草莓莖尖脫毒繁育體系研究進(jìn)展

馬秀明 繆軍 王俊峰 韓偉 孫楊

摘要 草莓莖尖脫毒技術(shù)能夠從生產(chǎn)上解決草莓因長期無性繁殖，易受到多種病毒的侵染，從而導(dǎo)致植株長勢變?nèi)酢⒐麑?shí)品質(zhì)劣化、產(chǎn)量下降等品種退化現(xiàn)象。從草莓莖尖消毒、莖尖選取、培養(yǎng)基的篩選、多種脫毒方式結(jié)合、病毒檢測、馴化移栽、種苗繁育等方面綜述了草莓莖尖脫毒繁育體系的研究進(jìn)展，以期為草莓莖尖脫毒繁育體系的建立提供參考。

關(guān)鍵詞 草莓;莖尖脫毒;種苗繁育

中圖分類號 S668.4? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 0517-6611（2021）24-0018-06

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.24.004

Research Progress on Stem Apex Detoxification and Breeding System of Strawberry

MA Xiu-ming，MIAO Jun，WANG Jun-feng et al （Institute of Vegetables，Shandong Academy of Agricultural Sciences，Shandong Provincial Key Laboratory of Vegetable Biology，Shandong Branch of National Center for Vegetable Improvement，Jinan，Shandong 250100）

Abstract The technology of stem apex detoxification of strawberry can solve problems that finally results in the weakening of plant growth，deterioration of fruit quality and decline of yield，which due to long-term asexual reproduction that easily infected by a variety of viruses.This paper summarized the research progress on stem apex detoxification and breeding system of strawberry from the disinfection of stem apex，selection of stem apex，screening of culture medium，virus detection，combination of multiple detoxification methods，domestication and transplanting，seedling breeding and other aspects，in order to provide reference for the establishment of? stem apex detoxification and breeding system of strawberry.

Key words Strawberry;Stem apex detoxification;Seedling breeding

基金項(xiàng)目 2021年度山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新工程（CXGC2021A28）。

作者簡介 馬秀明（1991—），男，山東齊河人，研究實(shí)習(xí)員，碩士，從事草莓脫毒組培快繁研究。*通信作者，韓偉，副研究員，碩士，從事草莓資源管理研究;孫楊，助理研究員，碩士，從事草莓病害研究。

收稿日期 2021-05-13

草莓（Fragaia x ananassa Duch.）為薔薇科（Rosaceae） 草莓屬（Fragaria）多年生草本植物，口感極佳，營養(yǎng)豐富，素有“水果皇后”的美譽(yù)[1]。近年，草莓栽培面積、產(chǎn)業(yè)規(guī)模呈擴(kuò)大趨勢，據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）統(tǒng)計(jì)[2]，2018年，我國的草莓種植面積和產(chǎn)量均居世界首位，分別為11.11萬hm2和296.43萬t，占世界草莓總種植面積和產(chǎn)量的29.8%和35.6%。隨著現(xiàn)代都市農(nóng)業(yè)和休閑采摘的迅速升溫，人們對草莓品質(zhì)的要求也越來越高[3]。但是，傳統(tǒng)的分株繁殖和匍匐莖繁殖的育苗方式會導(dǎo)致草莓因連作和長期無性繁殖而積累病毒，從而使植株出現(xiàn)生長勢減弱、植株矮化、葉片變小、心葉黃化、畸形果多、果實(shí)變小、產(chǎn)量降低、品質(zhì)變劣等諸多品種退化現(xiàn)象，從而降低其經(jīng)濟(jì)價值和商品價值，嚴(yán)重時可引起毀滅性災(zāi)害，給草莓栽培者帶來巨大損失[4-5]。目前，我國草莓種植中有 4種常見的病毒病害，分別是草莓鑲脈病毒（Strawberry vein banding virus，SVBV） 、草莓斑駁病毒（Strawberry mottle virus，SMoV） 、草毒皺縮病毒 （ Strawberry crinkle virus，SCV） 和草莓輕型黃邊病毒 （ Strawberry mild yellow edge virus，SMYEV）。露地常規(guī)繁殖的草莓種苗病毒感染率為每年20%～30%，導(dǎo)致產(chǎn)量降低20%～50%[6-8]。病毒病已經(jīng)發(fā)展成為草莓主要病害之一，但目前仍沒有特效藥劑或有效的田間管理方法進(jìn)行防治解決[9]。有些種植戶會盲目用藥，不僅起不到消除病毒的作用，反而會對草莓的品

