高效液相色譜法測定健胃散中熊果酸的含量

李華岑，劉素梅，邱天寶，韓 江

（1.河南省獸藥飼料監(jiān)察所，河南 鄭州 450008；2.河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院）

健胃散是《中國獸藥典》（2015年版）中的經(jīng)典方劑，其功效為消食下氣，開胃寬腸。大量的臨床實驗證明健胃散能預(yù)防和治療胃腸道疾病，能提高動物的生長性能。為提高健胃散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，建立了一種高效液相色譜法測定健胃散中熊果酸的含量的新方法，該法簡單、準(zhǔn)確，可以較好地控制健胃散中熊果酸的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與設(shè)備

Waterse2695高效液相色譜儀，配紫外檢測器；XBridge?C18色譜柱；METILERXP205電子天平。

1.2 試藥及試劑

山楂、檳榔、六神曲、麥芽、熊果酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111742-201823)，甲醇、乙腈為色譜純試劑，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 實驗方法

2.1 色譜條件

XBridge?C18色譜柱（5μm，4.6NN 150mm），流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（80∶20），柱溫為25℃，檢測波長為210nm，進樣量為10μl。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液的制備

精密稱取熊果酸對照品10mg，置100ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲溶解，加甲醇稀釋至刻度線，搖勻；使用時用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取健胃散陽性樣品1g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加甲醇至近刻度，超聲30min，加甲醇至刻度線，搖勻，即得；取健胃散陰性樣品0.68g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加甲醇至近刻度，超聲30min，加甲醇至刻度線，搖勻，即得。

3 結(jié)果與討論

3.1 線性與范圍

精密稱取熊果酸對照品10mg，置100ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲溶解，加甲醇稀釋至刻度線，搖勻；使用前用甲醇稀釋成濃度為5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作液，備用，使用時用0.45μm的微孔濾膜過濾，注入液相色譜儀，保存色譜圖，用對照品溶液濃度與相應(yīng)組分峰面積計算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。得到回歸方程為A=4518.8C+684.81，相關(guān)系數(shù)r=1.0000，即在5～100μg/ml的濃度范圍內(nèi)和峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

3.2 專屬性

分別稱取健胃散陽性樣品、健胃散陰性樣品、熊果酸對照品按照樣品制備方法，在2.1的色譜條件下，記錄色譜圖。根據(jù)所得到的色譜圖可知，熊果酸陰性樣品色譜圖中在熊果酸對照品色譜峰位置無相應(yīng)的色譜峰，說明專屬性良好。

3.3 精密度

取100μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作液，在2.1色譜條件下重復(fù)進樣6次，記錄色譜圖，計算得到100μg/ml對照品溶液中熊果酸峰面積的RSD為0.06%，結(jié)果表明方法精密度良好。

3.4 準(zhǔn)確度

精密稱取健胃散陰性藥材6份，每份為0.68g，按照2.3項下制備樣品溶液，分別精密加入100μg/ml的熊果酸對照溶液18μl，在2.1色譜條件下進行測定，記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。健胃散陰性樣品中熊果酸平均回收率為99.7%，RSD值為0.2%。

3.5 穩(wěn)定性

按照.2.3項下操作制備1份健胃散陽性樣品溶液，分別在0、2、4、6、8、12h以2.1為色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。健胃散陽性溶液中熊果酸色譜峰面積的RSD值為1.38%，結(jié)果表明樣品在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.6 重復(fù)性

精密稱取同一批健胃散陽性樣品6份，每份1g，精密稱定，照2.3項下方法制備供試品溶液，在2.1為色譜條件下測定，記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。健胃散陽性樣品中熊果酸的平均含量為1.82mg/g，RSD值為1.73%，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。