)行樣品處理與測(cè)定，每處理6個(gè)平行。

對(duì)大白菜樣品，當(dāng)添加量為0.05 mg·kg-1時(shí)，吡蟲啉、多菌靈、氯蟲苯甲酰胺、除蟲脲與滅幼脲的平均回收率分別為100.8%、108.6%、82.5%、109.8%、91.6%；當(dāng)大白菜中添加量為0.2 mg·kg-1時(shí)，吡蟲啉、多菌靈、氯蟲苯甲酰胺、除蟲脲與滅幼脲的平均回收率分別為104.1%、104.8%、98.2%、105.7%、103.5%。對(duì)番茄樣品，當(dāng)添加量為0.05 mg·kg-1時(shí)，吡蟲啉、多菌靈、氯蟲苯甲酰胺、除蟲脲與滅幼脲的平均回收率分別為74.3%、108.4%、94.5%、90.6%、98.2%；在番茄中添加0.2 mg·kg-1時(shí)，吡蟲啉、多菌靈、氯蟲苯甲酰胺、除蟲脲與滅幼脲的平均回收率分別為90.4%、88.1%、101.7%、101.3%、102.9%。(具體見表3)。大白菜與番茄回收率試驗(yàn)中，回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差符合農(nóng)藥殘留分析要求。

表3 大白菜和番茄中5種農(nóng)藥的回收率和變異系數(shù)

3 小結(jié)

采用乙腈提取、氯化鈉鹽析、NH2小柱凈化，建立了蔬菜中氯蟲苯甲酰胺等5種農(nóng)藥的殘留液相色譜檢測(cè)方法，并在大白菜與番茄上進(jìn)行了驗(yàn)證，其中大白菜的加標(biāo)平均回收率為82.5%～109.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.0%～12.4%，番茄的加標(biāo)平均回收率為74.3%～108.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%～12.2%，其結(jié)果符合農(nóng)藥殘留檢測(cè)分析要求。