質(zhì)產(chǎn)生不良效果，嚴(yán)重影響鮮食采摘，甚至?xí)Σ葺a(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展產(chǎn)生巨大影響，因此，根除草莓常見病毒和其他病原菌對草莓產(chǎn)業(yè)發(fā)展至關(guān)重要。通過組織培養(yǎng)方法進(jìn)行草莓脫毒，已經(jīng)成為目前恢復(fù)草莓種性和維持優(yōu)良性狀的最有效途徑。通過脫毒處理的草莓苗，具有長勢旺盛、根系發(fā)達(dá)、抗病性強(qiáng)、植株整齊一致、產(chǎn)量和品質(zhì)顯著提高的優(yōu)勢，還能縮短育種繁殖周期，提高繁殖能力和繁殖系數(shù)，且培育不受季節(jié)性的影響，易于規(guī)?；a(chǎn)[10-15]。根據(jù)組織培養(yǎng)選取的外植體不同，分為莖尖培養(yǎng)、葉片培養(yǎng)、葉柄培養(yǎng)、花藥培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)及胚培養(yǎng)[16-21]。綜合來看，草莓莖尖培養(yǎng)脫毒效果最好，培養(yǎng)的植株生長勢良好，是目前大規(guī)模生產(chǎn)培育草莓脫毒苗最廣泛、最有效的途徑[22]。近年來，國內(nèi)外關(guān)于草莓莖尖脫毒組培的研究報道較多，但缺乏整個草莓莖尖脫毒繁育體系的比較和總結(jié)。筆者從草莓匍匐莖消毒處理、莖尖選取、培養(yǎng)基篩選、病毒檢測、多種脫毒方式結(jié)合脫毒、馴化移栽、種苗繁育等方面綜述了草莓莖尖脫毒繁育體系的研究進(jìn)展，以期為草莓莖尖脫毒繁育體系的建立提供參考。

1 莖尖消毒

草莓莖尖脫毒體系中用于對匍匐莖莖尖進(jìn)行消毒的試劑種類、濃度及消毒時間的合理組合，不僅能夠降低污染率和褐化率，而且還能提高脫毒苗的成活率，成為草莓莖尖脫毒體系最初的重要環(huán)節(jié)。陳英等[23]研究發(fā)現(xiàn)，采用 75% 乙醇浸泡 30 s、0.1% HgCl2消毒 5 min 可以有效地將匍匐莖污染率控制在3.2%以下。李曉亮等[13]研究了 HgCl2濃度及其消毒時間對“鬼怒甘”草莓莖尖組織培養(yǎng)的影響，發(fā)現(xiàn)同一HgCl2濃度處理下，消毒時間越久，莖尖污染率越低，但死亡率增加，最佳的消毒處理是0.20% HgCl2 8～11 min。姚思楊

等[24]研究了滅菌時間對“紅顏”莖尖的污染率及成活率的影響，結(jié)果表明75%乙醇消毒 30 s、0.1% HgCl2 消毒 7 min，成活率可達(dá) 91.10%，同樣取得了很好的滅菌效果。HgCl2是劇毒化學(xué)藥品，會給環(huán)境造成較大污染，因此其他安全有效的消毒劑也被研究應(yīng)用。連朋等[25]研究發(fā)現(xiàn)用 10% NaClO對“香野”草莓外植體消毒 5 min 可達(dá)到最好的消毒效果，成活率最高為64.44%。張黎鳳等[26]選用3%的H2O2對“紅顏”草莓匍匐莖莖尖消毒10 min，可使其污染率降至23.2%。消毒時間的長短也會直接影響外植體成活率和污染率，通常隨著消毒時間的延長污染率呈下降趨勢，但會導(dǎo)致外植體褐化率的升高，致使成活率下降，因此應(yīng)選擇適宜的消毒時間中和成活率和污染率。李慧[27]研究發(fā)現(xiàn)將“紅顏”草莓莖尖在0.1% HgCl2 +3滴吐溫-80溶液中浸泡 5 min時，消毒組合效果最好。和秀云等[28]提出了用0.1% HgCl2對“托特目”草莓莖尖進(jìn)行表面消毒時，12 min時最佳，存活率達(dá) 87.5%。莊瑩[29]以法蘭地草莓匍匐莖尖為試材，研究了不同消毒時間對草莓出芽率的影響，結(jié)果表明經(jīng)過兩次消毒的外植體，出芽率越高，受到病毒感染的影響越小。

