陰道微生態(tài)與人乳頭瘤病毒感染相關(guān)性研究

吳翠翠，吳志堅，宋伶俐

(北華大學附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132011)

陰道微生態(tài)是一個動態(tài)相對平衡的靈敏體系，正常狀態(tài)下可分離出50多種微生物，易受內(nèi)、外環(huán)境的影響，其中主要優(yōu)勢菌是乳酸桿菌.乳酸桿菌的下降可導致條件致病菌的過多生長，是女性陰道微生態(tài)體系失衡的主要原因[1].陰道微生態(tài)的改變與人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染有一定的相關(guān)性.本研究通過對HPV陽性和HPV陰性患者陰道分泌物白帶常規(guī)測定，分析陰道微生態(tài)的特點和HPV感染之間的關(guān)系，探討通過乳酸桿菌膠囊陰道給藥后陰道內(nèi)環(huán)境改變對HPV陽性患者轉(zhuǎn)陰率的影響.

1 資料與方法

1.1 研究對象

對2019年1月—2019年9月北華大學附屬醫(yī)院門診婦科全檢患者進行陰道分泌物采集，行HPV測定.選取HPV陽性和陰性各100例，HPV陽性患者年齡20～68歲，平均(34.3±4.5)歲；HPV陰性患者年齡22～65歲，平均(33.8±5.0)歲，兩組數(shù)據(jù)資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性.

1.2 實驗材料

GMD-S600全自動婦科分泌物分析系統(tǒng)、OLYMPUS CX31 型生物顯微鏡、陰道分泌物分析試劑盒(長春迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司)；人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測試劑盒(雜交捕獲-化學發(fā)光法，杭州德同生物有限公司)；基因雜交信號放大系統(tǒng)(DML-2000，杭州德同生物技術(shù)有限公司).

1.3 方 法

1.3.1 采 樣

患者標本采集前一天禁止性交、盆浴、陰道灌洗及局部給藥等，采用無菌的棉拭子從患者陰道后穹隆及1/3處刮取分泌物，置入婦科全檢和HPV檢測專用采樣管內(nèi)，采樣2 h內(nèi)送檢.

1.3.2 陰道分泌物檢測

將陰道分泌物分析試紙條從2～8 ℃冰箱取出，平衡至室溫18～25 ℃，待用；用無菌拭子采集的樣本放入軟試管中，每個樣本加1.2 mL細胞保存液，反復刷洗拭子，使拭子樣本充分洗脫；取出陰道分泌物試紙條，將樣本分別滴加試紙上；試紙條放入GMD-S600全自動婦科分泌物分析系統(tǒng)中，(37±1) ℃溫育8 min后，與色標對比判讀結(jié)果(1 min內(nèi)).細菌性陰道炎(BV)診斷標準為線索細胞+唾液酸苷梅+白細胞酯酶+脯氨酸氨基肽酶；需氧型陰道炎(AV)診斷標準為過氧化氫酶+白細胞酯酶+β-葡聚糖醛酸酶.

1.3.3 人乳頭瘤病毒(HPV)測定

HPV高危型DNA檢測主要有2種HPV 亞型(16、18)和12種HPV亞型(31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68)的試劑盒(杭州德同生物技術(shù)有限公司)，嚴格按照人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測試劑盒(雜交捕獲-化學發(fā)光法)說明書操作，在基因雜交信號放大系統(tǒng)(DML-2000)上讀取數(shù)據(jù)，并分析結(jié)果.

1.3.4 乳酸桿菌陰道膠囊給藥

將100例HPV陽性患者分為50例觀察組和50例對照組，其中對照組定期隨訪，若存在陰道炎的患者接受常規(guī)陰道炎治療；觀察組采用乳酸桿菌陰道膠囊給藥，患者清洗外陰后，將膠囊置于陰道深部，1次/晚，1粒/次，連續(xù)15 d為1個療程，于月經(jīng)干凈后使用，共3個療程.

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結(jié) 果

所有患者行HPV和陰道分泌物白帶常規(guī)檢查，HPV陽性的100例患者中，乳酸桿菌異常83例，滴蟲4例，線索細胞43例，唾液酸苷酶陽性43例，β-葡聚糖醛酸酶陽性26例，酸堿度pH升高63例，明顯高于HPV陰性患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；100例HPV陽性患者中細菌性陰道炎43例，需氧型陰道炎26例，均高于HPV陰性患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05).通過乳酸桿菌膠囊陰道給藥，6個月后轉(zhuǎn)陰率為56%，12個月后轉(zhuǎn)陰率為84%，轉(zhuǎn)陰率明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05).見表1～2.