2 莖尖選取

草莓莖尖脫毒是利用解剖鏡在無菌操作臺上切取草莓莖尖生長點(diǎn)接種于最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，進(jìn)行離體培養(yǎng)獲得草莓無毒苗的一種方法。莖尖培養(yǎng)脫毒效果與莖尖的大小密切相關(guān)，草莓莖尖分生組織是其細(xì)胞生長、分裂最為旺盛的組織，該部位沒有維管束，而病毒只能從胞間連絲傳遞，速度低于細(xì)胞分裂和生長速度，使得分生區(qū)域內(nèi)生長點(diǎn)帶病毒的數(shù)量極少。因此，利用這個部位來進(jìn)行組織培養(yǎng)就可以有效地脫去病毒，獲得健康無病毒種苗。一般來說，在草莓莖尖分生組織1.0 mm 的范圍內(nèi)病毒含量已經(jīng)極低，但通常為了取得更好的脫毒效果，在保證成活率的前提下要盡量切取較小的莖尖。聶園軍等[30]發(fā)現(xiàn)接種0.3～1.0 mm的草莓莖尖都可以誘導(dǎo)出苗，當(dāng)莖尖點(diǎn)在0.8～1.0 mm 時，成活率高達(dá)93.3%，但脫毒率僅有60.7%。晁慧娟等[31]的研究表明，接種1.0 mm 的莖尖萌發(fā)率為 62%，而接種 0.2 mm 的莖尖的萌發(fā)率僅為 6.0%。楊波等[16]取0.4 mm的“京藏香”草莓莖尖進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，檢測后發(fā)現(xiàn)，SMoV和SMYEV脫除率為100%，SVBV的脫除率為82%。鄧淵[32]研究了莖尖大小對兩種草莓的脫毒效果，切除草莓莖尖為 0.3 mm 長度時，“紅顏”和“阿蘇的小雪”草莓完全脫毒，長度>0.5 mm時則無法保證完全脫毒。何歡樂等[33]研究發(fā)現(xiàn)，大小為0.2、0.5和1.0 mm的“豐香”草莓莖尖成活率分別為100%、90%和72%，可見剝?nèi)〉那o尖大小對草莓的脫毒率有直接影響。李慧[27]發(fā)現(xiàn)若“紅顏”草莓莖尖太小，其分化能力就差，分化苗生長也較慢，認(rèn)為帶有最后一對幼葉而無頂端下組織、大小在0.35 mm 左右的莖尖是最適宜的分離培養(yǎng)材料。金真等[34]研究發(fā)現(xiàn)莖尖大小對存活率存在顯著影響，研究發(fā)現(xiàn)莖尖≤0.2 mm 的成活率僅為 20.0%，莖尖 0.2～0.4 mm的成活率為 62.5%，莖尖≥0.4 mm的成活率達(dá) 75.0%。

3 培養(yǎng)基篩選

3.1 誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選

誘導(dǎo)培養(yǎng)是草莓莖尖脫毒培養(yǎng)的第一步，也是決定草莓脫毒是否成功最關(guān)鍵的一步。對草莓匍匐莖尖進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理后切取適宜大小的莖尖接種到適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在合適的環(huán)境下培養(yǎng)一段時間，即可萌發(fā)出叢生芽。誘導(dǎo)外植體萌發(fā)的過程中發(fā)現(xiàn)，選擇合適的培養(yǎng)基以及添加適量的激素也是影響外植體萌發(fā)的關(guān)鍵因素。大多數(shù)草莓脫毒體系的培養(yǎng)基均使用MS培養(yǎng)基[35]，而外源激素常見的有6-芐氨基嘌呤（6-BA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2，4-D）、吲哚丁酸（IBA） 等。激素的種類、配比不同對莖尖誘導(dǎo)萌發(fā)的影響具有顯著性差異，一般來說，細(xì)胞分裂素濃度高于生長素濃度容易誘導(dǎo)產(chǎn)生新芽，適宜誘導(dǎo)培養(yǎng)[36]。穆廷云[37]研究發(fā)現(xiàn)，6-BA對“紅頰”草莓莖尖的成活與生長有重要意義，但濃度不宜過高，否則會抑制莖尖的分化;而添加 IBA 后，莖尖成活率和苗高反而降低，最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS+6-BA 1.0 mg/L;但張建盈等[38]研究發(fā)現(xiàn)，“白雪公主”草莓最適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+蔗糖20 g/L+瓊脂5.5 g/L，誘導(dǎo)率達(dá)82%以上，這可能與草莓品種存在差異有關(guān)。王禹等[39]以“童子一號”草莓的莖尖為外植體，研究了適宜的草莓莖尖生長培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2～0.5 mg/L NAA。于非[12]認(rèn)為“章姬”和“紅顏”草莓的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS+0.7 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，萌發(fā)率分別達(dá)到 88% 和 90%。羅靜靜等[40]研究發(fā)現(xiàn)MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA的組合是“妙香7號”草莓莖尖不定芽萌發(fā)的最佳培養(yǎng)基。張黎鳳等[26]研究發(fā)現(xiàn)，NAA 所占比例越大，褐化數(shù)會逐漸增多，6-BA 和 NAA 有一定的比例，才能促使芽增長，篩選誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L。王馨等[41]研究了不同濃度 NAA 和 2，4-D 對“丹莓 1 號”草莓莖尖不定芽誘導(dǎo)的影響，研究發(fā)現(xiàn)在各自最佳濃度狀態(tài)下，添加2，4-D后的莖尖誘導(dǎo)率可達(dá)92%，比NAA高10個百分點(diǎn)，最終選擇MS +1.0 mg/L 2，4-D，誘導(dǎo)率為92%。其他激素如激動素（KT）、赤霉素（GA3）、噻苯?。═DZ）在莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中也有應(yīng)用。連朋等[25]研究了不同激素處理對“香野”草莓莖尖誘導(dǎo)分化的影響，發(fā)現(xiàn)在 MS 培養(yǎng)基中添加1.0 mg/L TDZ和0.1 mg/L NAA，可以誘導(dǎo)分化率高達(dá)67.78%。王瑋瑋等[42]研究發(fā)現(xiàn)激素、活性炭對“紅顏”草莓莖尖誘導(dǎo)影響顯著， MS+6-BA 0.5 mg/L+GA3 0.1 mg/L+KT 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L+活性炭1.0 g/L 為最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基，能夠降低褐變率，促進(jìn)萌發(fā)。

3.2 增殖培養(yǎng)基篩選

草莓匍匐莖莖尖接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基生長一段時間后，分化產(chǎn)生叢生芽，但此時誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)已經(jīng)不足以支持叢生芽的生長，同時叢生芽會產(chǎn)生一些代謝產(chǎn)物，對叢生芽的生長產(chǎn)生負(fù)作用，此時需要增殖繼代培養(yǎng)將這些組織轉(zhuǎn)移到新的增殖培養(yǎng)基上，以達(dá)到大量繁殖的目的。在增殖培養(yǎng)過程中，植物生長調(diào)節(jié)劑仍是影響外植體擴(kuò)繁系數(shù)的關(guān)鍵因素。在對薔薇科草莓屬的增殖培養(yǎng)研究中發(fā)現(xiàn)，影響莖尖增殖的主要細(xì)胞分裂素是6-BA和TDZ，生長素是NAA、2，4-D和IBA[43-44]。甘文嫻[45]在研究不同激素濃度對“石莓7號”增殖培養(yǎng)的影響時發(fā)現(xiàn)，添加6-BA 0.5 mg/L和IBA 0.15 mg/L有利于草莓組培苗增殖，增殖倍數(shù)高達(dá)4倍;而趙艷華等[46]則選擇MS+BA 0.5 mg/L+IAA 0.05 mg/L 為增殖培養(yǎng)基，其增殖系數(shù)較高，為3.5。翟婷婷等[47-48]綜合增殖系數(shù)與苗高2種因素，發(fā)現(xiàn)最適宜“甜查理”“豐香”2個草莓品種的增殖培養(yǎng)基分別為MS+0.3 mg/L 6 -BA+ 0.5 mg/L NAA，增殖系數(shù)達(dá)到4.09，苗高達(dá)到2.5 cm。MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，增殖系數(shù)達(dá)到4.50，苗高達(dá)到1.63 cm。陳英等[23]采用MS+0.2 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IBA+3%糖+0.6%卡拉膠+中苗期+每塊 3 個芽的切割方式，可以使“紅顏”草莓達(dá)到6.25的最佳增殖系數(shù)。金真等[34]綜合增殖系數(shù)與增殖苗的品質(zhì)等多重因素獲得適合“章姬”草莓增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L，增殖系數(shù)為3.8。苗徐靜[49]