表1 陰道內(nèi)環(huán)境與HPV陽性和陰性結(jié)果Tab.1 Results of vaginal environment in HPV positive and negative patients

表2 兩組HPV陽性患者轉(zhuǎn)陰率Tab.2 Negative conversion rate of HPV positive patients in two groups

3 討 論

目前，宮頸癌已經(jīng)成為威脅女性健康的第二大惡性腫瘤，高危型HPV持續(xù)感染是大部分宮頸發(fā)生癌變的前提[2].陰道微生態(tài)環(huán)境的失調(diào)導致高危型HPV持續(xù)感染，然而大部分患者宮頸感染高危型HPV會自行消除[3]，只有當高危型HPV持續(xù)感染時才會發(fā)生上皮細胞內(nèi)瘤變(CIN)，其中部分患者會發(fā)展成宮頸癌[4].

正常情況下，女性陰道中微生物以乳酸含量最多，約占所有菌群的90%[5].乳酸桿菌與宮頸高危HPV持續(xù)感染有無關(guān)系說法不一.LEE等[6]的研究證實了陰道微生物多樣性和構(gòu)成與HPV 感染密切相關(guān)，乳酸桿菌還可能具有抵抗HPV 感染的能力.一項橫斷面研究[7]結(jié)果顯示：HPV 陽性組的加氏乳酸桿菌數(shù)量顯著增多，而雞乳桿菌和惰性乳酸桿菌在HPV陽性組和陰性組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).還有部分學者[8]持有不同意見，認為 HPV 感染與乳酸桿菌數(shù)量沒有關(guān)系.故在以后的研究中，探討乳酸桿菌與HPV 感染的具體機制，可能對HPV持續(xù)感染的治療提供新思路.

正常陰道菌群之間、菌群與機體之間應保持動態(tài)平衡，而當該平衡被打破，需氧菌大量增殖時可導致需氧性陰道炎，主要增殖菌為大腸埃希菌、無乳鏈球菌等陰性桿菌、球菌.需氧菌感染陰道后，陰道分泌物試紙條顯示過氧化氫酶+白細胞酯酶+β-葡聚糖醛酸酶.AV患者的陰道分泌物一般為膿性分泌物,pH>4.5,清潔度一般為Ⅲ～Ⅳ度.VIEIRA-BAPTISTA等[9]觀察到，AV會增加宮頸細胞異常的風險，是其獨立危險因素，但與HPV感染沒有相關(guān)性.本研究顯示：100例HPV陽性患者中需氧型陰道炎26例，高于HPV陰性的患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，與VIEIRA-BAPTISTA等[9]研究結(jié)果不一致.AV和HPV持續(xù)感染有一定關(guān)系，但由于本研究患者例數(shù)有限，關(guān)于AV與HPV感染相關(guān)性還有待進一步研究證實.

細菌性陰道炎(Bacterial Vaginosis，BV) 患者陰道中乳酸桿菌數(shù)量少，陰道內(nèi)多種細菌增加，如陰道加德納菌、厭氧菌等大量繁殖，正常菌群失調(diào)，導致混合感染.BV 的診斷方法較多，本研究采用陰道分泌物分析試紙條(迪瑞醫(yī)療科技有限公司)的診斷標準：線索細胞+唾液酸苷梅+白細胞酯酶+脯氨酸氨基肽酶.在育齡期女性中，BV 和高危型HPV(HR-HPV)感染多同時發(fā)生.有研究[10-11]表明：女性宮頸高危型HPV持續(xù)感染常見細菌多為陰道加德納菌，BV 患者陰道內(nèi)乳酸桿菌明顯低于正常健康女性，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05).由于陰道菌群乳酸桿菌的減少，使黏蛋白降解酶(如唾液酸酶)增多，宮頸黏膜屏障發(fā)生改變，產(chǎn)生H2O2的數(shù)量減少，并影響細胞因子的產(chǎn)生，從而增加HR-HPV感染機會，有研究[12-13]表明：在年齡小于35 歲和大于65 歲的女性中，多類型HPV 感染與陰道pH升高顯著相關(guān).

本研究發(fā)現(xiàn)：HPV陽性的100例患者中，乳酸桿菌異常83例，滴蟲4例，線索細胞43例，唾液酸苷酶43例，β-葡聚糖醛酸酶26例，pH升高63例，明顯高于HPV陰性患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05).其中100例HPV陽性患者中細菌性陰道炎43例，需氧型陰道炎26例，白假絲酵母菌14例，滴蟲性陰道炎8例，均高于HPV陰性的患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05).本研究結(jié)果顯示：觀察組采用乳酸桿菌陰道膠囊給藥，給藥6個月及12個月后HPV轉(zhuǎn)陰率分別為56%和84%，明顯高于臨床隨訪的對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05).這表明陰道微生態(tài)與HPV 感染具有密切的相關(guān)性，通過乳酸桿菌膠囊陰道給藥調(diào)節(jié)陰道內(nèi)環(huán)境，可有效提高HPV陽性患者轉(zhuǎn)陰率，有益于臨床治療.

綜上所述，陰道微生態(tài)的變化與宮頸HPV陽性的患者具有密切關(guān)系，而臨床通過應用乳酸桿菌陰道膠囊長期給藥顯著提高了HPV患者的轉(zhuǎn)陰率，在預防宮頸癌和提高HPV陽性患者轉(zhuǎn)陰率中具有臨床指導價值.