在優(yōu)化貴州主栽草莓品種“章姬”和“紅顏”草莓的離體快繁技術(shù)體系時研究發(fā)現(xiàn)，二者的最佳增殖培養(yǎng)基為：MS+0.5 mg/L BA+ 0.1 mg/L IBA+30 g/L 蔗糖+ 7 g/L 瓊脂，pH（5.8～6.0），增殖系數(shù)分別為4.9和1.9。利爽等[50]對適宜“赤顏”草莓增殖的細(xì)胞分裂素進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)在MS培養(yǎng)基（附加NAA 0.04 mg/L）添加BA 1.2 mg/L，其增殖系數(shù)高達(dá)12.4。Cappelletti 等[51]認(rèn)為當(dāng)TDZ 0.5 mg/L與2，4-D 0.02 mg/L 配合使用時能夠有效提高“Calypso”草莓的增殖效率同時抑制莖的伸長生長。由此可以看出不同品種的草莓增殖其所適宜的激素種類和濃度不盡相同。

3.3 生根培養(yǎng)基篩選

當(dāng)增殖培養(yǎng)通過多次繼代增殖后，外植體會繁殖到一定數(shù)量。此時，需將長勢健壯的外植體轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)。只有生根培養(yǎng)到一定階段，脫毒苗生長健壯，株高、生根量充足時才能進(jìn)行移栽馴化。生根培養(yǎng)過程外植體只生根壯苗，不進(jìn)行分化增殖，因此在激素選擇時僅適用適量的生長素而不適用細(xì)胞分裂素。王亞妮等[52]研究發(fā)現(xiàn)不同IBA濃度對脫毒草莓苗生根有顯著差異，當(dāng) IBA 濃度為 0.3 mg/L 時，草莓苗生根最好，根多且粗壯。潘忠強(qiáng)等[53]發(fā)現(xiàn) NAA 對于生根數(shù)的影響比 BA 更加明顯，而NAA的最適濃度為 0.3 mg/L。于紅梅等[54]以“寧豐”草莓組培初代苗為試材，研究了其生根培養(yǎng)基的最佳配比，發(fā)現(xiàn)生根培養(yǎng)基以添加 0.05 mg/L NAA 或0.3 mg/L IBA 的 1/2MS 培養(yǎng)基較為理想，平均生根數(shù)在 15 條以上。艾尚杰等[55]發(fā)現(xiàn)在 1/2MS+0.1 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA的生根培養(yǎng)基中，“夢”草莓根系生長良好，生根率達(dá) 100%，生根數(shù)達(dá) 12.8。此外，活性炭濃度和是否添加矮壯素也對脫毒草莓苗的生根有一定影響。胡婷婷等[56]研究發(fā)現(xiàn)添加0.5 g/L的活性炭對“貝吉佳”草莓的生根效果最好，根粗壯、須根最多，生根率可達(dá) 100% 。關(guān)清文等[57]認(rèn)為1/2MS +0.5 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+0.1 g/L活性炭的培養(yǎng)基是“赤顏”草莓組培苗的最佳生根培養(yǎng)基。桑乃軍[58]研究發(fā)現(xiàn)在“紅艷”草莓生根培養(yǎng)基中添加0.04 mg/L 的矮壯素，其莖粗、不定根條數(shù)和SOD活性分別比對照高出18.5%、7.01%和35.3%，移栽成活率高達(dá)91.7%。

4 多種脫毒方式結(jié)合

草莓莖尖脫毒可在一定程度上“去病毒”，但取決于切取莖尖的大小，莖尖過大，成活率高，脫毒率低;反之，脫毒率高，成活率低。雖然莖尖培養(yǎng)是獲得脫毒苗的最有效手段，但存在易污染、效率低等問題，探索更高效、便捷的脫毒方法勢在必行。以莖尖脫毒培養(yǎng)為基礎(chǔ)，結(jié)合多種脫毒方法可以在切取相對較大的莖尖時，同時保證成活率和脫毒率，大大提高脫毒苗的生產(chǎn)效率。高遐虹等[59]采用二次莖尖脫毒，4種病毒的脫除率達(dá)100%。何歡樂等[33]采用改良莖尖培養(yǎng)脫毒法，即二次培養(yǎng)脫毒法，脫毒率高達(dá)100%，但成活率僅為26.67%。趙海紅[60]采用熱處理和二次莖尖培養(yǎng)相結(jié)合的方法，可使成苗率和脫毒率分別達(dá)60.33%和 80.58%，且成本較低。劉健等[61]發(fā)現(xiàn)經(jīng)40～42 ℃水浴處理匍匐莖后再剝?nèi)∏o尖，脫毒率可達(dá)100%，但綜合成活率考慮，用40 ℃處理最佳。陳婕等[62]在莖尖脫毒組培的基礎(chǔ)上研究發(fā)現(xiàn)熱處理結(jié)合 25 μg/mL病毒醚的化學(xué)處理，可顯著降低組培苗的株高，增加根數(shù)、根長和增殖系數(shù)，移栽成活率高達(dá) 94%。盛宏亞等[63]以攜帶SMoV的“紅顏”草莓為材料，通過對玻璃化超低溫脫毒技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化，建立了適合“紅顏”莖尖玻璃化超低溫脫毒體系。羅婭等[64]以感染4種病毒的“紅顏”草莓莖尖為試材，優(yōu)化了超低溫療法中莖尖長度以及關(guān)鍵程序，建立起完善的草莓超低溫療法脫毒技術(shù)體系，莖尖存活率為68.89%，脫毒率為100%。竇炎丹[65]以“白雪公主”草莓莖尖為試材，對超低溫處理體系進(jìn)行優(yōu)化完善，成活率高達(dá)36.12%。聶園軍等[30]認(rèn)為組培苗再生匍匐莖莖尖培養(yǎng)法在相同莖尖長度時，脫毒率和生存率比直接莖尖培養(yǎng)、熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)更高，且莖尖長度為0.8～1.0 mm時，其存活率和成活率高達(dá)到93.3%和96.4%。

5 病毒檢測

通過莖尖脫毒獲得的草莓苗一般在增殖階段前進(jìn)行病毒檢測，經(jīng)檢測鑒定不含指定病毒時，才進(jìn)行性增殖擴(kuò)繁。草莓病毒的檢測是草莓脫毒種苗繁育體系中的關(guān)鍵技術(shù)之一，建立快速、準(zhǔn)確的草莓病毒檢測體系具有十分重要的意義[66]。草莓病毒檢測主要有指示植物檢測法、電鏡檢測法、血清學(xué)檢測法和分子生物學(xué)檢測法，但前三者存在諸多局限性[67]。分子生物學(xué)檢測法以核酸分子雜交為基礎(chǔ)，因其靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速、簡便等特點(diǎn)成為當(dāng)前病毒檢測最主要方法，尤其 RT-PCR和多重 RT-PCR在草莓病毒鑒定方面應(yīng)用極其廣泛[68]。楊波[69]建立了3種病毒的多重 RT-PCR檢測體系，其檢測結(jié)果與單一RT-PCR一致。陳曉軍等[70]用 RT-PCR 建 立 了 能 同 時 對SMoV、SVBV、SCV 和 SMYEV? 進(jìn)行檢測的方法。朱海生等[71]對多重 RT-PCR 引物濃度進(jìn)行調(diào)整，同時優(yōu)化了反應(yīng)條件和參數(shù)，最終建立多重 RT-PCR 檢測方法，實(shí)現(xiàn) 4 種病毒的同時快速檢測，并且具有良好的特異性和敏感性。王運(yùn)生等[72]用RT-PCR 對SMoV、SMYEV、SVBV、SCV 和黃瓜花葉病毒（cucumbermosaic virus，CMV）5種草莓病毒進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)SVBV 普遍發(fā)生，而 SCV 則很少檢測到。韓曉玉[73]根據(jù)已獲得的5種草莓病毒的序列，設(shè)計(jì)特異性引物，通過摸索退火溫度和時間，建立了5種草莓病毒的多重PCR擴(kuò)增體系，擴(kuò)增長度分別為SVBV 816 bp、SMoV 620 bp、SMYEV 444 bp、草莓白化病毒（strawberry pallidosis-associated virus，SPaV） 276 bp和草莓壞死休克病毒（strawberry necrotic shock virus，SNSV） 134 bp。Bartsch 等[74]以冷凍草莓為材料，建立了檢測 GII 型諾如病毒的RT-PCR 體系。

6 馴化移栽

草莓脫毒苗是在恒溫、高濕、無菌的培養(yǎng)基中生長出來的，對外界環(huán)境適應(yīng)性差，直接移栽成活率不高，需要在溫室或大棚進(jìn)行過渡，以適應(yīng)外界生長環(huán)境。因此，適當(dāng)?shù)牟僮鲗γ摱久绲鸟Z化移栽起著重要作用?；|(zhì)是脫毒苗出甁后馴化移栽這一過渡階段的重要載體，優(yōu)質(zhì)適宜的栽培基質(zhì)是保證幼苗健壯成長的基礎(chǔ)。張東輝[75]研究發(fā)現(xiàn)4種不同草莓品種在由草炭和珍珠巖組成的混合基質(zhì)中成活率均為最高，都在90%以上。于紅梅等[54]研究發(fā)現(xiàn)，在蛭石作為“寧豐”草莓組培苗移栽馴化基質(zhì)的固定成分的條件下，降低泥炭體積比例可提高移栽成活率，選用馴化基質(zhì)體積配比泥炭∶珍珠巖∶蛭石為 3∶2∶1移栽成活率達(dá)100%，平均葉柄長和新生葉片數(shù)都表現(xiàn)較好，分別達(dá)1.97 cm、2.22片。胡婷婷等[56]研究了6種不同材料和配比的移栽基質(zhì)對成活率的影響，研究表明，雖然各種基質(zhì)上的苗均可以正常開花結(jié)果、正常抽生匍匐，但珍珠巖∶蛭石 = 1∶1的基質(zhì)組合中，“貝吉佳”草莓成活率明顯高于腐殖土和沙子的基質(zhì)組合，成活率最高可達(dá) 98.1%。曹彩紅等[76]研究了以草炭、蛭石、珍珠巖和商品基質(zhì)為原材料的6種不同基質(zhì)配比對草莓脫毒苗馴化移栽的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明，與對照（草炭∶蛭石∶珍珠巖=2∶1∶1）相比，在基質(zhì)（草炭∶蛭石=2∶1）生長的草莓，其各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于對照及其他基質(zhì)類型。王馨等[41]的研究表明，基質(zhì)（苗圃土∶蛭石∶珍珠巖=1∶2∶1） 為“丹莓1號”草莓組培苗最佳移栽基質(zhì)，同時發(fā)現(xiàn)，生長于消毒處理過的移栽基質(zhì)中，草莓的生長狀態(tài)要優(yōu)于生長于未經(jīng)消毒處理的移栽基質(zhì)中的草莓，成活率也顯著增高。姚思楊等[24]研究發(fā)現(xiàn)草炭土比園土更適宜草莓組培苗生長，適量增加草炭土在基質(zhì)中的占比，更適于植株生長，得出最佳栽培基質(zhì)為：V（草炭土）∶V（蛭石）∶V（珍珠巖）=2∶1∶1，組培苗成活率可達(dá) 100%，且植株生長健壯。鄧淵[32]改良了草莓組培苗的馴化方法，洗去根部培養(yǎng)基后，將組培苗定植于裝滿基質(zhì)的萌發(fā)盒中，隨著時間推移逐步降低濕度，3 d后打開萌發(fā)盒上蓋繼續(xù)光照培養(yǎng)，14 d后進(jìn)行溫室移栽，成活率可達(dá)100%。

7 種苗繁育

草莓脫毒苗經(jīng)移栽馴化后要進(jìn)行種苗繁育，以通過無性繁殖產(chǎn)生大量匍匐莖，從而獲得生產(chǎn)苗。通過建立優(yōu)良的無病毒原種苗保存圃和無病毒生產(chǎn)苗繁育圃的，同時進(jìn)行適當(dāng)管理，可以提高種苗繁殖系數(shù)、降低病蟲害風(fēng)險、提高收益。為減少直接在組培瓶內(nèi)進(jìn)行增殖而造成的后代變異，可采用40目的網(wǎng)室進(jìn)行脫毒一代苗和生產(chǎn)苗的繁育增殖及病蟲害防治，同時也能降低生產(chǎn)風(fēng)險，提高經(jīng)濟(jì)效益[77]。張恒[78]用蛭石+IBA溶液作為草莓大苗沙盤生根培養(yǎng)基，利用保鮮膜對沙盤進(jìn)行保濕，可保障草莓繼代培養(yǎng)的大苗在沙盤里生根，將該技術(shù)應(yīng)用于草莓脫毒苗的擴(kuò)繁，可節(jié)約大量成本。鄒小花等[79]研究表明“紅顏”脫毒苗在單層 X 支架式立架栽培下生長勢較單層單列式立架栽培模式下株高、冠徑和單株匍匐莖數(shù)目分別增加了 6.10 cm、2.48 cm 與 2.77 條;常規(guī)地壟式栽培比立架栽培植株生長勢和繁苗率高，株高、平均冠徑及單株匍匐莖數(shù)較立架栽培分別高5.48 cm、5.47 cm 和 3.60 條;但采用常規(guī)栽培方式促生匍匐莖繁苗，需特別防范病蟲危害，匍匐莖直接接觸地表很容易受病蟲影響而減產(chǎn)。左麗娟等[80]研究發(fā)現(xiàn)氮肥對草莓脫毒種苗繁育量的影響最大，磷肥其次，鉀肥最小;當(dāng)?shù)租浥涫镹 180 kg/hm2、P2O5 150 kg/hm2和 K2O 150 kg/hm2能獲得最高的產(chǎn)量和效益，給玉溪地區(qū)草莓脫毒種苗繁育施肥提供了理論依據(jù)。陸玉英等[14]總結(jié)了“甜查理”草莓脫毒苗在廣西南寧的引種表現(xiàn)及配套栽培術(shù)，解決了該地區(qū)草莓定植期高溫容易造成幼苗被灼傷及植株生長后期的低溫陰雨潮濕天氣造成爛果及植株病害等問題。王禹[81]從材料選擇、組培苗培養(yǎng)馴化管理、田間定植及管理、病蟲害防治等方面闡述了黑龍江草莓脫毒種苗繁育技術(shù)，解決了草莓生產(chǎn)中田間無性繁殖造成的種性退化。錢長根等[82]就傳統(tǒng)草莓莖尖脫毒技術(shù)所存在的問題進(jìn)行了研究，摸索出了一套草莓根尖脫毒組培快繁及規(guī)?；a(chǎn)技術(shù)，該方法具有操作簡便、效率高、消毒易徹底、組培苗污染率低、繁殖速度快等優(yōu)點(diǎn)。田宗軒等[83]闡明了草莓脫毒苗的兩段繁育技術(shù)體系，即原原種苗—原原種苗的馴化在脫毒組培中心進(jìn)行，原種苗、良種苗繁殖在高山露地良種苗圃進(jìn)行。

8 其他

除上述因素外，培養(yǎng)基組分、培養(yǎng)環(huán)境及添加劑等因素也是影響草莓脫毒苗成活及降低玻璃化率、褐化率及畸形苗率的重要因子。姚思楊[84]研究表明，相較于WPM及B5培養(yǎng)基， MS 培養(yǎng)基更適于“紅顏”草莓不定芽的誘導(dǎo)分化。利爽[85]在“JS”草莓增殖試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)蔗糖是草莓增殖的最佳碳源，最佳濃度為 30 g/L。甘文嫻[45]研究發(fā)現(xiàn)草莓繼代時間為 30～60 d 時草莓增殖狀態(tài)均良好，60 d 時增殖系數(shù)最大。值得注意的是外源激素的濃度不易過高，適當(dāng)降低外源激素濃度會使組培苗生長勢良好，畸形苗和玻璃化苗減少[86]，并且激素濃度過高會產(chǎn)生高變異率[87]。胡穎[88]研究表明，在一定范圍內(nèi)，封口膜越是透氣玻璃化苗越少;瓊脂濃度越大玻璃化苗越少，一般8 g/L最佳;適當(dāng)降低6-BA 、銨根離子濃度及瓶內(nèi)濕度能減少玻璃化苗。付崇毅等[89]研究表明，采用300 mg/L的 VC 溶液預(yù)浸泡12 min后，在培養(yǎng)基中添加 1.5 g/L 抗氧化劑PVP對草莓莖尖褐化的發(fā)生抑制效果最好，莖尖愈傷組織萌發(fā)率達(dá)到 100%。

9 小結(jié)與展望

自繁自育的栽培模式仍是我國草莓栽培的主要方式，長期無性繁殖和多年連續(xù)栽培而未進(jìn)行種苗脫毒，造成種苗病毒病高發(fā)，影響草莓產(chǎn)量和品質(zhì)。隨著草莓莖尖脫毒體系的建立，草莓的種性恢復(fù)、種苗繁育、栽培管理及產(chǎn)量品質(zhì)都有了長足的進(jìn)步，草莓脫毒苗的組培快繁及應(yīng)用成為防治草莓病毒病的根本對策。但是，草莓莖尖脫毒體系仍存在諸多問題需要解決：①剝離莖尖難度大，操作易被污染，玻璃化、易褐化等問題依然存在，誘導(dǎo)分化成苗所需時間較長，工作效率低;②RT-PCR病毒檢測操作步驟煩瑣，不適宜大規(guī)模工廠化脫毒苗檢測;③草莓脫毒苗生產(chǎn)成本高，普通種植戶較難承受，推廣應(yīng)用率較低。

今后，草莓莖尖脫毒體系的研究發(fā)展應(yīng)側(cè)重于以下幾個方面：①進(jìn)一步完善多種脫毒方式相結(jié)合的脫毒體系，解決莖尖大小與成活率和脫毒率之間的矛盾;②改進(jìn)甚至革新檢測方法，建立草莓病毒標(biāo)準(zhǔn)化檢測體系，運(yùn)用新技術(shù)以提高檢測的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性，簡化檢測步驟;③探索操作環(huán)節(jié)簡單、符合生產(chǎn)實(shí)際且節(jié)能環(huán)保高效的繁育體系，降低技術(shù)及生產(chǎn)成本。

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